Page 150 - 《广西植物》2025年第4期

７ ６ ４ 广 西 植 物 ４５ 卷
表 １ １６ 种樱属植物信息
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｎ １６ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｐｒｕｎｕｓ

序号 物种 来源 序号 物种 来源
Ｎｏ. Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｓｏｕｒｃｅ Ｎｏ. Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｓｏｕｒｃｅ
１ 野生早樱 浙江四明山 ９ 武夷红樱 福建武夷山
Ｐ. ｓｕｂｈｉｒｔｅｌｌａ ｖａｒ. ａｓｃｅｎｄｅｎｓ Ｓｉｍｉｎｇ Ｍｏｕｎｔａｉｎꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐ. ｃａｍｐａｎｕｌａｔａ ｖａｒ. ｗｕｙｉｅｎｓｉｓ Ｗｕｙｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎꎬ Ｆｕｊｉａｎ
２ 山樱 浙江四明山 １０ 散毛樱 云南昆明
Ｐ. ｓｅｒｒｕｌａｔａ Ｓｉｍｉｎｇ Ｍｏｕｎｔａｉｎꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐ. ｐａｔｅｎｔｉｐｉｌａ ＫｕｎｍｉｎｇꎬＹｕｎｎａｎ
３ 雪落 福建武夷山 １１ 华中樱 福建武夷山
Ｐ. ｘｕｅｌｕｏｅｎｓｉｓ Ｗｕｙｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎꎬ Ｆｕｊｉａｎ Ｐ. ｃｏｎｒａｄｉｎａｅ Ｗｕｙｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎꎬ Ｆｕｊｉａｎ
４ 迎春 浙江四明山 １２ 郁李 云南昆明
Ｐ. ｄｉｓｃｏｉｄｅａ Ｓｉｍｉｎｇ Ｍｏｕｎｔａｉｎꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐ. ｊａｐｏｎｉｃａ Ｋｕｎｍｉｎｇꎬ Ｙｕｎｎａｎ
５ 尾叶樱 浙江四明山 １３ 毛樱桃 上海植物园
Ｐ. ｄｉｅｌｓｉａｎａ Ｓｉｍｉｎｇ Ｍｏｕｎｔａｉｎꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐ. ｔｏｍｅｎｔｏｓａ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎ
６ 崖樱 云南昆明 １４ 黑樱桃 浙江宁波
Ｐ. ｓｃｏｐｕｌｏｒｕｍ Ｋｕｎｍｉｎｇꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ｐ. ｍａｘｉｍｏｗｉｃｚｉｉ Ｎｉｎｇｂｏꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ
７ 高盆 云南昆明 １５ 沼生矮樱 浙江景宁
Ｐ. ｃｅｒａｓｏｉｄｅｓ Ｋｕｎｍｉｎｇꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ｐ. ｊｉｎｇｎｉｎｇｅｎｓｉｓ Ｊｉｎｇｎｉｎｇꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ
８ 钟花樱 福建武夷山 １６ 浙闽樱 浙江宁波
Ｐ. ｃａｍｐａｎｕｌａｔａ Ｗｕｙｉ Ｍｏｕｎｔａｉｎꎬ Ｆｕｊｉａｎ Ｐ. ｓｃｈｎｅｉｄｅｒｉａｎａ Ｎｉｎｇｂｏꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ

通过 １.５％琼脂糖凝胶电泳检测ꎬ用 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ 生产 晰、多态性良好的 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物用于分析整个样
公司的 Ｂｉｏ￣Ｐｈｏｔｏｍｅｔｒ 核酸检测器检测 ＤＮＡ 浓度 本的分析( 表 ２)ꎮ 再使用相同的循环条件ꎬ然后
和纯度ꎬ根据计算的 ＤＮＡ 浓度ꎬ用 ＴＥ 将 ＤＮＡ 样 用 ５ μＬ 扩增后的 ＰＣＲ 产物ꎬ并使用 ６％聚丙烯酰
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品溶液稀释至 ５０ ｎｇμＬ ꎮ 胺凝胶电泳(含 ２７ ｇ 尿素、６ ｍＬ １０×ＴＢＥ、６.７５ ｍＬ
１.６ 引物筛选与聚丙烯酰胺凝胶电泳 ４０％丙烯酰胺、６０ μＬ ＴＥＭＥＤ 和 ６０ μＬ ２５％ ＡＰＳ
上海桑尼生物科技有限公司总共合成了 ５０ 对 在 ６０ ｍＬ ｄｄＨ Ｏ 中) 和银染(１‰)ꎬ干燥后使用数
２
ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引 物ꎬ 其 中 １２ 对 ＥＳＴ ＳＳＲ 引 物 来 自 码相机拍照保存ꎮ

