Page 25 - 《广西植物》2020年第4期

４ 期 刘成等: 基于 ＳＲＡＰ 标记的紫溪山华山松种子园无性系遗传多样性分析 ４ ６ ３

( １. Ｓｏｕｔｈ ａｎｄ Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａ Ｊｏｉｎｔ Ｒ ＆ Ｄ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｆｏｒｅｓｔ Ｆｕｌｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｈａｉｎꎬ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２２４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
２. Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉａｌ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ Ｂａｓｅ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｃｕｌｔｉｒａｔｉｎｇꎬ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２２４ꎬ
Ｃｈｉｎａꎻ ３. Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｆｏｒｅｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ Ｔｒｅｅ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ＆ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｙｕｎｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２２４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ４. Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｚｉｘｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｓｅｒｖｅꎬ Ｃｈｕｘｉｏｎｇ ６７５０００ꎬ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ )

Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｃｌｅａｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ Ｐｉｎｕｓ ａｒｍａｎｄｉｉ ｃｏｌｎｅｓ ｆｒｏｍ ｓｅｅｄ ｏｒｃｈａｒｄ ｉｎ Ｚｉｘｉ
Ｍｏｕｎｔａｉｎ ｏｆ Ｃｈｕｘｉｏｎｇ Ｃｉｔｙꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ ｔｈｅ ｎｅｅｄｌｅｓ ｏｆ ６０ ｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｆｒｏｍ ｓｉｘ ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｕｓｅｄ
ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｔｏｔａｌ ＤＮＡ ｂｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＳＲＡＰ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ. Ｔｈｅ
ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ: (１) Ｆｉｆｔｅｅｎ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＳＲＡＰ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｒｏｍ １００ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ｃｏｍｂｉｎａ￣
ｔｉｏｎｓ. Ａｆｔｅｒ ＳＲＡＰ￣ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬ ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １９４ ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ ＰＰＢ＝
８５.０５％ꎬ Ｎｅｉ′ｓ ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｅｘ Ｈ＝ ０.２３３ ７ꎬ Ｓｈａｎｎｏｎｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ Ｉ ＝ ０.３４１ ９ꎬ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉ￣
ｃｉｅｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ Ｇ ＝ ０.３５５ ５. (２) Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ６ ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ ｏｆ Ｐ. ａｒｍａｎｄｉｉ ｗａｓ ｈｉｇｈꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅ￣
ＳＴ
ｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ｍａｉｎｌｙ ｅｘｉｓｔｅｄ ｗｉｔｈｉｎ ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ ｏｆ Ｐ. ａｒｍａｎｄｉｉ. Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｈｕｉｚｅ (ＨＺ)
ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｗｅｉｓｈａｎ (ＷＳ) ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ ｗａｓ ｔｈｅ ｃｌｏｓｅｓｔ (Ｄ ＝ ０.０５０ １)ꎬ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ｈｕｉｚｅ (ＨＺ) ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ ａｎｄ
Ｙｉｌｉａｎｇ (ＹＬ) ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ ｗａｓ ｔｈｅ ｆａｒｔｈｅｓｔ (Ｄ ＝ ０.３６１ ８). (３) Ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓｉｘ Ｐ. ａｒｍａｎｄｉｉ ｐｒｏｖｅ￣
ｎａｎｃｅｓ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｒｅｅ ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ: Ｈｕｉｚｅ (ＨＺ) ａｎｄ Ｗｅｉｓｈａｎ (ＷＳ) ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎ ｏｎｅ ｃａｔｅｇｏｒｙꎻ
Ｃｈｕｘｉｏｎｇ (ＣＸ)ꎬ Ｎａｎｈｕａ (ＮＨ) ａｎｄ Ｙｉｌｉａｎｇ (ＹＬ) ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｃａｔｅｇｏｒｙꎻ Ｔｅｎｇｃｈｏｎｇ (ＴＣ) ｐｒｏｖｅ￣
ｎａｎｃｅ ｗａｓ ａ ｓｅｐａｒａｔｅ ｃａｔｅｇｏｒｙ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈａｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐ. ａｒｍａｎｄｉｉ ｃｌｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｓｅｅｄ ｏｒｃｈａｒｄ ｉｎ
Ｚｉｘｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎ ｏｆ Ｃｈｕｘｉｏｎｇ Ｃｉｔｙ ｈａｓ ａ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌꎬ ａｎｄ ｉｔ ｃａｎ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ
ｐａｒｅｎｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｃｒｏｓｓ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ Ｐ. ａｒｍａｎｄｉｉ ａｓ ｗｅｌｌ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｐｉｎｕｓ ａｒｍａｎｄｉｉꎬ ｓｅｅｄ ｏｒｃｈａｒｄꎬ ｃｌｏｎｅꎬ ＳＲＡＰꎬ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ

