Page 103 - 《广西植物》2020年第5期
P. 103
５ 期 郭志龙等: 不同甜叶菊品种叶中绿原酸类成分的比较研究 ６ ９ ９
１.５ 高效液相色谱法 不同极性的大孔树脂对甜叶菊叶中绿原酸类成分
借鉴李华丽等(２０１７)测定甜叶菊中 ６ 个酚酸 的吸附－解析性能ꎮ 首先ꎬ取 ８ 种预处理好的树脂
类成分的 ＨＰＬＣ 方法并对其优化ꎮ 各 １.０ ｇꎬ分别加入浓度为 Ｃ 的供试品溶液 １０ ｍＬꎬ
０
１.５.１ 色谱条件 Ｗａｔｅｒｓ ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ 色谱柱( １５０ 恒温(２５ ℃ )振荡吸附 ２４ ｈꎬ测定吸附后溶液的浓
１８
ｍｍ × ４.６ ｍｍꎬ５ μｍ)ꎬ流动相 Ａ 为乙腈ꎬＢ 为 １％ 度 Ｃ 值ꎬ滤过ꎻ然后ꎬ向各树脂中分别加入 １０ ｍＬ
乙酸水溶液ꎬ梯度洗脱(０ ~ １５ ｍｉｎꎬ８％ Ａ ~ １７％ Ａꎬ 水ꎬ恒温(２５ ℃ ) 振荡 １０ ｍｉｎꎬ重复两次ꎻ最后ꎬ水
￣１
１.０ ｍＬｍｉｎ ꎻ１５ ~ ２２.５ ｍｉｎꎬ１７％ Ａ ~ １７.５％ Ａꎬ 洗后向各树脂中分别加入 ６０％乙醇 ２５ ｍＬꎬ２５ ℃
￣１
１.０ ~ ０.６ ｍＬｍｉｎ ꎻ２２.５ ~ ３０ ｍｉｎꎬ１７.５％ Ａ ~ １８％ 恒温振荡解吸 ２４ ｈꎬ测定解析后绿原酸类物质浓
￣１
Ａꎬ０.６ ｍＬｍｉｎ ꎻ３０ ~ ４０ ｍｉｎꎬ１８％ Ａ ~ ２０％ Ａꎬ０.６ 度 Ｃ 值ꎬ依据下述公式(Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１７) 计算各树
１
￣１
ｍＬｍｉｎ ꎻ４０ ~ ４２ ｍｉｎꎬ２０％ Ａ ~ ２４％ Ａꎬ０.６ ~ １.０ 脂吸附 量 Ｑ ( ｍｇ ｇ )、 吸 附 率 Ｅ (％) 和 解 析 率
￣１
￣１
ｍＬｍｉｎ ꎻ４２ ~ ５０ ｍｉｎꎬ２４％ Ａ ~ ４０％ Ａꎬ１.０ ｍＬ
Ｄ(％)ꎮ
￣１
ｍｉｎ ꎻ５０ ~ ６５ ｍｉｎꎬ ４０％ Ａ ~ ４０. ２％ Ａꎬ １. ０ ｍＬ
Ｅ ＝ [(Ｃ －Ｃ) / Ｃ ] ×１００％ꎻ
０ ０
￣１
ｍｉｎ )ꎬ柱温 ３０ ℃ ꎬ进样量 １０ μＬꎬ波长 ３３０ ｎｍꎮ
Ｑ ＝ (Ｃ －Ｃ)Ｖ / Ｗꎻ
０
１.５.２ 线性关系 依次取新绿原酸、绿原酸、隐绿
Ｄ ＝ [Ｃ Ｖ / (Ｃ －Ｃ)Ｖ] ×１００％ꎮ
原酸、异绿原酸 Ａ、异绿原酸 Ｂ、异绿原酸 Ｃ 标准品 １ １ ０
式中:Ｃ 为吸附前绿原酸类物质浓度( ｍｇ
适量ꎬ加 ６０％乙醇溶解得混合标准品溶液ꎬ按比例 ０
￣１
ｍＬ )ꎻ Ｃ 为 吸 附 后 绿 原 酸 类 物 质 浓 度 ( ｍｇ
分别稀释至相应浓度梯度进行 ＨＰＬＣ 分析ꎮ
￣１
ｍＬ )ꎻ Ｃ 为 解 吸 后 绿 原 酸 类 物 质 浓 度 ( ｍｇ
１.５.３ 精密度 取混合标准品溶液重复进样 ５ 次ꎬ １