Ｐｒｕｎｕｓ ｊａｍａｓａｋｕｒａ(Ｙｏｓｈｉａｋｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００９)ꎬ其余 ３８ １.７ 嫁接亲和性实验
对均为自己设计合成所得ꎬ其中有 ３６ 对引物可以 选择浙江省有分布且适合作为砧木樱属植物
在 ４ 种材料(散毛樱、郁李、钟花樱、黑樱桃) 中成 为材料ꎬ以 ３ 年生籽播苗野生早樱、山樱、迎春樱、
功扩增(ＰＣＲ)ꎮ 聚合酶链式反应( ＰＣＲ) 反应体系 尾叶樱、华中樱、浙闽樱为砧木( 郁李、毛樱桃、雪
为 ２０ μＬꎬ 其 中 包 含 １０ μＬ 的 Ｅａｓｙ Ｔａｑ ＴＭ ＤＮＡ 落樱和沼生矮樱长势慢ꎬ不适合作为砧木ꎻ崖樱、

Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｆｏｒ ＰＡＧＥ(包含 Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶、ｄＮＴＰ 高盆樱、散毛樱、黑樱桃和武夷红樱浙江区域无分
和优化的反应缓冲液ꎬ由 Ｔｒａｎｓ￣Ｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ 公司提 布ꎬ亦不适合作为砧木)ꎬ每个砧木 ２０ 棵ꎬ以钟花
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供)、１ μＬ 基因组 ＤＮＡ(５０ ｎｇμＬ )、０.８ μＬ( ５ 樱枝条为接穗ꎮ 嫁接实验于 ２０２３ 年 ２ 月开始ꎬ砧
μｍｏｌμＬ ) ×２ 引物对和 ７.４ μＬ ｄｄＨ Ｏꎮ ＰＣＲ 反 木种植在种植袋中ꎬ种植袋大小为直径 ３０ ｃｍ、高
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２
应在 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ￣Ｍａｓｔｅｒ 循环仪上进行ꎬＰＣＲ 循环条 ２５ ｃｍꎬ基 质 为 黄 土 ∶ 泥 炭 ∶ 珍 珠 岩 ＝ ５ ∶ ３ ∶ ２
件:９４ ℃ 初始变性 ４ ｍｉｎꎻ９４ ℃ ３０ ｓꎬ５０ ~ ６０ ℃ ３０ (Ｖ ∶ Ｖ ∶ Ｖ)ꎬ接穗采集长势旺盛的母株ꎬ接穗上的
ｓ 和 ７２ ℃ １ ｍｉｎꎬ３５ 个循环ꎻ最后 ７２ ℃ 延伸 ７ ｍｉｎꎮ 芽保证为叶芽ꎬ避免嫁接接穗为花芽ꎬ否则接穗难
反应结束后 ＰＣＲ 产物在 １.５％琼脂糖凝胶( ｂｉｏｗｅｓｔ 以成活ꎮ 嫁接完成后ꎬ后期定期进行养护管理ꎬ每
琼脂糖)上进行电泳分离ꎬ其中缓冲液为 ０.５×ＴＢＥ ３ ~ ５ ｄ 进行一次浇水ꎬ为了避免假活现象出现ꎬ在
(１Ｌ ｄｄＨ Ｏ 中含有 ５.４ ｇ Ｔｒｉｓ、２.７５ ｇ 硼酸和 ０.３７２ ２０２４ 年 ５ 月开始统计每个砧木的嫁接成活率ꎮ
２
ｇ ＥＤＴＡ￣Ｎａ )ꎬ电泳速率为 １０ Ｖｃｍ ꎬ电泳结束 １.８ 数据分析
￣１
２
后用溴化乙锭(１ μｇｍＬ ) 染色并在紫外光下观 根据各分子标记在相同电泳迁移率( 相同分
￣１
察ꎬ以 Ｍａｒｋ 作为标准ꎮ 最终筛选出 １７ 对谱带清 子量片段)的有无ꎬ统计得到所有位点的二元数据ꎬ