Page 73 - 《广西植物》2020年第7期

７ 期 张佳薇等: 水曲柳 ＦｍＰＨＶ 基因克隆及在形成层愈伤组织中的表达分析 ９ ６ ９

图 ３ 水曲柳 ＦｍＰＨＶ(ＡＴＨＢ１４)蛋白的亲 / 疏水性(Ａ)、跨膜区域(Ｂ)预测
Ｆｉｇ. ３ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏ￣/ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ (Ａ) ａｎｄ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｉｏｎ (Ｂ) ｏｆ ＦｍＰＨＶ(ＡＴＨＢ１４) ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｆｒａｘｉｎｕｓ ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ

横轴表示氨基酸位置ꎻ蓝色表示 α 螺旋ꎻ绿色表示 β 转角ꎻ紫色表示无规则卷曲ꎻ红色表示延伸链ꎮ
Ｔｈｅ ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ ａｘｉｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｐｏｓｉｔｉｏｎꎻ ｔｈｅ ｂｌｕｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｘꎻ ｔｈｅ ｇｒｅｅｎ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｂｅｔａ ｔｕｒｎꎻ ｔｈｅ ｐｕｒｐｌｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ
ｒａｎｄｏｍ ｃｏｉｌꎻ ｔｈｅ ｒｅｄ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｃｈａｉｎ.
图 ４ 水曲柳 ＦｍＰＨＶ 蛋白的二级结构预测
Ｆｉｇ. ４ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＦｍＰＨＶ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｆｒａｘｉｎｕｓ ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ

￣１ ￣１ 培养基中材料出现不同程度的褐化ꎬ两次继代后材
糖＋１ ｍｇＬ 毒莠定＋１ ｍｇＬ ６￣ＢＡ) 中暗培养 ７
ｄ 后ꎬ取出ꎬ将木质部完全去除后将靠近韧皮部一 料死亡ꎬ在 １ / ２ ＷＰＭ 培养基中材料长势缓慢ꎬ在褐

侧置于 ＭＤ２０１ 培养基上ꎬ暗培养 ７ ｄ 后即获得水 化情况出现之前死亡ꎮ ＭＳＢ５ 培养基中材料长势迅
曲柳形成层愈伤组织ꎬ如图 ７ 所示ꎮ 从左至右分 速升高ꎬ但随即材料排出大量多酚ꎬ２ ~ ３ ｄ 后死亡ꎮ
别为一年生树皮形成层愈伤组织( 部分整齐排列 我们初步判断ꎬ水曲柳形成层愈伤组织不适应富含
的致密白色松散细胞团)、一年生树皮韧皮部愈伤 丰富有机物质的培养基ꎮ ＷＰＭ 培养基中材料生长势
组织(随机分布的偏绿色松散细胞团)、多年生树 虽然不如 ＭＳＢ５ 培养基ꎬ但是生长状态良好ꎬ显微镜
皮形成层愈伤组织( 整齐排列的致密白色松散细 下观察到松散细胞团ꎬ继代周期为 ２１ ｄ(图 ８:ＡꎬＣ)ꎮ

胞团)、二年生树皮韧皮部愈伤组织(不启动)ꎮ 在对形成层愈伤组织和树皮愈伤组织在 ＷＰＭ
２.３.２ 水曲柳形成层愈伤组织的培养 实验为形成 培养基中进行继代 ２０ ｄ 左右后ꎬ观察到极少数树

层愈伤组织继代培养选择了 ＷＰＭ、Ｂ５、ＭＳＢ５ 三种 皮边缘处出现与形成层愈伤组织完全不同的乳黄
培养基进行继代培养基优化ꎬ同时对形成层愈伤组 色团状紧密愈伤组织( 图 ８:Ｂ)ꎮ 本实验进一步对
织和普通皮层愈伤组织的生长量进行了比较(图 ８)ꎮ 两种愈伤组织的生长量进行统计( 图 ８:Ｃ)ꎮ 结果
实验选取 ＷＰＭ、１ / ２ ＷＰＭ、Ｂ５、ＭＳＢ５ 四种培养 表明ꎬ形成层愈伤组织的启动周期显著优于树皮
基对水曲柳形成层愈伤组织进行继代培养ꎬ其中 Ｂ５ 愈伤组织ꎬ并且前者的生长量是后者的 ４ 倍之多ꎮ