Page 46 - 《广西植物》2026年第4期
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６ ０ ４ 广 西 植 物 ４６ 卷
果肉作为对照ꎬ所有处理均重复 ３ 次ꎬ用于验证 (ＴｒａｎｓＧｅｎ)反转录的 ｃＤＮＡ 为模板ꎬＡｃｔｉｎ 为内参
ＡＢＡ 处理下 ＡｃＰＡＬ 基因在果实成熟软化过程中的 基 因ꎬ 参 照 ＴｒａｎｓＳｔａｒｔ ® Ｔｏｐ Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘ
表达特征ꎮ (ＴｒａｎｓＧｅｎ)操作指南配置反应液进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 分
根 据 ＡｃＰＡＬ 家 族 基 因 的 序 列 特 征ꎬ 在 析ꎮ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ 荧光定量 ＰＣＲ 仪的扩增程序包括 １
ＤＮＡＭＡＮ 软件上设计定量 ＰＣＲ 引物ꎬ引物信息见 个预变性(９４ ℃ ３０ ｓ)、４０ 个循环扩增(９４ ℃ ５ ｓ、
表 １ꎮ 采用 ＲＮＡｐｒｅｐ Ｐｕｒｅ Ｐｌａｎｔ Ｐｌｕｓ Ｋｉｔ (Ｔｉａｎｇｅｎ) ６０ ℃ １５ ｓ、７２ ℃ １０ ｓ)和 １ 个熔解反应(９４ ℃ １５
® －ΔΔＣｔ
提 取 猕 猴 桃 总 ＲＮＡꎮ 以 ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ Ｏｎｅ￣Ｓｔｅｐ ｓ、６０ ℃ １５ ｓ、９４ ℃ １５ ｓ)ꎮ 通过 ２ 计算ꎬ获得
ｇＤＮＡ Ｒｅｍｏｖａｌ ａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ＡｃＰＡＬ 基因的相对表达量ꎮ
表 １ 实时荧光定量 ＰＣＲ(ｑＲＴ￣ＰＣＲ)分析引物
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ (ｑＲＴ￣ＰＣＲ) ａｎａｌｙｓｉｓ
基因名称 正向引物序列(５′→３′) 反向引物序列(５′→３′)
Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′→３′) Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′→３′)
ＡｃＰＡＬ１ ＴＧＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＴＧＧＣ ＧＣＴＧＣＣＣＴＴＣＡＴＣＧＡＣＴＣ
ＡｃＰＡＬ２ ＣＡＧＴＣＡＡＧＴＧＴＴＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧＴＧ ＴＴＡＴＡＧＣＴＧＣＴＡＡＴＣＧＴＧＴＴＴＧＴＧ
ＡｃＰＡＬ３ ＧＡＴＴＧＴＴＴＧＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＡＴＧ ＴＣＴＡＧＣＡＣＧＴＧＧＡＴＣＣＴＧＴＡＡＣ
ＡｃＰＡＬ４ ＧＡＴＴＧＴＣＴＣＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＡＴＧ ＡＣＴＴＡＡＡＧＴＣＴＴＣＴＴＣＡＴＴＡＴＴＧＧＣ
