Page 74 - 《广西植物》2020年第7期

９ ７ ０ 广 西 植 物 ４０ 卷
ＦｍＰＨＶ 在其中的表达情况ꎬ为水曲柳芽再生体系
的建立奠定基础ꎮ
２.４ ＦｍＰＨＶ 基因的表达分析
２.４.１ ＦｍＰＨＶ 基因在水曲柳中表达分析 分别取
实验室培养的水曲柳愈伤组织和水曲柳种子组培
培养 ３０ ｄ 的幼苗ꎮ 根、茎、叶取自水曲柳 ３ 年生盆
栽苗ꎮ ５ 月—９ 月混合样( 包括根ꎬ茎ꎬ叶) 及雄花
雌花取自野生多年生水曲柳ꎬ以及以形成层为来

源的形成层愈伤组织(图 ９:ＡꎬＢꎬＣ)ꎮ
对水曲柳 ＦｍＰＨＶ 基因在不同部位中定量表
达分析结果表明( 图 ９:Ｂ)ꎬ该基因在芽中高度表
达ꎬ而在其他组织中根、茎、叶、花以及种子中的表
达量普遍不高ꎮ 形成层愈伤组织中 ＦｍＰＨＶ 基因

的表达量是普通培养愈伤组织表达量的 ２２.３５ 倍ꎬ
说明 ＦｍＰＨＶ 对调控形成层的愈伤组织形成起到

了重要作用ꎮ
水曲柳快速生长期为每年的 ５ 月—９ 月ꎬ５ 月复
苏ꎬ６ 月萌芽ꎬ同时 ＦｍＰＨＶ 表达量在 ６ 月达到最高ꎬ
ＦｍＰＨＶ. 水曲柳ꎻ ＯｅＡＴＨＢ１４. 油橄榄ꎻ ＣｏＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. 长蒴 在 ９ 月表达量最低ꎬ６ 月表达量是 ９ 月的 ２９.７３８ 倍
(图 ９:Ａ)ꎮ 可以推测该基因在水曲柳芽发生阶段
黄 麻ꎻ ＨｉＡＴＨＢ１４. 紫 花 风 铃ꎻ ＳｔＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. 马 铃 薯ꎻ
ＳｉＡＴＨＢ１４. 芝麻ꎻ ＳｌＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. 番茄ꎻ ＮｔＡＴＨＢ１４. 绒毛烟
草ꎻ ＭｅＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. 木薯ꎻ ＣｓＡＴＨＢ１４. 柑橘ꎻ ＴｃＡＴＨＢ１４. 可 发挥着正调控作用ꎮ 同时形成层愈伤组织中该基
因特异性高表达ꎬ推测该种愈伤组织具有芽再生潜
可ꎻ ＨｕＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. 哥伦比亚锦葵ꎻ ＣｆＨＤＺＩＰ Ⅲ. 土瓶草ꎻ
ＣｃＡＴＨＢ１４. 中粒咖啡ꎻ ＰｐＡＴＨＢ１４. 水蜜桃ꎻ ＰａＡＴＨＢ１４. 甜
力ꎬ可以作为水曲柳再生体系建立材料的来源ꎮ
樱桃ꎻ ＪｒＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. 胡桃ꎻ ＶｒＡＴＨＢ１４. 绿豆ꎻ ＧｍＡＴＨＢ￣
１４. 大 豆ꎻ ＢｌＨＤＺＩＰ. 亮 叶 桦ꎻ ＩｎＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. 牵 牛ꎻ 为进一步证明 ＦｍＰＨＶ 在芽再生过程中的正
ＮｓＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. 细叶石竹ꎻ ＶｖＰＨＶ. 葡萄ꎮ
向作用ꎬ分别选取水曲柳种子萌发过程中 ０、２、４、
ＦｍＰＨＶ. Ｆｒａｘｉｎｕｓ ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａꎻ ＯｅＡＴＨＢ１４. Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａꎻ
ＣｏＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. Ｃｏｒｃｈｏｒｕｓ ｏｌｉｔｏｒｉｕｓꎻ ＨｉＡＴＨＢ１４. Ｈａｎｄｒｏａｎｔｈｕｓ ６、８、１０、１２ 以及 １４ ｄ 的实生苗作为实验材料ꎬ对
