Page 18 - 《广西植物》2025年第10期
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１ ７ ４ ８ 广 西 植 物 ４５ 卷
药可持续利用研究重点实验室ꎮ 醇－水ꎬ７０ ∶ ３０ → ９０ ∶ １０ꎬ Ｖ / Ｖ) 及 半 制 备 ＨＰＬＣ
１.２ 主要仪器、设备和试剂 (ＹＭＣ￣ＯＤＳ 柱ꎬ ６０％ 乙腈 － 水ꎬＶ / Ｖꎬλ ＝ ２２０ / ２５４
Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ￣６００ ＭＨｚ、ＡＶ￣４００ ＭＨｚ 超导核磁共 ｎｍ)分离得到化合物 ５ (３５.０ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.２￣４ (４０.０
振波谱仪(德国 Ｂｒｕｋｅｒ 公司)ꎻＡｇｉｌｅｎｔ １２９０ ＵＰＬＣ / ｇ)经 ＲＰ￣１８ 柱色谱ꎬ以甲醇－水(５０ ∶ ５０→９０ ∶ １０ꎬ
６５４５ Ｑ￣ＴＯＦ 质谱仪(安捷伦科技有限公司)ꎻＹＭＣ￣ Ｖ / Ｖ)梯度洗脱后ꎬ通过 ＲＰ￣１８ 柱色谱( 甲醇 －水ꎬ
ＯＤＳ 柱(填料粒径 ５ μｍꎬ直径 １０ ｍｍꎬ长 ２５０ ｍｍꎬ ６０ ∶ ３０ → ９０ ∶ １０ꎬ Ｖ / Ｖ) 及 半 制 备 ＨＰＬＣ ( ＹＭＣ￣
北京赛谱锐思科技有限公司)ꎻ ＬＣ￣５２ 半制备型高 ＯＤＳ 柱ꎬ４０％ 乙腈－水ꎬＶ / Ｖꎬλ ＝ ２２０ / ２５４ ｎｍ) 和
效液相色 谱 仪 ( 北 京 赛 普 锐 斯 科 技 有 限 公 司)ꎻ 反复重 结 晶ꎬ 分 离 得 到 化 合 物 １ ( ３０. ０ ｍｇ)、 ２
ＭＣＩ ＣＨＰ￣２０Ｐ ＧＥＬ(日本三菱化学公司)ꎻＳｅｐｈａｄｅｘ (１００.０ ｍｇ)、３ (７０.０ ｍｇ)、４ (１００.０ ｍｇ)、６ (１０.０
ＬＨ￣２０(Ｐｈａｒｍａｃｉａ 公司)ꎻ柱层析硅胶 Ｇ(２００ ~ ３００ ｍｇ)、１０ (１００.０ ｍｇ)ꎮ
目、６０ ~ ８０ 目)和薄层层析硅胶 Ｈ( 青岛海洋化工 １.３.２ 细胞毒活性测试 ( ＣＣＫ￣８ 法) 本实验选用
厂)ꎻ色谱纯乙腈( 德国默克公司)ꎻ色谱纯 甲 酸 人 神 经 母 细 胞 瘤 细 胞 ＳＨ￣ＳＹ５Ｙ、 人 胰 腺 癌 细 胞
(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)ꎻ水为超纯 ＳＷ１９９０、小鼠乳腺癌细胞 ４Ｔ１ꎮ 细胞置于 ＤＭＥＭ
￣１
水ꎻ石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇等有机试剂 培养基并加入双抗 (青霉素 １００ ＵｍＬ 和链霉素
为国产 ＡＲ 级试剂( 云南利妍科技有限公司)ꎻ低 １００ μｇｍＬ )ꎬ置于 ３７ ℃ 、５％ＣＯ 培养箱中培养
￣１
２
温冷却循环泵( 巩义市予华仪器有限责任公司)ꎻ 至细胞覆盖率达 ９０％以上时传代ꎬ生长状态良好
氘代试剂(北京伊诺凯有限公司)ꎻ旋转蒸发仪( 东 的细胞用于实验研究ꎮ
京理化器械株式会社)ꎻＥＬＸ￣８００ 酶标仪( 美国宝 取 ９６ 孔细胞培养板ꎬ每孔加入浓度为每毫升
３
特公司)ꎻＺＨＪＨ￣Ｃ１１０９Ｃ 超净工作台( 上海智诚分 ５ × １０ 个细胞的悬液 １００ μＬꎬ３７ ℃ 、５％ＣＯ 培养
２
析仪器制造有限公司)ꎻＨＨＢ１１３６０￣Ｓ ＣＯ 培养箱 箱中贴壁培养 ２４ ｈ 后ꎬ吸弃原培养液ꎬ加入质量浓
２
(上海跃进医疗器械厂)ꎻＣＣＫ￣８ 试剂盒 ( 上海泰 度分别为 １００、５０、２５ μｍｏｌＬ 的受试药物(ＤＭＳＯ
