Page 62 - 《广西植物》2025年第2期

２ ６ ４ 广 西 植 物 ４５ 卷
进行了分析ꎬ依托 ｐｓｂＡ－ｔｒｎＨ 序列构建系统聚类 影响ꎬ能否探讨亲缘关系与挥发性物质合成及积
树ꎬ并采用 ＧＣ￣ＭＳ 联用技术对 ２７ 种唇形科植物的 累的相关性ꎮ
挥发油成分进行分析ꎬ拟探讨以下问题:(１) 传统
的形态学分类法易受人为观测误差的影响ꎬ能否 １ 材料与方法
通过 ＤＮＡ 分子水平的鉴定方法高效地明确唇形
科植物种质的种属ꎻ(２) 唇形科植物进化关系复 １.１ 材料
杂ꎬ能否通过结合 ＤＮＡ 条形码的序列分析和系统 ２７ 种唇形科香料植物采集于广东南沙广州市
发育关系探究 ２７ 种唇形科植物的分类归属及亲 农业科学研究院实验基地ꎮ 采摘样品叶片ꎬ迅速
缘关系ꎻ(３)唇形科香料植物的挥发油受多种因素 低温保存ꎮ 详细信息见表 １ꎮ

表 １ 唇形科香料样品资料
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｍｉａｃｅａｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｓａｍｐｌｅｓ
编号 植物名称 编号 植物名称
Ｎｏ. Ｂｏｔａｎｉｃａｌ ｎａｍｅ Ｎｏ. Ｂｏｔａｎｉｃａｌ ｎａｍｅ
Ｓ１ 糖果薄荷 Ｍｅｎｔｈａ × ｐｉｐｅｒｉｔａ ‘Ｃａｎｄｙ Ｍｉｎｔ’ Ｓ１５ 拟美国薄荷 Ｍｏｎａｒｄａ ｆｉｓｔｕｌｏｓａ
Ｓ２ 胡椒薄荷 Ｍｅｎｔｈａ × ｐｉｐｅｒｉｔａ ‘Ｍｉｔｃｈａｍ’ Ｓ１６ 藿香 Ａｇａｓｔａｃｈｅ ｒｕｇｏｓａ
Ｓ３ 留兰香 Ｍｅｎｔｈａ ｓｐｉｃａｔａ Ｓ１７ 香蜂花 Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ
Ｓ４ 辣薄荷 Ｍｅｎｔｈａ × ｐｉｐｅｒｉｔａ Ｓ１８ 碰碰香 Ｐｌｅｃｔｒａｎｔｈｕｓ ‘Ｃｅｒｖｅｚａｎ Ｌｉｍｅ’
Ｓ５ 欧薄荷 Ｍｅｎｔｈａ ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ Ｓ１９ 齿叶薰衣草 Ｌａｖａｎｄｕｌａ ｄｅｎｔａｔａ
Ｓ６ 葡萄柚薄荷 Ｍｅｎｔｈａ × ｐｉｐｅｒｉｔａ ‘Ｇｒａｐｅｆｒｕｉｔ’ Ｓ２０ 荆芥 Ｎｅｐｅｔａ ｃａｔａｒｉａ
Ｓ７ 凤梨薄荷 Ｍｅｎｔｈａ × ｐｉｐｅｒｉｔａ ‘Ｐｉｎｅａｐｐｌｅ Ｍｉｎｔ’ Ｓ２１ 大叶罗勒 Ｏｃｉｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ‘Ｌａｒｇｅ Ｌｅａｆ’
Ｓ８ 姜薄荷 Ｍｅｎｔｈａ ｇｒａｃｉｌｉｓ Ｓ２２ 柠檬罗勒 Ｏ. ｂａｓｉｌｉｃｕｍ‘Ｓｗｅｅｔ Ｂａｓｉｌ’
Ｓ９ 薄荷 Ｍｅｎｔｈａ ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ Ｓ２３ 热那亚罗勒 Ｏ. ｂａｓｉｌｉｃｕｍ ‘Ｇｅｎｏｖｅｓｅ Ｂａｓｉｌ’
Ｓ１０ 香槟薄荷 Ｍｅｎｔｈａ × ｐｉｐｅｒｉｔａ ‘Ｃｈａｍｐａｇｎｅ Ｍｉｎｔ’ Ｓ２４ 迷迭香 Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ
Ｓ１１ 风轮菜 Ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ Ｓ２５ 费森杂种荆芥 Ｎｅｐｅｔａ × ｆａａｓｓｅｎｉｉ
Ｓ１２ 甘牛至 Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｍａｊｏｒａｎａ Ｓ２６ 回回苏 Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ. ｃｒｉｓｐａ
Ｓ１３ 阔叶百里香 Ｔｈｙｍｕｓ ｐｕｌｅｇｉｏｉｄｅｓ Ｓ２７ 紫苏 Ｐ. ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ ｖａｒ. ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ
Ｓ１４ 白花牛至 Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ ｖａｒ. ｇｒａｃｉｌｅ