ｉｍｐｅｔｉｇｉｎｏｓｕｓꎻ ＳｔＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍꎻ ＳｉＡＴＨＢ１４. Ｓｅｓａ￣ 水曲柳种子萌发过程中的 ＦｍＰＨＶ 表达情况进行
ｍｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍꎻ ＳｌＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍꎻ 实时荧光定量 ＰＣＲ 分析( 图 ９:Ｃ)ꎮ 结果表明ꎬ在
ＮｔＡＴＨＢ１４. Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｍｅｎｔｏｓｉｆｏｒｍｉｓꎻ ＭｅＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. Ｍａｎｉｈｏｔ
ｅｓｃｕｌｅｎｔａꎻ ＣｓＡＴＨＢ１４. Ｃｉｔｒｕｓꎻ ＴｃＡＴＨＢ１４. Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏꎻ 种子萌发过程中ꎬＦｍＰＨＶ 在第 ２ 天和第 ８ 天分别
ＨｕＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｅｓｕｌｅｎｔｕｓꎻ ＣｆＨＤＺＩＰ Ⅲ. Ｃｅｐｈａｌｏｔｕｓ ｆｏｌ￣ 达到 两 个 峰 值ꎬ 分 别 是 第 ０ 天 的 １１. ３７９ 倍 和
ｌｉｃｕｌａｒｉｓꎻ ＣｃＡＴＨＢ１４. Ｃｏｆｆｅａ ｃａｎｅｐｈｏｒａꎻ ＰｐＡＴＨＢ１４. Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒ￣
１０.２３６ 倍ꎮ 在芽再生过程中ꎬ关键基因的表达模
ｓｉｃａꎻ ＰａＡＴＨＢ１４. Ｐｒｕｎｕｓ ａｖｉｕｍꎻ ＪｒＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. Ｊｕｇｌａｎｓ ｒｅｇｉａꎻ
ＶｒＡＴＨＢ１４. Ｖｉｇｎａ ｒａｄｉａｔａꎻ ＧｍＡＴＨＢ￣１４. Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘꎻ 式被发现为两次峰值出现的现象ꎬ而这两次峰值
ＢｌＨＤＺＩＰ. Ｂｅｔｕｌａ ｌｕｍｉｎｉｆｅｒａꎻ ＩｎＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. Ｉｐｏｍｏｅａ ｎｉｌꎻ
分别与水曲柳种子芽的发生阶段和芽伸长阶段相
ＮｓＡＴＨＢ１４ｌｉｋｅ. Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓꎻ ＶｖＰＨＶ. Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ.
互对应ꎮ ＦｍＰＨＶ 基因的表达与水曲柳ꎬ进一步说
图 ５ 不同植物 ＰＨＶ(ＡＴＨＢ１４)蛋白系统进化树分析
Ｆｉｇ. ５ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＨＶ 明该基因在芽再生过程中的重要作用ꎮ
(ＡＴＨＢ１４) ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔｓ ２.４.２ ＦｍＰＨＶ 瞬时侵染水曲柳对芽再生通路基因
表达的影响 前人的研究表明ꎬ ＰＨＶ( ＡＴＨＢ１４) 受
由于水曲柳形成层愈伤组织具有生长迅速ꎬ 到包括 ＷＯＸ５ꎬ细胞分裂素通路相关的 ＡＨＰ６ 和生
细胞团处于松散易分离状态等类似于胚性细胞的 长素通路相关的 ＹＵＣ５ 等生长素以及细胞分裂素
优良特 性ꎬ 我 们 决 定 通 过 探 究 芽 再 生 关 键 基 因 多个通路的关键基因的调控ꎬ此外ꎬＰＨＶ 能够进一