Page 107 - 《广西植物》2025年第2期
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２ 期 张宝等: 蛇含委陵菜的三萜类成分及其细胞毒活性研究 ３ ０ ９
胶柱层析( 硅胶:３００ ~ ４００ 目ꎻ洗脱剂:石油醚－乙 ３.１ 结构鉴定
酸乙酯 ９ ∶ １ꎬ Ｖ / Ｖ)、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱 层 析 ( 甲 化合物 １ 白色粉末ꎻ易溶于吡啶ꎬ溶于甲醇ꎬ
醇)ꎬ得到化合物 １１(３.８ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.Ｃ４.２.５ 依次经正 微溶于丙酮、二氯甲烷ꎬ不溶于水、石油醚ꎻ薄层色
相硅胶柱层析(硅胶:３００ ~ ４００ 目ꎻ洗脱剂:石油醚－ 谱法用 １０％ 硫酸 －乙醇显色见深紫色斑点ꎮ ＨＲ￣
－
乙酸乙酯 ７ ∶ １ꎬＶ/ Ｖ)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ ４０Ｆ 柱层析(甲 ＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ: ４５５.３５１ ５ [ Ｍ－Ｈ] ( Ｃ Ｈ Ｏ ꎬ理论
３ ０ ４７ ３
１
醇)、半制备液相(甲醇－水 ２２ ∶ ７８ꎬＶ/ Ｖ)分离纯化ꎬ 值:４５５.３５２ ０)ꎬ分子式为 Ｃ Ｈ Ｏ ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ (４００
３ ０ ４８ ３
得到化合物 ６(１２.８ ｍｇ)、化合物 ７(５.９ ｍｇ)ꎮ ＭＨｚꎬ Ｃ Ｄ Ｎ) δ: ５.５０ (１Ｈꎬ ｏｖｅｒｌａｐꎬ Ｈ￣１２)ꎬ ３.４７
５ ５
Ｆｒ. Ｄ 经 ＭＣＩ 柱 层 析 ( 乙 醇 － 水 ３０ ∶ ７０ꎬ (１Ｈꎬ ｔꎬ Ｊ ＝ ８. ０ Ｈｚꎬ Ｈ￣３)ꎬ ２. ６４ ( １Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝
４０ ∶ ６０ꎬ ５０ ∶ ５０ꎬ ６０ ∶ ４０ꎬ ７０ ∶ ３０ꎬ ８０ ∶ ２０ꎬ １１.２ Ｈｚꎬ Ｈ￣１８)ꎬ １. ２５ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ ２３￣ＣＨ )ꎬ １. ２３
３
９０ ∶ １０ꎬ１００ ∶ ０ꎬ Ｖ / Ｖ) 得 到 ８ 个 组 分 ( Ｆｒ. Ｄ１ － (３Ｈꎬ ｓꎬ ２７￣ＣＨ )ꎬ １.０５ (３Ｈꎬ ｓꎬ ２６￣ＣＨ )ꎬ １.０３
３ ３
Ｆｒ.Ｄ８)ꎮ Ｆｒ. Ｄ４ 经 正 相 硅 胶 柱 层 析 ( 硅 胶:３００ ~ (３Ｈꎬ ｓꎬ ２４￣ＣＨ )ꎬ １.００ (３Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ６.４ Ｈｚꎬ ３０￣
