Page 115 - 《广西植物》2026年第4期

４ 期 高建有等: 叶片水分亏缺对猕猴桃细菌性溃疡病抗性的影响 ６ ７ ３

面明确水分条件与 Ｐｓａ 感染的关联机制ꎮ 两组植株均在对应条件下预培养 ７ 天ꎬ每个
综上所述ꎬ结合国内部分地区猕猴桃控雨栽 处理设置 ３ 个重复ꎮ 使用 Ｓｃｈｏｌａｎｄｅｒ 便携式压力
培的生产实践ꎬ为给该栽培模式下的溃疡病防控 室(ＰＭＳ 仪器公司ꎬＣｏｒｖａｌｌｉｓꎬ美国) 对叶片进行水
提供理论依据ꎬ本研究以高感溃疡病的‘ 红阳’ 猕 势测量ꎮ 将携带绿色荧光蛋白标记的病原菌 Ｐｓａ￣
猴桃为材料ꎬ通过模拟春季田间不同湿度条件ꎬ探 ＧＦＰｕｖ 于 ２５ ℃ 培养 ４８ ｈ 后ꎬ用无菌水制备浓度为
讨水分亏缺能否通过调节叶片水势与气孔运动在 １×１０ ＣＦＵｍＬ 的悬浮液ꎮ 选取各处理植株完全
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物理层面阻断 Ｐｓａ 的侵染与增殖ꎬ以及对于已感染 展开的健康新生叶片ꎬ在正反两面均匀喷施菌悬
Ｐｓａ 的植株ꎬ水分亏缺能否激活宿主防御系统诱导 液至叶片表面完全湿润ꎬ随后转回原湿度条件下
其清除已定殖的病原菌ꎮ 通过解析上述问题ꎬ本 继续培养 １２ 天ꎮ
研究旨在揭示水分亏缺抑制猕猴桃溃疡病的生理 为进一步探究水分状况对已发病植株的调控
机制ꎬ为控雨栽培等田间水分管理措施的应用提 效应ꎬ将高湿组(ＨＨＧ)培养 １２ 天后的植株转移至