华山松( Ｐｉｎｕｓ ａｒｍａｎｄｉｉ) 是松科( Ｐｉｎａｃｅａｅ) 松 行华山松杂交育种时ꎬ需有针对性地明确园内种
属(Ｐｉｎｕｓ)单维管束亚属的植物(陈有民ꎬ１９９０ꎻ 袁 质的遗传多样性程度及各种质间的亲缘关系显得
红宁和陈文辉ꎬ２０１０)ꎬ是我国特有的五针松高大 尤为重要ꎮ 随着分子生物学研究的不断深入及相
乔木ꎬ同时也是高海拔地区重要的造林树种之一 关领域技术水平的进步ꎬ华山松遗传多样性的检
(赵杨等ꎬ２００３ꎻ辛培尧等ꎬ２０１０)ꎮ ２０ 世纪 ７０ 年 测方法不断得到完善ꎮ 例如:赵杨等(２０１２) 利用
代起ꎬ云南和贵州等地相继对华山松进行遗传改 ＩＳＳＲ 标记对贵州平坝华山松无性系种子园内的

良ꎬ各自营建了数个优良无性系初级种子园ꎬ之后 ８５ 个无性系进行遗传多样性分析后发现ꎬ其遗传
对其进行了遗传测定、优良家系选择及辅助授粉 变异主要在种源内ꎻ祝娟(２０１６) 利用 ＳＳＲ 分子标
等工作( 王秀荣等ꎬ２００７ꎻ翟思万等ꎬ２００７)ꎮ 紫溪 记对华山松 ５２ 个自然分布群体进行遗传多样性
山华山松无性系种子园位于楚雄市紫溪山ꎬ为国 分析ꎬ结果表明遗传变异主要存在于个体内ꎬ且其
家级林木良种基地ꎮ 由于缺乏对园内种质的不断 遗传多样性水平较高ꎻ朱晓丹(２００６) 利用 ＲＡＰＤ
改良ꎬ该种子园仍然处于建园初期低级阶段ꎬ继而 分子标记对紫溪山华山松种子园内的部分无性系
出现病虫害严重及生产力低下的问题ꎬ因此ꎬ急需 进行了遗传多样性研究ꎬ结果表明各种源之间具
对园内种质进行改良和创新ꎮ 已有实践证实ꎬ杂 有较大的遗传差异ꎬ且遗传多样性较丰富ꎮ 但由

交育种是迄今为止对植物不良性状进行遗传改良 于 ＲＡＰＤ( Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ) 标
的最为有效的方法之一ꎮ 多年来ꎬ华山松的杂交 记相对较早ꎬ且与新型分子标记比较ꎬ存在一定的
育种工作较为滞后ꎬ杂交亲本的选配多以形态及 缺陷(阮桢媛等ꎬ２０１６)ꎬ其研究结果可能存在一定
种源地为主要参考依据ꎬ不能明确所收集的种质 的局限性ꎮ 上述相关研究为华山松的遗传改良及
资源间遗传多样性的丰度及亲缘关系的远近ꎬ从 种质资源的分子评价提供了重要的理论基础ꎮ
而影响改良的程度及效果ꎮ 因此ꎬ在种子园内进 在众多的分子标记中ꎬＳＲＡＰ( Ｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｒｅｌａｔｅｄ