Page 7 - 《广西植物》2022年第12期

１２ 期 霍冬敖等: 基于 ＵＰＬＣ￣ＭＳ / ＭＳ 技术的野生及栽培韭菜籽的代谢组学研究 １ ９ ９ ７

和韭菜籽 ２ 种材料的代谢组分ꎬ筛选其中差异显 (１０３°３６′—１０４°４５′ Ｅ、２６°１９′—２７°２７.２８′ Ｎ) 采集
著的生物活性物质并分析相关的代谢途径ꎬ以期 的多星韭籽ꎮ 该地区处于我国西南喀斯特连片分
为韭菜的遗传改良提供指导ꎬ为多星韭籽食用、药 布区ꎬ海拔约 ２ ７００ ｍꎬ气候温暖ꎬ太阳辐射量高ꎬ
用等功能产品的开发提供理论依据ꎮ 气温日差较大、年差较小ꎮ 多星韭籽为秋季果实
成熟后采收果序晒干搓出种子除去杂质得到ꎬ形
１ 材料与方法 状近似三角盾形ꎬ种皮坚硬且腹背有细细的皱纹ꎬ

千粒重为 ３.７５４ ｇ(图 １:Ａ)ꎮ 韭菜籽为平顶山农科
１.１ 材料 院选育的‘平韭 ６ 号’ꎬ形状呈扁卵形或半卵形ꎬ表
本研究材料为 ２０２０ 年 ９ 月在全国唯一的野生 面粗 糙 且 有 细 密 网 状 皱 纹ꎬ 千 粒 重 为 ４. ７７６ ｇ
韭菜花保护区ꎬ即在贵州省毕节市赫章县韭菜坪 (图 １:Ｂ)ꎮ

图 １ 多星韭籽 (Ａ) 与韭菜籽 (Ｂ) 形态
Ｆｉｇ. １ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｌｌｉｕｍ ｗａｌｌｉｃｈｉｉ ｓｅｅｄｓ (Ａ) ａｎｄ Ａ. ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ｓｅｅｄｓ (Ｂ)

１.２ 方法 进样量为 ４ μＬꎻ流速为 ０.３５ ｍＬｍｉｎ ꎮ
￣１
１.２.１ 试验方法 多星韭籽与韭菜籽 ２ 种样品各设 １.２.３ 质谱条件 ＬＩＴ 和三重四极杆(ＱＱＱ)扫描是
３ 个生物学重复ꎬ将 ６ 个样品放置于冻干机中ꎬ在 在三重四极杆线性离子阱质谱仪(ＱＴＲＡＰ)ꎬＵＰＬＣ￣
真空条件下冷冻干燥后使用研磨仪使其成粉末 ＭＳ / ＭＳ 系统上获得的ꎬ该系统配备了 ＥＳＩ Ｔｕｒｂｏ 离
状ꎮ 称取 １００ ｍｇ 韭籽粉末溶于甲醇提取液中ꎬ在 子喷雾接口ꎬ可由 Ａｎａｌｙｓｔ １.６.３ 软件控制正负 ２ 种
涡旋锅中涡旋 ６ 次后置于 ４ ℃ 冰箱过夜ꎮ 次日经 离子模式运行ꎮ ＥＳＩ 源操作参数如下:离子源ꎬ涡轮
离心后吸取上清液ꎬ用 ０.２２ μｍ 微孔滤膜过滤后 喷雾ꎻ源温度 ５５０ ℃ꎻ离子喷雾电压(ＩＳ)５ ５００ Ｖ(正
保存滤液于进 样 瓶 中ꎬ用 于 ＵＰＬＣ￣ＭＳ / ＭＳ 分 析ꎮ 离子模式) / －４ ５００ Ｖ(负离子模式)ꎻ离子源气体 Ｉ
用超高效液相色谱和串联质谱数据采集系统进行 (ＧＳ Ｉ)ꎬ气体Ⅱ(ＧＳ Ⅱ) 和帘气(ＣＵＲ) 分别为 ５０、
代谢物分离鉴定ꎮ ６０、２５.０ ｐｓｉꎬ碰撞诱导电离参数为高ꎮ 在 ＱＱＱ 和
￣１
１.２.２ 色谱条件 色谱柱选择 Ａｇｉｌｅｎｔ ＳＢ￣Ｃ１８(１０ ＬＩＴ 模式下ꎬ分别用 １０、１００ μｍｏｌＬ 聚丙二醇溶液
ｃｍ × ２.１ ｍｍ)ꎻ流动相 Ａ 相为加入 ０.１％甲酸的超 进行仪器调谐与质量校准ꎮ ＱＱＱ 扫描使用 ＭＲＭ 模
纯水ꎬＢ 相为加入 ０.１％甲酸的乙腈ꎻ洗脱梯度 ０.００ 式ꎬ并将碰撞气体(氮气)设置为中等ꎮ 通过进一步
ｍｉｎ 时 Ｂ 相比例设为 ５％ꎬ９.００ ｍｉｎ 内上升至 ９５％ꎬ 的 ＤＰ 和 ＣＥ 优化ꎬ完成各个 ＭＲＭ 离子对的 ＤＰ 和
并在 ９５％保持 １ ｍｉｎꎬ１０.００ ~ １１.１０ ｍｉｎ 时 Ｂ 相减 ＣＥꎮ 根据每个时期内洗脱的代谢物ꎬ在每个时期监

少至 ５％ꎬ并保持 ５％平衡至 １４ ｍｉｎꎻ柱温为 ４０ ℃ ꎻ 测 １ 组特定的 ＭＲＭ 离子对ꎮ