Page 133 - 《广西植物》2020年第5期

５ 期 田守征等: 剑叶龙血树内生放线菌活性菌株的筛选和鉴定 ７ ２ ９

性ꎮ 目前已得到的具有多种生物活性的聚酮类化 赭曲霉菌(Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｗｅｓｔｅｒｄｉｊｋｉａｅ)ꎬ以上菌株均为课
合物和非核糖体多肽类化合物大多由放线菌产生 题组前期保存ꎮ
(Ｐａｎｃｈａｎａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１３)ꎮ 此外植物内生菌具 １.２ 肿瘤细胞株
有产生与宿主同样或不同的活性次级代谢产物的 人乳腺癌肿瘤细胞株 ＭＣＦ￣７ 及人肝癌肿瘤细
能力ꎬ对于新药产生途径以及药用植物的保护都 胞株 Ｈｅｐ Ｇ２ 购 买 自 美 国 模 式 培 养 物 保 藏 中 心

具有重要意义ꎮ (ＡＴＣＣꎬ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄꎬ Ｍａｎａｓｓａｓꎬ ＶＡ ２０１１０ ＵＳＡ)ꎮ
剑叶龙血树( Ｄｒａｃａｅｎａ ｃｏｃｈｉｎｃｈｉｎｅｎｓｉｓ) 广泛分 １.３ 培养基

布于我国(云南、海南、广西) 及其他东南亚国家ꎬ １.３.１ 病原细菌培养基 ＬＢ:ｔｒｙｐｔｏｎｅ １０ ｇꎬｙｅａｓｔ ｅｘ￣
被列入我国国家重点保护野生药材物种名录ꎬ属 ｔｒａｃｔ ５ ｇꎬＮａＣｌ １０ ｇꎬａｇａｒ １５ ｇꎬｄｄＨ Ｏ １ＬꎬｐＨ ７.２ ~
２
国家Ⅱ级保护植物ꎬ« 中国植物红皮书—稀有濒危 ７.６ꎮ
植物(第一册)»(１９９２ 年)将其收录为渐危种ꎮ 龙 １.３.２ 病原真菌培养基 沙保氏培养基:ｇｌｕｃｏｓｅ ４０
血树树脂药用ꎬ可提取中医传统外伤科用药“ 龙血 ｇꎬｐｅｐｔｏｎｅ １０ ｇꎬ ａｇａｒ １５ ｇꎬ ｄｄＨ Ｏ １Ｌꎬ ｐＨ ６. ０ꎮ
２
竭”ꎬ在治疗心血管病、抗炎、抗肿瘤、治疗子宫内 ＰＤＡ:ｐｏｔａｔｏ ２００ ｇ ( 煮沸 ２０ ｍｉｎ 后过滤ꎬ取汁弃
膜异位症及止血活血等方面具有较好的疗效ꎮ 然 渣)ꎬｇｌｕｃｏｓｅ ２０ ｇꎬａｇａｒ １５ ｇꎬｄｄＨ Ｏ １ ＬꎬｐＨ ６.０ ~
２
而ꎬ剑叶龙血树生长缓慢ꎬ血竭产量低ꎬ收获血竭 ７.０ꎮ

会严重破坏百年生长的植物ꎮ 本文将研究剑叶龙 １.３.３ 放线菌活化增殖培养基 ＹＭＧ:ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ
血树内生放线菌的抗菌和抗肿瘤生物活性ꎬ筛选 ４ ｇꎬｇｌｕｃｏｓｅ ４ ｇꎬｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ １０ ｇꎬａｇａｒ １５ ｇꎬｄｄＨ Ｏ
２
并鉴定活性显著的菌株ꎬ并对其发酵条件进行考 １ＬꎬｐＨ ７.２ ~ ７.６ꎮ
察ꎬ为下一步从中发掘新型抗菌抗肿瘤活性成分 １.３. ４ 发 酵 培 养 基 Ｍｅｄｉｕｍ Ａ: ｍａｎｎｉｔｏｌ ２０ ｇꎬ
奠定基础ꎬ并对濒危名贵野生药材剑叶龙血树的 ｐｅｐｔｏｎｅ ２０ ｇꎻＭｅｄｉｕｍ Ｂ:ｏａｔ ２０ ｇꎬｔｒａｃｅ ｓａｌｔ １ ｍＬꎻ
保护有一定意义ꎮ Ｍｅｄｉｕｍ Ｃ:ｐｏｔａｔｏ ２００ ｇ ( 煮沸 ２０ ｍｉｎ 后过滤ꎬ取汁
弃渣)ꎬ ｇｌｕｃｏｓｅ １０ ｇꎻ Ｍｅｄｉｕｍ Ｄ: ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ４ ｇꎬ
１ 材料与方法 ｇｌｕｃｏｓｅ ４ ｇꎬｍａｌｔ ｅｘｔｒａｃｔ １０ ｇꎻＭｅｄｉｕｍ Ｅ: ｐｅｐｔｏｎｅ ２