３
４００ 目ꎻ洗 脱 剂:二 氯 甲 烷 － 甲 醇 ２５ ∶ １ →１ ∶ １ꎬ ＣＨ )ꎬ ０.９５ (３Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ６.０ Ｈｚꎬ ２９￣ＣＨ )ꎬ ０.８８
３ ３
Ｖ / Ｖ) 得 到 ９ 个 组 分 ( Ｆｒ. Ｄ４. １ － Ｆｒ. Ｄ４. ９)ꎬ 其 中 (３Ｈꎬ ｓꎬ ２５￣ＣＨ )ꎻ １３ Ｃ￣ＮＭＲ (１００ ＭＨｚꎬ Ｃ Ｄ Ｎ)
３ ５ ５
Ｆｒ.Ｄ４.６经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱层析( 甲醇) 分离纯 δ: １８０.４ ( Ｃ￣２８)ꎬ １３９.７ ( Ｃ￣１３)ꎬ １２６.１ ( Ｃ￣１２)ꎬ
化ꎬ得到化合物 ８(２０.６ ｍｇ)ꎮ ７８.６ (Ｃ￣３)ꎬ ５６.３ (Ｃ￣５)ꎬ ５４.０ (Ｃ￣１８)ꎬ ４８.５ ( Ｃ￣
Ｆｒ. Ｉ 减压浓缩后析出少量白色晶体ꎬ快速过滤 ９)ꎬ ４２.７ ( Ｃ￣１７)ꎬ ４０. ４ ( Ｃ￣１４)ꎬ ４０. ０ ( Ｃ￣１９)ꎬ
获得晶体ꎬ晶体用甲醇－水(５０ ∶ ５０ꎬＶ/ Ｖ) 溶解ꎬ经 ３９.９ ( Ｃ￣４ꎬ ８ꎬ ２０)ꎬ ３９.５ ( Ｃ￣１)ꎬ ３７.９ ( Ｃ￣１３)ꎬ
Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ ４０Ｆ 柱层析(甲醇－水 ５０ ∶ ５０ꎬＶ/ Ｖ)ꎬ ３７.８ (Ｃ￣１０)ꎬ ３４.０ (Ｃ￣７)ꎬ ３１.５ (Ｃ￣２１)ꎬ ２９.３ (Ｃ￣
得到化合物 １０(１３.５ ｍｇ)、化合物 １５(１８.１ ｍｇ)ꎮ ２３)ꎬ ２９.２ ( Ｃ￣１５)ꎬ ２８. ６ ( Ｃ￣２)ꎬ ２５. ４ ( Ｃ￣１６)ꎬ
２.２ 细胞毒活性测试 ２４.４ ( Ｃ￣２７)ꎬ ２４. １ ( Ｃ￣１１)ꎬ ２１. ９ ( Ｃ￣３０)ꎬ １９. ３
细胞毒活性测试参考张涵等(２０２２) 中的 ＭＴＴ ( Ｃ￣６)ꎬ １８.０ (Ｃ￣２６)ꎬ １７.９ (Ｃ￣２９)ꎬ １７.０ (Ｃ￣２４)ꎬ
法ꎬ并略作修改ꎮ 取对数生长期 Ｈｅｌａ 细胞ꎬ调整细 １６.１ ( Ｃ￣２５ )ꎮ 以 上 数 据 与 文 献 ( Ｓｉｄｊｕｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ
胞浓度为每毫升 ６×１０ 个ꎬ接种于 ９６ 孔板中ꎬ每孔 ２０１４)报道的基本一致ꎬ故鉴定化合物 １ 为乌苏酸
４
１００ μＬꎬ实验设置空白对照组、阳性对照组( 阿霉 (ｕｒｓｏｌｉｃ ａｃｉｄ)ꎮ
素)和待测药物组(各待测化合物)ꎬ每组设置 ３ 个 化合物 ２ 白色粉末ꎻ易溶于吡啶ꎬ溶于二氯
复孔ꎬ在 ５％ＣＯ 、３７ ℃ 条件下培养 ２４ ｈ 给药ꎬ阳性 甲烷ꎬ微溶于丙酮ꎬ不溶于水、石油醚ꎻ薄层色谱法
２
