Page 17 - 《广西植物》2021年第8期
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ऐ 期 王 雪 等 ᧥ 黄梁木维管组织细胞激光显微切割技术体系建立 ϟ ሕ ϟ
ዛ 脱水ܦ透明剂为乙醇 ᣰ 异丙醇的 શዶ 电泳图ᤥ 泳道 ϟͱሕ 为处理组合ሙЏ固定剂为乙醇 ᨒ 丙酮 ᢉ Ꭾԡ ᨒ ሕԡྉႬᣑ Ⴌɯ的 ሕ 个生物学重
复ଫ泳道 ࿗ͱᤃ 为处理组合֒Џ固定剂为卡诺 ᨒ 丙酮 ᢉ Ꭾԡ ᨒ ሕԡྉ Ⴌᣑ Ⴌɯ 的 ሕ 个生物学重复ଫ ଧ 脱水ܦ透明剂为正丁醇的 શዶ 电泳
图ᤥ 泳道 ϟͱሕ 为处理组合ᎏЏ固定剂为乙醇 ᨒ 丙酮 ᢉ Ꭾԡ ᨒ ሕԡྉႬᣑ Ⴌɯ 的 ሕ 个生物学重复ଫ泳道 ࿗ͱ ᤃ 为处理组合᤻Џ 固定剂为卡
诺 ᨒ 丙酮 ᢉ Ꭾԡ ᨒ ሕԡྉႬᣑ Ⴌɯ的 ሕ 个生物学重复ᤥ
ዛ શዶ ᔀᔀዹᡷʢᆍᡱၤᔀʢᆍ੫ʢᑕቝ ࣼ༁ᔽႿ੫ ᔀᡷၤᑕႿᆍᣰ ᔽ༁ᆍᡱʢᆍᡱᑕႿᆍ ᑕ༁ ʛᔀၤᢃʛʢᑕᡷᔽᆍႿ ᑕႿʛ ᔽႿᔽᡷʢᑕᡷᔽᆍႿ ᓂᑕႿᔀ༁ ϟ ͱ ሕ ᑕʢᔀ ሕ ᤦᔽᆍᆍ੫ᔽዹᑕ ʢᔀᡱᔽዹᑕᡷᔀ༁ ᆍʢ ᡷʢᔀᑕᡷቝᔀႿᡷ
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图 জ 不同固定剂和脱水透明剂处理组合 શዶ 凝胶电泳图
èᔽ੫ জ ᥈ᔀ ᔀᔀዹᡷʢᆍᡱၤᆍʢᔀ༁ᔽ༁ ᆍ શዶ औᔽᡷၤ ʛᔽᔀʢᔀႿᡷ ዹᆍቝᤦᔽႿᑕᡷᔽᆍႿ༁ ᆍ ᔽᑕᡷᔽᔀᖔ ʛᔀၤᢃʛʢᑕᡷᔽᆍႿ ᑕႿʛ ᔽႿᔽᡷʢᑕᡷᔽᆍႿ
ᔽႿᡷᔀ੫ʢᔽᡷᢃ Ⴟࣼቝᤦᔀʢɯ高于 ጢԡ 的适度降解样品仍能产 并尽可能保持较低的温度是至关重要的ྉ୩ᑕႿᡷᔽᖔ
生与 基因表达谱相匹配的 શዶ ྉ ᆍቝᔀʢᆍ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟँɯᤥ ᓂᥘ᧕ 的整个过程包括 ሕ 个步骤᧥ྉϟɯ 样品
ԡϟ࿗ɯᤥ 因此ᖔ所建立的黄梁木幼苗茎段维管组织 处理ଫྉɯ显微切割程序ଫྉሕɯ ᧕શዶᖔશዶ 或蛋白质
细胞激光显微切割体系得到的目标产物可用于 提取ᖔ测序后进行后续分析ᤥ
શዶ᥋༁ᔀीᤥ 在进行 ᓂᥘ᧕ 之前ᖔ 样品处理是获得 ᧕શዶᖔ
શዶ 或蛋白质良好产量和质量的关键步骤ᤥ 对于
ሕজ 讨论与结论 样品处理要注意以下几点᧥ྉϟɯ 进行组织切片时ᖔ
应使用特定试剂清 洁 所 有 表 面 和 器 械ᖔ 以去除
ᓂᥘ᧕ 不需要细胞壁的分解ᖔ允许从切片异质 ᧕શᑕ༁ᔀ 和 શᑕ༁ᔀ༁ᤥ 本实验所用到的特定清洁试剂
组织中分离单个细胞类型ᖔ因此特别适合植物加 为 શᑕ༁ᔀԻᑕᡱᖔ可有效抑制 શᑕ༁ᔀ༁ 活性ᤥྉɯ 如果
工ᤥ 该方法允许精确分离少量细胞ᖔ可用于研究 使用玻璃容器进行染色或脱蜡ᖔ则应在 ϟऐԡ ቩ 下
不同组织或细胞中的基因表达谱ᤥ 该技术不需要 烘烤至少 ऐ ၤྉ ୩ᑕႿᡷᔽᖔԡϟँɯᤥ ྉሕɯ 固定是确保高质
通过任何类型的酶消化分离细胞ᖔ不需要细胞特 量 શዶ 产量的最关键步骤ᤥ 真空是一个必要的
异性报告基因ᖔ并且允许在切割前数月存储固定 步骤ᖔ以促进固定剂在组织中的渗透ଫ固定剂的体
和包埋组织ྉ ऊၤᑕᑕႿ ᔀᡷ ᑕᖔԡϟऐɯᤥ 根据感兴趣的 积应至少为样品体积的五倍ྉ୩ᑕႿᡷᔽᖔԡϟँɯᤥ ྉ ࿗ɯ
植物组织性质ᖔᓂᥘ᧕ 的样品制备程序可能会有很 完全脱蜡是 ᧕શዶ 和 શዶ 提取的必要条件ᤥ 由于
大差异ᤥ 基于 ᓂᥘ᧕ 的 શዶ 分离的成功在很大程 石蜡的去除不充分ᖔ可能降低产率ᤥ 在显微切割
度上取决于该方法的上游部分ᖔ包括组织固定ܦ脱 程序过程中还应注意以下几点᧥ྉϟɯ ᓂᥘ᧕ 程序不
水ܦ浸蜡等ྉ ᥈ᑕࣼᡷᑕቝ ᪲ ୩ᑕʢҴᑕʢᖔԡϟጢɯᤥ 为了尽量减 应超过 ϟጢ ၤᖔ更长的时间会导致目标分子的产率
少 શዶ 的降解ᖔ在整个过程中尽可能缩短时间ᖔ 降低ྉ ዶ੫ࣼᔽᑕʢ᥋ାʢᑕᆍ ᪲ ୩ᑕႿዹၤᆍ᥋ାʢࣼᖔԡϟँɯᤥ ྉ ɯ 当