￣１
溶解)ꎬ每个质量浓度 ３ 个复孔ꎬ空白组加入等量
坦科技股份有限公司)ꎻ人神经母细胞瘤细胞 ＳＨ￣
ＳＹ５Ｙ、人胰 腺 癌 细 胞 ＳＷ１９９０、 小 鼠 乳 腺 癌 细 胞 含 ０.１％ＤＭＳＯ 的培养基ꎬ以紫杉醇为阳性对照ꎬ３７
４Ｔ１(武汉普诺赛生命科技有限公司)ꎮ ℃ 、５％ＣＯ 培养箱中培养 ２４ ｈꎮ 取出细胞培养板ꎬ
２
１.３ 实验方法 每孔加入含 １０％ＣＣＫ￣８ 的培养基ꎬ继续培养 ２ ｈꎮ
１.３.１ 提取与分离 对干燥的昆明山海棠根茎 ２０ 于酶联免疫检测仪 ４５０ ｎｍ 处测量各孔的吸光度
ｋｇ 进行粉碎后以 ６０ Ｌ ９０％乙醇室温浸泡过夜ꎬ然 (Ａ)ꎬ计算各组细胞 存 活 率:细 胞 存 活 率 (％) ＝
后回流提取 ２ ｈꎬ共 ３ 次ꎬ合并 ３ 次提取液浓缩至无 (Ａ 样品组 － Ａ 空白对照组 ) / ( Ａ 溶剂对照组 － Ａ 空白对照组 ) × １００ꎮ
乙醇味ꎬ以等体积水分散ꎬ用 ２ 倍量乙酸乙酯萃 试验重复 ３ 次ꎮ
取ꎬ共 ３ 次ꎬ合并乙酸乙酯提取物ꎬ得到乙酸乙酯
２ 结果与分析
部位ꎮ 乙酸 乙 酯 部 位 ５００. ０ ｇꎬ 硅 胶 柱 层 析 ( ５. ０
ｋｇꎬ２３ ｃｍ × ７５ ｃｍ)ꎬ以石油醚－乙酸乙酯(９８ ∶ ２、
９５ ∶ ５、９０ ∶ １０、８０ ∶ ２０ꎬ Ｖ / Ｖ) 洗脱ꎬ获得 ４ 个流分 ２.１ 化合物结构鉴定
Ｆｒ.１－Ｆｒ.４ꎬ将各流分进行 ＬＣ￣ＭＳ 分析ꎬ发现流分 从昆明山海棠乙酸乙酯萃取物中得到的 １０ 个
Ｆｒ.２ 主要成分为二萜ꎬ因此选择这部分作为研究 松香烷 型 二 萜 类 化 合 物ꎬ 分 别 鉴 定 为 雷 酚 内 酯
对象ꎮ Ｆｒ.２ 经 ＭＣＩ 柱色谱ꎬ以甲醇－水 (７０ ∶ ３０→ (１)、 异 雷 酚 新 内 酯 ( ２ )、 ｔｒｉｐｔｏｂｅｎｚｅｎｅ Ｉ ( ３ )、
１００ ∶ ０ꎬＶ/ Ｖ) 梯度洗脱后ꎬ得到流分 Ｆｒ.２￣１－Ｆｒ.２￣４ꎮ ｔｒｉｐｔｏｔｉｎ Ａ ( ４ )、 ｔｒｉｐｔｏｔｉｎ Ｂ ( ５ )、 ｔｒｉｐｔｏｂｅｎｚｅｎｅ Ｎ
Ｆｒ.２￣２ ( ２５. ０ ｇ) 经 硅 胶 柱 色 谱ꎬ 以 氯 仿 － 丙 酮 ( ６ )、 ｔｒｉｐｔｏｂｅｎｚｅｎｅ Ｍ ( ７ )、 ｗｉｌｆｏｒｏｌ Ｆ ( ８ )、
ｔｒｉｐｔｏｂｅｎｚｅｎｅ Ａ (９)、对醌 ２１ (１０)ꎬ化学结构如图
(９０ ∶ １０、８０ ∶ ２０ꎬＶ / Ｖ) 梯度洗脱后ꎬ通过 ＲＰ￣１８
柱色 谱 ( ７０％ 甲 醇 － 水ꎬ Ｖ / Ｖ) 和 半 制 备 ＨＰＬＣ １ 所示ꎮ
(ＹＭＣ￣ＯＤＳ 柱ꎬ ５０％ 乙 腈 － 水ꎬ Ｖ / Ｖꎬ λ ＝ ２２０ / ２５４ 化 合 物 １ 白 色 粉 末ꎬ ＨＲ￣ＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ:
－ ２０.０
ｎｍ)ꎬ分离得到化合物 ７ (７.０ ｍｇ)、８ (２０.０ ｍｇ)、９ ３１１.１６７ ２ [Ｍ－Ｈ] ꎮ 分子式为 Ｃ Ｈ Ｏ ꎮ [α] Ｄ ＋
２４
３
２０
１
(１５.０ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.２￣３ (３０９.０ ｇ)经 ＲＰ￣１８ 柱色谱(甲 ３５.００ ( ｃ ＝ ０.２９ꎬＣＨＣｌ ) ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ ( ６００ ＭＨｚꎬ
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