Page 91 - 《广西植物》2026年第3期
P. 91
３ 期 刘俊娜等: 抗金黄色葡萄球菌复方精油的药效物质与初步作用机制 ４ ６ ７
有精油分别装于棕色玻璃瓶中ꎬ４ ℃ 储存待用ꎮ 色葡萄球菌疾病靶点ꎮ 将复方精油 ２ 抗金黄色
临用前ꎬ分别取适量各单方精油和复方精油ꎬ 葡萄球菌的交集靶点ꎬ通过 ＤＡＶＩＤ 在 线 工 具 进
按体积 比 １ ∶ １０ 加 入 色 谱 甲 醇 溶 解 各 精 油ꎬ 经 行基因本体 ( ｇｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏｇｙꎬ ＧＯ) 功能和京都基
０.２２ μｍ 微孔滤膜过滤ꎬ分别配制得到待测精油供 因与基因组百科全书 ( ｋｙｏｔｏ ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ ｇｅｎｅｓ
试品溶液ꎬ用于 ＧＣ￣ＭＳ 分析和抗金黄色葡萄球菌 ａｎｄ ｇｎｏｍｅｓꎬ ＫＥＧＧ) 通路富集分析ꎮ 构建交集靶
活性研究ꎮ 点 的 蛋 白 质 － 蛋 白 质 互 作 ( ｐｒｏｔｅｉｎ￣ｐｒｏｔｅｉｎ
１.３ ＧＣ￣ＭＳ 分析 ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎꎬ ＰＰＩ) 网 络 和 “ 复 方 精 油 ２ － 成 分 － 靶
岛津 ＧＣＭＳ￣ＴＱ８０５０ ＮＸ 气相色谱 －三重四极 点－通路－抗金黄色葡萄球菌” 网络ꎬ最终筛选出
杆质谱联用仪ꎬ岛津 ＲＴＸ￣５ＭＳ 毛细管色谱柱(３０ 复方精油 ２ 抗金黄色葡萄球菌的活性成分、核心
ｍ × ０.２５ ｍｍꎬ ０.２５ μｍ)ꎮ 升温程序:６０ ℃ 起始ꎬ 靶点与药物作用机制ꎮ
￣１ 开展复方精油 ２ 抗菌活性成分、核心靶点的分
保持 ２ ｍｉｎꎻ５ ℃ ｍｉｎ 升温至 １８０ ℃ 保持 ２ ｍｉｎꎻ
２０ ℃ ｍｉｎ 升至 ２８０ ℃ 保持 ３ ｍｉｎꎮ 载气 Ｈｅꎬ流 子对接分析ꎮ 对复方精油 ２ 抗菌活性成分的分子
￣１
量 １.０ ｍＬｍｉｎ ꎻ进样口温度 ２８０ ℃ ꎻ不分流进样 三维结构进行 ＭＭ２ 力场优化ꎮ 从 ＲＣＳＢ 蛋白数据
￣１
１.０ μＬꎮ 质谱条件: ＥＩ 源ꎬ离子源 ２８０ ℃ ꎬ质量扫 库中 获 得 核 心 靶 点 蛋 白 的 三 维 结 构 文 件ꎬ 经
描范围 ｍ / ｚ 为 ５０ ~ ５００ꎮ ＮＩＳＴ ２０１７ 质谱库及文献 ＡｕｔｏＤｏｃｋＴｏｏｌｓ １.５.６ 软件对蛋白晶体结构进行初
比对用于植物精油挥发性成分鉴定ꎮ 始化处理ꎬ包括去除溶剂分子、水分子和配体ꎬ加
１.４ 抗金黄色葡萄球菌活性 氢、合并非极性氢、能量初始化等ꎬ准备 ｐｄｂｑｔ 文
６ 件ꎬ对接位点定义与相应的原始配体活性位点对
采用滤纸片扩散法ꎬ将浓度为 １ × １０ ＣＦＵ
ｍＬ 的金黄色葡萄球菌悬液 １５０ μＬ 均匀涂布于 应ꎮ ＡｕｔｏＤｏｃｋ Ｖｉｎａ １.１.２ 执行分子对接ꎬ选取结合
￣１
ＬＢ 固体培养基平板上ꎬ贴附直径 ６ ｍｍ 的含待测 能最低、亲和力最高的构象ꎬ导入 Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｔｕｄｉｏ
精油样品的无菌滤纸片ꎮ ３７ ℃ 培养 ２４ ｈ 后ꎬ游标 ２０１９ 进行可视化分析ꎮ
卡尺测量各精油抑菌圈的直径(ｎ ＝ ３)ꎮ
１.５ 复方精油抗金黄色葡萄球菌的作用机制 ２ 结果与分析
针对 ＧＣ￣ＭＳ 分析得到复方精油 ２ 的化学成
分ꎬ借助 ＳｗｉｓｓＡＤＭＥ 筛选出复方精油 ２ 的候选活 ２.１ 单方精油与复方精油成分鉴定
性化合物ꎬＳｗｉｓｓＴａｒｇｅｔＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎ 获得候选化合物 鉴于中药复方物质组成的复杂性ꎬ采用气相色
的作用蛋白靶点ꎬ去除无对应靶点的化学成分ꎮ 谱－质谱联用法(ＧＣ￣ＭＳ)技术对单方精油和复方精
通过 ＧｅｎｅＣａｒｄｓ、ＯＭＩＭ 和 ＮＣＢＩ 数据库汇总金黄 油进行组分分析ꎬ 图 １ 展示了复方精油 ２ 在 ＥＩ 离
图 １ 复方精油 ２ 的总离子流气相－质谱色谱图
Ｆｉｇ. １ ＧＣ￣ＭＳ ｔｏｔａｌ ｉｏｎ ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｏｉｌ ２