对照组给予浓度为 ０、０.０６２５、０.１２５、０.２５、０.５、１ 用 １０％硫酸 － 乙 醇 显 色 见 暗 红 色 斑 点ꎮ ＨＲ￣ＥＳＩ￣
－
￣１
μｍｏｌＬ 的阿霉素ꎬ待测药物组 给 予 浓 度 为 ０、 ＭＳ ｍ / ｚ: ５１３.３５７ ５ [ Ｍ －Ｈ] ( Ｃ Ｈ Ｏ ꎬ理论值:
５
３２
４９
１
３.１２５、６.２５、１２.５、２５、５０ μｍｏｌＬ 的各待测化合 ５１３.３５８ ５)ꎬ 分 子 式 为 Ｃ Ｈ Ｏ ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ ( ４００
￣１
３２ ５０ ５
物ꎮ 各组继续培养 ２４ ｈꎬ于避光下每孔加 ２０ μＬ ＭＨｚꎬ ＣＤＣｌ ) δ: ５. ３１ ( １Ｈꎬ ｔꎬ Ｊ ＝ ２. ４ Ｈｚꎬ Ｈ￣
３
ＭＴＴ 孵育 ４ ｈ 后取出ꎬ弃细胞上清液ꎬ并吸尽残留ꎬ １２)ꎬ ４.４７ (１Ｈꎬ ｄｄꎬ Ｊ ＝ ８.８ꎬ ６.８ Ｈｚꎬ Ｈ￣３)ꎬ ２.５０
每孔加入 １５０ μＬ ＤＭＳＯꎬ置摇床上振荡 １０ ｍｉｎꎬ于 (１Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣１８)ꎬ ２. ０２ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ ＣＯＣＨ )ꎬ １. ２１
３
酶标仪 ４９０ ｎｍ 波长下检测各孔吸光度( ＯＤ)ꎬ根 (３Ｈꎬ ｓꎬ ２７￣ＣＨ )ꎬ １.１８ (３Ｈꎬ ｓꎬ ２９￣ＣＨ )ꎬ ０.９２
３ ３
据 ＯＤ 值计算抑制率ꎬ采用 Ｐｒｉｓｍ ８ 计算 ＩＣ ꎮ 实 (６Ｈꎬ ｏｖｅｒｌａｐꎬ ２５ꎬ ３０￣ＣＨ )ꎬ ０. ８４ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ ２３￣
５０ ３
验重复 ３ 次ꎮ ＣＨ )ꎬ ０.８２ (３Ｈꎬ ｓꎬ ２４￣ＣＨ )ꎬ ０.６９ (３Ｈꎬ ｓꎬ ２９￣
３
３
１３
ＣＨ )ꎻ Ｃ￣ＮＭＲ ( １０ ＭＨｚꎬ ＣＤＣｌ ) δ: １８４.６ ( Ｃ￣
３ ３
３ 结果与分析 ２８)ꎬ １７１.１ (ＣＯＣＨ )ꎬ １３７.８ ( Ｃ￣１３)ꎬ １２９.３ ( Ｃ￣
３
１２)ꎬ ８０. ９ ( Ｃ￣３)ꎬ ７３. ０ ( Ｃ￣１９)ꎬ ５５. １ ( Ｃ￣５)ꎬ
从蛇含委陵菜抗肿瘤活性部位中ꎬ分离鉴定 ５２.６ (Ｃ￣１８)ꎬ ４７.７ (Ｃ￣１７)ꎬ ４７.０ (Ｃ￣９)ꎬ ４１.０ (Ｃ￣
了 １５ 个三萜类化合物(图 １)ꎬ其中化合物 １、２、４、 ２０)ꎬ ４０. ９ ( Ｃ￣１４)ꎬ ３９. ９ ( Ｃ￣８)ꎬ ３８. ０ ( Ｃ￣１)ꎬ
６、１２ 对 人 宫 颈 癌 细 胞 株 Ｈｅｌａ 具 有 一 定 的 抑 制 ３７.６ (Ｃ￣４)ꎬ ３７.５ (Ｃ￣２２)ꎬ ３６.９ (Ｃ￣１０)ꎬ ３２.５ (Ｃ￣
作用ꎮ ７)ꎬ ２８.１ ( Ｃ￣１５)ꎬ ２８. ０ ( Ｃ￣２９)ꎬ ２７. ４ ( Ｃ￣２３)ꎬ
