Page 157 - 《广西植物》2023年第2期

２ 期 周璇等: 垫状卷柏 ＳｐＬＥＡ１ 基因克隆及干旱胁迫下的表达分析 ３ ５ １

Ａ. ＳｐＬＥＡ１ 基因 ｃＤＮＡ 的扩增ꎬ其中 Ｍ 为 ＤＬ２０００ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒꎬ１ 为 ＳｐＬＥＡ１ 基因ꎻ Ｂ. ＳｐＬＥＡ１ 基因的 ｃＤＮＡ 序列及其编码的氨基酸
序列ꎻ Ｃ. ＳｐＬＥＡ１ 蛋白二级结构预测ꎮ 蓝色. α￣螺旋ꎻ 绿色. β￣转角ꎻ 紫色. 无规则卷曲ꎻ 红色. 延伸链ꎮ
Ａ. ｃＤＮＡ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＳｐＬＥＡ１ ｇｅｎｅꎬ ｗｈｅｒｅ Ｍ ｉｓ ＤＬ２０００ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒ ａｎｄ １ ｉｓ ＳｐＬＥＡ１ ｇｅｎｅꎻ Ｂ. ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ＳｐＬＥＡ１ ｇｅｎｅ ａｎｄ
ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｉｔꎻ Ｃ. Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＳｐＬＥＡ１ ｐｒｏｔｅｉｎ. Ｂｌｕｅ. α￣ｈｅｌｉｘꎻ Ｇｒｅｅｎ. β￣ｔｕｒｎꎻ Ｐｕｒｐｌｅ. Ｒａｎｄｏｍ
ｃｏｉｌꎻ Ｒｅｄ. Ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｃｈａｉｎ.
图 １ ＳｐＬＥＡ１ 基因序列分析
Ｆｉｇ. １ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＳｐＬＥＡ１ ｇｅｎｅ

ＳｐＬＥＡ１ 蛋白与鹰嘴豆、芝麻、黑麦等 １５ 种亲缘关

系较近但物种不同的蛋白序列进行比对( 图 ３)ꎮ
多重序列比对( 图 ３) 结果显示ꎬＳｐＬＥＡ１ 蛋白含有
ＬＥＡ￣５ 保守结构域ꎬ并在遗传距离矩阵中发现ꎬ红
车轴草和鹰嘴豆与垫状卷柏 ＳｐＬＥＡ１ 的遗传距离
最近(为 ０.２７２)ꎬ荠菜与垫状卷柏 ＳｐＬＥＡ１ 的遗传
距离最远( 为 ０.３４８)ꎮ 利用 ＭＥＧＡＸ 构建系统进
化树ꎬ并使用 ＤＮＡＭＡＮ 进行遗传距离矩阵分析发

现ꎬ 垫 状 卷 柏 ＳｐＬＥＡ１ 与 鹰 嘴 豆 ( ＸＰ ＿
００４５０６７２９.１) 和红车轴草( ＰＮＸ９１１１０. １) 蛋白同
源性较高ꎬ聚为一支(图 ４)ꎮ
图 ２ ＳｐＬＥＡ１ 蛋白质亲疏水性预测 ２.３ ＳｐＬＥＡ１ 基因的启动子克隆与功能元件分析
Ｆｉｇ. ２ Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＳｐＬＥＡ１ ｐｒｏｔｅｉｎ 以垫状卷柏 ＤＮＡ 为模板ꎬ进行 ＨｉＴａｉｌ￣ＰＣＲ 扩
增 ＳｐＬＥＡ１ 基因启动子序列ꎬ选择第 ３ 泳 道 约 为
而酪氨酸有 ３ 个( Ｔｙｒｏｓｉｎｅ 位点为 １９ 和 ２５)ꎬ苏氨 ２ ０００ ｂｐ 的 条 带 回 收 产 物 ( 图 ５ )ꎬ 克 隆 获 得
酸仅有 １ 个(Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ 位点 ５６)ꎮ ＳｐＬＥＡ１ 起始密码子( ＡＴＧ) 上游 ２ ０１８ ｂｐ 的序列ꎮ
用 ＢＬＡＳＴ 进行序列相似度分析ꎬ将垫状卷柏 使用 ＰｌａｎｔＣａｒｅ 在线软件预测分析 ＳｐＬＥＡ１ 基因启