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仪器与试剂: 利用 ＴＩＡＮＧＥＮ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＧＡＡＣＧＴＡＡＴＧＣＴＣ￣３′ꎬ 上游 ５′￣ＣＧＣＧＣＡＴＧＧＴＧＧＡ
ＤＮＡ Ｋｉｔ(ＤＰ３０５￣０２ꎬＴＩＡＮＧＥＮꎬ北京) 提取总 ＤＮＡꎬ ＴＴＣＡＣＡＡＴＣＣ￣３′ꎮ ＰＣＲ 扩增采用 ３５ μＬ 反应混合
１.０％的琼脂糖凝胶电泳检测 ＤＮＡ 质量ꎬ琼脂糖凝 体系ꎬ包括高保真酶 １７.５ μＬꎬ上下游引物各 １.５ μＬꎬ
胶回收试剂盒( ＮＧ２０２ＳꎬＨＬＩＮＧＥＮＥꎬ上海) 回收琼 ＤＮＡ 模板 １ μＬꎬ加灭菌双蒸水补足体积 ３５ μＬꎮ
脂糖 凝 胶ꎬ ＮａｎｏＰｈｏｔｏｍｅｔｅｒ 超 微 量 分 光 光 度 计 ＰＣＲ 扩增程序:９４ ℃ 预变性 ５ ｍｉｎꎻ９４ ℃ 变性 １
(Ｉｍｐｌｅｎꎬ德国) 检测 ＤＮＡ 浓度和质量ꎬＡＢＩ 测序仪 ｍｉｎꎬ５５ ℃退火 １ ｍｉｎꎬ７２ ℃延伸 １ ｍｉｎ ３０ ｓ(３０ 个循
３７３０(北京东迅天地医疗仪器有限公司)双向测序ꎮ 环)ꎻ７２ ℃ 延伸 ７ ｍｉｎꎻ４ ℃ 保存ꎮ 将 ＰＣＲ 扩增产物
引物由北京睿博兴科生物技术有限公司合成ꎮ 利用 通过 １. ０％ 琼脂糖凝胶电泳 ( 恒定电压 １２０ Ｖꎬ２５
正己烷(分析纯ꎬ广东光华科技股份有限公司)提取 ｍｉｎ)进行检测ꎬＰＣＲ 产物进行纯化后ꎬ送北京睿博
挥发油ꎬＳｉｇｍａ 小型台式离心机(德国 Ｓｉｇｍａ 公司) 兴科生物技术有限公司进行测序ꎮ
离心样品ꎬＡｇｉｌｅｎｔ ８８９０－５９７７Ｂ 型气相色谱－质谱联 利 用 ＭＥＧＡ Ｘ６４ 软 件 对 所 有 序 列 进 行
用仪(美国 Ａｇｉｌｅｎｔ 公司)检测挥发油成分ꎮ ＣｌｕｓｔａｌＷ 对比ꎬ 用 邻 接 法 构 建 系 统 进 化 树ꎬ 利 用
１.２ 方法 Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ(１ ０００ 次重复)检验各分支的支持率ꎮ 将
１.２.１ ＤＮＡ 条形码扩增和分析 ｐｓｂＡ－ｔｒｎＨ 引物为 得到的 ｐｓｂＡ－ｔｒｎＨ 序列进入在线数据库比对ꎬ确定
通用条形码引物ꎬ引物序列为上游 ５′￣ＧＴＴＡＴＧＣＡＴ 物种信息ꎮ