供理论支撑ꎮ 空气相对湿度 ６０％±２％条件下继续培养 １２ 天ꎬ设
为高 湿 转 亏 缺 组 ( ｈｉｇｈ ｈｕｍｉｄｉｔｙ ｔｏ ｗａｔｅｒ ｄｅｆｉｃｉｔ
１ 材料与方法 ｇｒｏｕｐꎬ ＨＴＷ)ꎬ每组 ３ 次生物学重复ꎮ
１.２.２ 各组接菌前后‘红阳’叶片中 Ｐｓａ 增殖情况
１.１ 仪器和材料 (１)利用 ＧＦＰ 绿色荧光蛋白标记研究不同湿
ＭＩＣＲＯＦＧＥ２０Ｒ 高速冷冻离心机(美国贝克曼 度条件下 Ｐｓａ 增殖和消亡的规律:高湿组和亏缺组
库尔特公司)、ＲＤＮ￣５６０￣４ 人工气候箱( 中国宁波 分别于接种 Ｐｓａ 前后不同时间(０、１、３、７、１２ ｄ) 采
东南仪器有限公司)、ＳＱ８１０Ｃ 自动高压蒸汽灭菌 集叶片ꎮ 高湿转亏缺组于 １、３、７、１２ ｄ 采集叶片置
锅(中国重庆雅玛拓科技有限公司)、ＨＳ￣１８００Ｈ￣Ｕ 于 ＵＶＰ ＥＣ３ 凝胶成像系统( 美国 ＵＶＰ 公司) 下
超净工作台( 中国苏州安泰空气技术有限公司)、 ３６５ ｎｍ 波长处观察荧光变化ꎮ
ＬＡＭＢＤＡ ３６５ 紫 外 / 可 见 分 光 光 度 计 ( 美 国 (２)采集的叶片先用 ７５％乙醇进行表面消毒ꎬ
ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ 公司)、卡尔蔡司 ＥＶＯ１８ 扫描电镜 以杀灭叶片表面病原菌及杂菌ꎬ随后采用稀释涂
(德国卡尔蔡司集团)ꎮ 植物材料选择对溃疡病 布平板法ꎬ对组织内定殖的 Ｐｓａ 进行菌落计数ꎮ
高感的‘红阳’猕猴桃ꎬ保存于广西植物研究所( 桂 １.２.３ 各组‘ 红阳’ 接菌前后气孔开度测定及形态
林市)猕猴桃品种资源圃ꎮ 本实验使用的溃疡病 观察 高湿组和亏缺组分别于接种 Ｐｓａ 前后不同
菌株分离于广西ꎬ经全基因组测序ꎬ证明其属于高 时间(０、１、３、７、１２ ｄ)采集叶片ꎮ 高湿转亏缺组于
致病力的 Ｂｉｏｖａｒ ３ 型菌株ꎬ对猕猴桃具有高致病力 １、３、７、１２ ｄ 采集叶片ꎮ 取不同时间的叶片材料ꎬ
(Ｇａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２５)ꎮ 在同一位置(避开叶脉) 剪取 ３ ｍｍ×３ ｍｍ 叶片组
１.２ 实验方法 织ꎬ放入 ＦＡＡ 固定液中固定ꎬ于电镜平台制样ꎬ用
１.２.１ 叶片接菌与培养 选择生长一致且未感染 离子溅射仪镀金ꎮ 采用卡尔蔡司 ＥＶＯ１８ 扫描电
Ｐｓａ 的‘红阳’ 两年生植株ꎬ于 ２０２２ 年 ４ 月转移至 镜对 叶 片 背 面 气 孔 进 行 观 察 并 拍 照 ( ５００ ×、
人工气 候 箱 中ꎮ 控 制 营 养 钵 内 土 壤 含 水 量 在 １ ０００×)ꎮ 采用 ＩｍａｇｅＪ 软件对气孔开张度进行统
(３５％左右)正常略偏低水平(崔致学等ꎬ１９８８)ꎬ以 计ꎬ每个样品统计 ５０ 个以上气孔ꎮ
消除土壤水分差异对试验的干扰ꎬ使植株叶片水 １.２.４ 各组‘ 红阳’ 不同时期叶片 ＣＡＴ、ＳＯＤ、ＰＯＤ、
分状况主要由空气湿度调控ꎮ 培养条件设置如 ＧＲ 和 ＰＡＬ 的酶活性测定 高湿组和亏缺组分别
下:光照强度３ ３００ ｌｘꎬ温度 １５ ℃ ꎮ 由于猕猴桃生 于接种 Ｐｓａ 前后不同时间(０、１、３、７、１２ ｄ) 采集叶

长与 结 果 的 最 适 空 气 湿 度 为 ７５％ ~ ８５％ ( Ｃｕｉ ｅｔ 片ꎮ 高湿转亏缺组于 ０、１、３、７、１２ ｄ 采集叶片ꎬ置
ａｌ.ꎬ ２００２)ꎬ因此本实验设置 ２ 个空气湿度处理: 于－８０ ℃ 冰箱中保存ꎮ 取 ０.５ ｇ 冷冻样品ꎬ迅速加
亏缺组( ｗａｔｅｒ ｄｅｆｉｃｉｔ ｇｒｏｕｐꎬ ＷＤＧ):空气相对 入 ５ ｍＬ 含 １ ｍｍｏｌＬ 抗坏血酸和 ０.５％( ｍ / Ｖ) 聚
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湿度(６０％±２％)ꎻ 乙烯 吡 咯 烷 酮 的 １００ ｍｍｏｌ Ｌ 磷 酸 钠 缓 冲 液
高湿组(ｈｉｇｈ ｈｕｍｉｄｉｔｙ ｇｒｏｕｐꎬ ＨＨＧ):空气相对 (ｐＨ ＝ ７. ０) 中ꎬ 冰 上 匀 浆 ５ ｍｉｎꎮ 匀 浆 液 随 后 以
湿度(９０％±２％)ꎮ ８ ０００ ×ｇ 离心 １５ ｍｉｎꎬ收集上清液ꎮ 分别使用苏州