Page 10 - 《广西植物》2024年第12期

２ １ ６ ８ 广 西 植 物 ４４ 卷

突变用位置、类型(缺失或插入)和碱基的组合表示ꎬＷＴ 和 Ｍ 分别代表野生型和突变体ꎮ
Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｒｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｓ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｃａｔｉｏｎꎬ ｔｙｐｅ (ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｒ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ)ꎬ ａｎｄ ｂａｓｅｓꎬ ｗｉｔｈ ＷＴ ａｎｄ Ｍ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅ ａｎｄ
ｍｕｔａｎｔｓꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
图 ５ 纯合突变体靶点序列
Ｆｉｇ. ５ Ｔａｒｇｅｔ ｌｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ ｍｕｔａｎｔｓ

(图 ６:Ｄ)ꎮ 整体而言ꎬＳｌａｃｔｉｎ 更适合用作内参基 代表了一类由寄主基因突变控制的广谱抗性新机

因ꎬＭ２、Ｍ７ 和 Ｍ８ 突变效果更为明显ꎮ 制ꎬ能够参与多种生物和非生物胁迫响应( Ｎｇｕｙｅｎ
２.４ 编辑株青枯病抗性表型 ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎮ 基于此ꎬ本研究利用 ＣＲＩＳＰＲ / Ｃａｓ９
基于基因测序和定量表达结果ꎬ对敲除效果明 系统成功构建了 ＳｌＭＬＯ１ / ６ 基因编辑载体ꎬ经转化
显的 ３ 个纯合单株 Ｍ２、Ｍ７ 和 Ｍ８ 进行青枯病抗性 番茄和测序鉴定ꎬ获得 ９ 株突变体ꎬ约 ５０％为纯合
表型鉴定ꎮ 发现接种青枯菌后ꎬ植株长势明显优于 突变株ꎮ
野生型( ＷＴ) 番茄ꎬ观察期内基本未出现病症( 图 Ｓｌｍｌｏ１ / ６ 突变体不同位点编辑效果和类型不
７)ꎬ说明 ＳｌＭＬＯ１ / ６ 可能参与番茄青枯病负调控ꎮ 同ꎬ纯合突变包括片段缺失和单碱基插入ꎬ说明二
倍体植 物 基 因 编 辑 多 产 生 简 单 突 变 ( Ｍａ ｅｔ ａｌ.ꎬ
３ 讨论与结论 ２０１５)ꎮ Ｍ２ 和 Ｍ８ ＳｌＭＬＯ１ 编码蛋白分别丢失了
２０ 个和 ３ 个氨基酸且发生移码突变ꎻＭ７ ＳｌＭＬＯ６
青枯 菌 具 有 广 泛 的 环 境 和 生 态 适 应 性ꎮ 目 丢失了 ５ 个氨基酸但新增了 １ 个亮氨酸ꎬ下游序列
前ꎬ利用正向遗传学仅在拟南芥中克隆到一个抗 不变ꎻＭ９ ＳｌＭＬＯ６ 密码子 ＧＴＧ 突变为 ＧＴＴꎬ两者均
青枯病基因 ＲＲＳ１ ( Ｄｅｓｌａｎｄｅｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９８)ꎬ相关 翻译缬氨酸ꎬ但后续氨基酸移码突变ꎬ推测基因功
基因鉴定、功能研究及生产应用还非常有限ꎮ 因 能转变主要源自氨基酸丢失和移码突变ꎮ 蒲艳等

此ꎬ广谱抗性挖掘和感病基因失活成为研究热点ꎮ (２０１８)研究表明ꎬ多个活性 Ｕ６ 启动子可驱动多个
与其他基因功能研究技术相比ꎬ基因编辑具有克 ｓｇＲＮＡꎬ造成染色体大片段缺失ꎮ 同时ꎬ稳定转化
隆策略相对简单、可多靶点敲除、脱靶率较低、适 植株中以碱基缺失和插入为主ꎬ可能是 ｓｇＲＮＡ 和
用 范 围 广 等 优 点 ( Ｍａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５ )ꎮ 利 用 Ｃａｓ９ 可持续表达ꎬ靶点产生的碱基替换被继续编

ＣＲＩＳＰＲ / Ｃａｓ９ 基因编辑技术定向敲除不利基因ꎬ 辑ꎮ 非同源末端连接( ｎｏｎ￣ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｅｎｄ ｊｏｉｎｉｎｇꎬ
能实现目标性状的遗传改良ꎮ 并且ꎬ通过后代遗 ＮＨＥＪ)修复过程中容易发生错误ꎬ使 ＤＮＡ 断裂位
传分离可以获得不含载体元件的突变株系ꎮ ｍｌｏ 置 产 生 小 片 段 缺 失 或 插 入ꎻ 而 同 源 重 组