ｇꎬｂｅｅｆ ｅｘｔｒａｃｔ ３ ｇꎬ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ３ ｇꎬ ｇｌｙｃｅｒｏｌ １０ ｇꎬ
１.１ 菌种 Ｋ ＨＰＯ １ ｇꎬ ＫＨ ＰＯ １ ｇꎬ ＭｇＳＯ ７Ｈ Ｏ ０. ３ ｇꎬ
２ ４ ２ ４ ４ ２
１.１.１ 内生放线菌 以中国云南西双版纳及越南 ＮａＣｌ １ ｇꎻＭｅｄｉｕｍ Ｆ:ｓｏｌｕｂｌｅ ｓｔａｒｃｈ １０ ｇꎬｇｌｕｃｏｓｅ ２ ｇꎬ
地区剑叶龙血树植物组织中分离得到的 ３００ 余株 ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ２ ｇꎬＫ ＨＰＯ １ ｇꎬＭｇＳＯ ７Ｈ Ｏ １ ｇꎬ
２ ４ ４ ２
内生放线菌为材料ꎬ由云南大学云南省微生物研 (ＮＨ ) ＳＯ １ ｇꎬ ＣａＣＯ ２ ｇꎬ ＮａＣｌ １ ｇꎬ ｔｒａｃｅ ｓａｌｔ １
４ ２ ４ ３
究所提供ꎮ ｍＬꎻＭｅｄｉｕｍ Ｇ:ｓｏｌｕｂｌｅ ｓｔａｒｃｈ ２ ｇꎬｇｌｕｃｏｓｅ ２０ ｇꎬｙｅａｓｔ
１.１.２ 病原指示菌 金黄色葡萄球菌 (Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｘｔｒａｃｔ ２ ｇꎬ ｐｅｐｔｏｎｅ ２ ｇꎬ Ｋ ＨＰＯ ０. ５ ｇꎬ
２ ４
ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ２５９２３)、枯草芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＭｇＳＯ ７Ｈ Ｏ ０.５ ｇꎬＣａＣＯ ２ ｇꎬ ＮａＣｌ ４ ｇꎻＭｅｄｉｕｍ
４ ２ ３
ＡＴＣＣ６６３３)、 白 色 葡 萄 球 菌 ( Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｂｕｓ Ｈ:ｓｏｌｕｂｌｅ ｓｔａｒｃｈ ２０ ｇꎬ ＫＮＯ １ ｇꎬ Ｋ ＨＰＯ ０. ５ ｇꎬ
３ ２ ４
１０２９)、大肠杆菌(Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ２５９２２)、铜绿 ＭｇＳＯ ７Ｈ Ｏ ０. ５ ｇꎬ ＮａＣｌ ０. ５ ｇꎬ ＦｅＳＯ ７Ｈ Ｏ
２
２
４
４
假单胞菌 (Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＰＡ０１)、鼠伤寒 ０.０１ ｇꎮ 以 上 培 养 基 均 为 １ Ｌꎬ ｐＨ７. ２ ~ ７. ６ꎬ ａｇａｒ
沙门氏菌(Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ χ ８９５６)、粪肠球 １５ ｇꎮ
菌(Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＡＴＣＣ２９２１２)、曼胞不动杆菌 １.３.５ 肿瘤细胞培养基 ＤＭＥＭ 培养基ꎮ
(Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｉｉ ＡＴＣＣ１９６０６)、 克 雷 伯 氏 菌 １.４ 主要试剂和仪器
( Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ＡＴＣＣ１３８８３ )、 白 色 念 珠 菌 蒸馏水ꎬ无水乙醇、甲醇、冰乙酸、乙酸乙酯、
(Ｃａｎｉｄｉａ ａｌｂｉｃａｎｓ ＳＣ ５３１４)、禾谷镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍ 丙 酮 等 均 为 分 析 纯ꎮ Ｎ￣１０００ 旋 转 蒸 发 仪
ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ) 、炭黑曲霉菌(Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｃａｒｂｏｎａｒｉｕｓ)、 (ＥＹＥＬＡꎬ日本)ꎬＴＨＩ￣３００ 恒温培养摇床( 上海一