Page 118 - 《广西植物》2025年第4期

７ ３ ２ 广 西 植 物 ４５ 卷
(赵亚琴等ꎬ２０２１)ꎮ 该技术能够高效地识别植物种 集ꎬ共收集到 ９５ 份八角材料ꎮ 这些材料中共有 ５３
质资源中的遗传变异位点ꎬ深入揭示其遗传机制、 份来自不同地区的居群样本(表 １)ꎬ包含桂南(ＧＳ)
进化历史和种质关系ꎬ为优良种质选育提供理论依 地区居群样本 １７ 份ꎬ其中 ７ 份来自钦州浦北(ＰＢ)ꎬ
据ꎬ从而显著缩短新品种选育的周期ꎮ ＳＬＡＦ￣ｓｅｑ 技 １０ 份来自防城港(ＦＣＧ)ꎻ桂中部(ＧＭ) 地区居群样
术因其高效、经济且适用于大规模研究的特点ꎬ而 本 ８ 份ꎬ均来自南宁上林(ＳＬ)ꎻ桂西(ＧＷ)地区居群
在植物遗传学、作物改良和种质资源保护等领域展 样本 １６ 份ꎬ其中 ８ 份来自河池凤山(ＦＳ)ꎬ８ 份来自
现出广泛的应用前景(崔学强等ꎬ２０２３ａꎬｂ)ꎮ 以菘 百色(ＢＳ)ꎻ桂北(ＧＮ)地区居群样本 ６ 份ꎬ均来自桂
蓝为例ꎬ刘东等(２０２４)利用 ＳＬＡＦ￣ｓｅｑ 技术结合叶片 林(ＧＬ)ꎻ桂东(ＧＥ)地区居群样本 ６ 份ꎬ均来自梧州
表观特征分析ꎬ成功区分了 ２５ 个不同生态类型的菘 藤县(ＴＸ)ꎬ以上提及的地方居群样本均为当地种子

蓝ꎬ揭示了这些生态类型之间的遗传关系ꎮ 此外ꎬ 苗种植的成年树ꎬ种植时间超过 １０ 年ꎮ 为避免同一
沈涛等(２０２３)通过 ＳＬＡＦ￣ｓｅｑ 技术研究了分布于不 克隆个体的重复采集ꎬ在样地调查的基础上ꎬ各居
同地区的 １９ 个滇龙胆居群样本的遗传结构和遗传 群采集相隔距离大于 ５０ ｍ 的八角单株ꎮ 其余材料
多样性ꎬ认为环境隔离是导致滇龙胆种群分化的主 为目 前 八 角 嫁 接 换 种 时 作 为 接 穗 的 优 良 种 质
要因素之一ꎮ 综上表明ꎬＳＬＡＦ￣ｓｅｑ 技术在传统药用 (ＧＶ)ꎬ包括 ＴＭ、ＣＰ、ＬＭ、ＭＷ、ＤＲ、ＥＮ、ＳＳ、ＧＪ、ＭＥ、
植物种质资源的多样性研究中发挥着重要作用ꎮ ＨＹ 等种质各 ３ 份ꎬ以及 ＨＺ、ＢＨ、ＨＺ￣１、ＲＧ、ＦＪＪ、ＳＪ
然而ꎬ该技术在八角种质资源的遗传多样性分析研 等种质各 ２ 份ꎬ共计 ４２ 份ꎮ 这些种质均来自梧州藤
究中尚未得到应用ꎮ 县ꎬ并经过人工筛选ꎬ是目前较为常用的八角优良
针对广西八角种质资源遗传背景缺乏系统性 接穗种质ꎮ 以上 ９５ 份材料经广西中医药大学黄荣
研究这一瓶颈问题ꎬ有学者利用第二代分子标记 韶教授鉴定为八角(Ｉｌｌｉｃｉｕｍ ｖｅｒｕｍ)ꎮ 采集其幼嫩的
和 ＤＮＡ 条形码对八角的遗传多样性进行了初步 叶片并记录经纬度ꎬ将采集的 ９５ 份种质的嫩叶液氮
分析ꎮ 余兴华等(２０２２)利用 ＳＳＲ 分子标记技术对 速冻－８０ ℃保存备用ꎮ
８ 种不同花色的八角种质进行了分析ꎻ王乙淋等 １.２ 八角基因组 ＤＮＡ 的制备
(２０２３)基于 ＩＴＳ２ 和 ｐｓｂＡ － ｔｒｎＨ 序列对广西的 １３ 本研 究 采 用 ＣＴＡＢ 法 提 取 ９５ 份 八 角 的 总
个八角居群展开了八角谱系地理学研究ꎮ 但是ꎬ ＤＮＡꎮ 通过电泳检测方法对所提取的八角 ＤＮＡ 进
由于前人的研究中收集到的八角种质资源数量有 行质量检测ꎬ并使用 ＮａｎｏＤｒｏｐ 分光光度计对八角
限ꎬ并且第二代标记的标记密度和通量低等技术 ＤＮＡ 浓度和纯度进行检测ꎬ检测合格后用于后续
缺点ꎬ因此对广西八角遗传多样性的研究还不够 ＳＬＡＦ￣ｓｅｑ 建库测序ꎮ
深入和系统ꎮ 本研究收集了来自广西多个地区居 １.３ 高通量测序
群以及经过人工筛选的八角样本共计 ９５ 份ꎬ运用 选择八角近缘物种鹅掌楸基因组作为参考进
ＳＬＡＦ￣ｓｅｑ 技术ꎬ成功获取了丰富的 ＳＮＰ 标记数据ꎮ 行电子酶切预测ꎬ确定适用的酶切组合ꎬ确保这些
借助这些分子标记ꎬ对八角样本进行深入的系统 组合能够产生在基因组上随机分布且含有较低比
发育分析、群体结构解析以及遗传关系的探讨ꎬ以 例重复序列的片段标记ꎮ 本研究中ꎬ遵循上述规
期揭示广西不同地区八角居群与人工筛选优良种 则并采用的内切酶组合为 ＨａｅⅢ和 ＨｉｎＣⅡꎬ利用
质间的遗传多样性和亲缘关系ꎬ为广西八角种质 上述酶切组合处理测序样品的基因组 ＤＮＡꎬ构建
资源的评估和新品种选育工作提供良好的理论基 ＳＬＡＦ 测序文库ꎬ并在 Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ 系统上进行
础和科学依据ꎮ 同时ꎬ本研究对于八角品种的科 ＰＥ１５０ 测序ꎮ
学分类、规范命名、种质资源的准确评价以及优良 １.４ 数据处理和变异检测

品种的选育具有极其重要的理论指导价值ꎮ 为获 取 有 效 数 据ꎬ 删 除 接 头 污 染、 低 质 量
Ｒｅａｄｓ 污染和引物污染的序列ꎮ 使用 ＬＡＳＴ ( ｌａｓｔａｌ
１ 材料与方法 ７５９)对高质量 Ｒｅａｄｓ 进行聚类ꎬ得到 ＳＬＡＦ 标签ꎬ
构建“假” 参考基因组ꎮ 参考序列根据相应 ＳＬＡＦ
１.１ 实验材料 标记的最大测序深度选择每个位点ꎮ 将高质量的
对广西八角主要分布区域的八角材料进行采 测序 Ｒｅａｄｓ 利用 ｂｗａ 软件比对到参考基因上ꎬ利用