￣１
ｍＬ )ꎻＶ 为吸附液体积( ｍＬ)ꎻＷ 为树脂重量( ｇ)ꎻ
以峰面积计算新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿
Ｖ 为解吸液体积(ｍＬ)ꎮ
原酸 Ａ、异绿原酸 Ｂ、异绿原酸 Ｃ 的 ＲＳＤ 值ꎮ １
１.５.４ 重复性 取甜叶菊叶粉末平行制备 ６ 份样品溶 １.７ ＸＡＤ￣１６ 树脂吸附与解析性能的优化
液进行测定ꎬ以峰面积计算新绿原酸、绿原酸、隐绿原 １.７.１ 样品溶液浓度对 ＸＡＤ￣１６ 树脂吸附性能的影
响 以紫外分光光度法测定样品溶液的绿原酸类
酸、异绿原酸 Ａ、异绿原酸 Ｂ、异绿原酸 Ｃ 的 ＲＳＤ 值ꎮ
成分总量ꎬ考察不同样品溶液浓度对 ＸＡＤ￣１６ 树脂
１.５.５ 稳定性 取甜叶菊样品粉末制备样品溶液ꎬ
分别在 ０、４、８、１２、２４ ｈ 进行测定ꎬ以峰面积计算新 吸附性能的影响ꎮ 称取 １.０ ｇ 预处理好的 ＸＡＤ￣１６
绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸 Ａ、异绿原酸 树脂 ５ 份 加 入 ５ 只 具 塞 锥 形 瓶 内ꎬ 再 分 别 加 入
０.３、 ０.６、 １.２、 ２.４、 ３.６ ｍｇｍＬ 浓度的样品溶液
￣１
Ｂ、异绿原酸 Ｃ 的 ＲＳＤ 值ꎮ
１.５.６ 回收率试验 分别取一定体积的混合标准 １０ ｍＬ 于 ２５ ℃ 恒温振摇吸附 ２４ ｈ 后ꎬ测定不同样
品溶液加入甜叶菊样品中ꎬ平行制备 ５ 份样品溶 品溶液浓度条件下 ＸＡＤ￣１６ 对甜叶菊叶中绿原酸
液进行 ＨＰＬＣ 分析ꎬ以峰面积计算新绿原酸、绿原 类物质的吸附率ꎮ
酸、隐绿原酸、异绿原酸 Ａ、异绿原酸 Ｂ、异绿原酸 １.７.２ 样品溶液 ｐＨ 对 ＸＡＤ￣１６ 树脂吸附性能的影
响 称取 １.０ ｇ 预处理好的 ＸＡＤ￣１６ 树脂 ３ 份加入
Ｃ 的回收率ꎮ
１.６ 树脂型号的筛选 ３ 只具塞锥形瓶内ꎬ将样品溶液( ｐＨ ５.６) 的 ｐＨ 值
１.６.１ 树脂预处理 取 ８ 种型号的大孔吸附树脂适 调节为 ｐＨ ５.０、ｐＨ ４.０、ｐＨ ３.０ꎬ各取 １０ ｍＬ 加入锥
量ꎬ先向各种树脂中加入无水乙醇浸泡 ２４ ｈꎬ然后 形瓶内于 ２５ ℃ 恒温振摇吸附 ２４ ｈ 后依 次 进 行
用去离子水洗净乙醇至无醇味为止ꎻ再依次用 ４％ ＨＰＬＣ 分析ꎬ考察不同 ｐＨ 条件下 ＸＡＤ￣１６ 对甜叶
ＨＣｌ 溶液和 ２％ ＮａＯＨ 溶液处理各树脂ꎬ浸泡 ２ ~ ４ 菊叶中绿原酸类成分的吸附能力ꎮ
ｈ 后洗至出水 ｐＨ 为中性ꎬ备用ꎮ １.７.３ 乙醇体积分数对 ＸＡＤ￣１６ 树脂解析性能的影
１.６.２ 不同型号树脂之间的比较 以紫外分光光 响 以紫外分光光度法测定不同体积分数乙醇解
度法所测绿原酸类成分的总量为指标ꎬ比较八种 析液中绿原酸类成分总量ꎮ 称取 １.０ ｇ 预处理好