ＡｃＰＡＬ５ ＧＣＴＴＣＡＧＣＴＡＴＴＡＡＧＡＡＡＴＧＴＧＴＣＡ ＡＴＴＣＣＣＡＡＡＴＡＴＴＣＣＡＧＣＡＴＴＣ
ＡｃＰＡＬ６ ＡＡＧＴＴＧＧＴＴＧＡＴＣＣＡＴＴＧＣＴＧ ＧＧＡＴＴＣＡＣＧＴＧＡＡＴＴＡＡＴＴＣＴＧＧ
ＡｃＰＡＬ７ ＣＡＧＣＴＡＴＴＴＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＴＴＧ ＴＧＴＴＧＣＡＴＧＴＴＡＴＴＧＧＴＣＴＴＴＡＧＣ
Ａｃｔｉｎ ＧＴＧＣＴＣＡＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＡＡ ＧＡＣＧＣＴＧＴＡＴＴＴＣＣＴＣＴＣＡＧ
１.７ 苯丙氨酸解氨酶活性测定 为酸 性 蛋 白ꎻ 不 稳 定 系 数 为 ２９. ３５ ( ＡｃＰＡＬ７) ~
参照苯丙氨酸解氨酶( ＰＡＬ) 试剂盒( ＰＡＬ￣１￣ ３５.５７(ＡｃＰＡＬ４)ꎬ均低于 ４０ꎬ说明其均属于稳定蛋
Ｙꎬ苏州 科 铭 生 物 技 术 有 限 公 司) 说 明 书ꎬ 依 据 白ꎻ总亲 水 性 值 在 － ０. ０９７ ( ＡｃＰＡＬ６) 至 － ０. １７４
ＰＡＬ 催化 Ｌ￣苯丙氨酸生成的裂解产物( 反式肉桂 (ＡｃＰＡＬ５) 之 间ꎬ 说 明 ＡｃＰＡＬ 蛋 白 均 具 亲 水 性ꎮ
酸) 在 ２９０ ｎｍ 波长处具有最大吸收峰的原理ꎬ通 亚细胞定位预测结果显示 ７ 个 ＡｃＰＡＬ 蛋白均定位
过测定各样品在该波长下的吸光值ꎬ计算 ＰＡＬ 酶 于细胞质中ꎮ
活性ꎮ ２.２ ＡｃＰＡＬ 家族基因的染色体定位与共线性模式
染色体定位结果如图 １ 所示ꎬ７ 个 ＡｃＰＡＬ 基因
２ 结果与分析 不均匀分布于猕猴桃的 ５ 条染色体上ꎬ其中 ＬＧ８
和 ＬＧ１８ 染色体各含有 ２ 个成员ꎬＬＧ３、ＬＧ２６、ＬＧ２８
２.１ 猕猴桃 ＡｃＰＡＬ 家族基因的鉴定 染色体各含有 １ 个成员ꎮ 值得注意的是ꎬＡｃＰＡＬ４
经 ＨＭＭＥＲ 检索及 ＢＬＡＳＴｐ 同源性分析ꎬ剔除 和 ＡｃＰＡＬ５ 均定位在 ＬＧ１８ 染色体上且具有相同的
结构域缺失及冗余序列后ꎬ从猕猴桃基因组中共 转录方向ꎻ它们的基因间隔区仅跨越 ３ ６３７ ｂｐ 且
鉴定出 ７ 条 ＡｃＰＡＬ 基因ꎮ 根据其在染色体上的位 该区域未发现其他功能基因ꎬ同时它们在核苷酸
置顺序ꎬ依次命名为 ＡｃＰＡＬ１－ＡｃＰＡＬ７(表 ２)ꎮ 理化 和氨基酸水平的序列相似性分别高达 ９５.６５％ 和
性质分析结果表明ꎬＡｃＰＡＬ 家族编码的蛋白长度均 ９４.６６％ꎬ表明 ＡｃＰＡＬ４ 和 ＡｃＰＡＬ５ 起源于串联重复
大于 ７００ ａａꎬ其中 ＡｃＰＡＬ１ 最短(７０６ ａａ)ꎬＡｃＰＡＬ７ 事件ꎮ 此外ꎬ基因密度分析显示ꎬＡｃＰＡＬ 基因主要
最 长 ( ７２２ ａａ )ꎻ 分 子 量 范 围 为 ７６ ５８６. ５７ 分布于基因密度相对较高的基因组区域ꎮ
(ＡｃＰＡＬ２) ~ ７７ ８２４.８６ Ｄａ( ＡｃＰＡＬ７)ꎻ理论等电点 种内共线性结果显示ꎬＡｃＰＡＬ 家族内存在 １０
为 ５.９２ ~ ６.１７ꎬ均小于 ７ꎬ表明所有 ＡｃＰＡＬ 蛋白均 对共线性基因对ꎬ 单个成员可与多个其他成员形
