Page 152 - 《广西植物》2025年第4期
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７ ６ ６ 广 西 植 物 ４５ 卷
有扩增带记为 １ꎬ无带记为 ０ꎮ 利用软件 Ｐｏｐｇｅｎ ３２ 及自己合成的 ３８ 对引物中分别筛选出 ９ 对和 ８ 对
计算等位基因数(ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓꎬＮ )、有效等位基 用于全部材料的 ＳＳＲ 扩增ꎬ这 １７ 对引物共扩增出
ａ
因数( ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｌｌｅｌｅｓꎬＮ )、观察杂合度 ９８ 条带ꎬ每条 ＥＳＴ 引物扩增出条带数为 ２ ~ １２ꎬ大
ｅ
(ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙꎬＨ )、期望杂合度(ｅｘｐｅｃｔｅｄ 多数引物扩增条带数为 ３ ~ ９ꎬ每条引物平均扩增
ｏ
ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙꎬＨ )和 Ｓｈａｎｎｏｎ’ ｓ 指数(Ｉ)ꎻ利用软件 出 ５.７６ 条ꎮ 有效等位基因数( Ｎ ) 为 １.１６ ~ ７.６４ꎬ
ｅ ｅ
Ｐｏｗｅｒ Ｍａｒｋｅｒ ｖ３. ２５ 计 算 多 态 信 息 含 量 平均值为 ３.２２ꎻ 观察杂合度(Ｈ )为 ０.０４ ~ ０.５４ꎬ平
ｏ
(ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔꎬＰＩＣ)ꎻ 利用软件 均值为 ０.２８ꎻ期望杂合度(Ｈ ) 为 ０.５８ ~ ０.９２ꎬ平均
ｅ
ＮＴＳＹＳｐｃ２.１０ｅ 进行 ＵＰＧＭＡ 聚类分析ꎬ建立亲缘关 值为 ０.７７ꎻＳｈａｎｎｏｎ’ｓ 指数( Ｉ) 为 １.３８ ~ ２.６５ꎬ平均
系图ꎻ采用 Ｅｘｃｅｌ 进行嫁接成活率的统计ꎮ 值为 ２.１４ꎻ多态信息含量(ＰＩＣ)为０.６２ ~ ０.９２ꎬ平均
值为 ０.７８( 表 ３)ꎮ 结果表明ꎬ钟花樱及其近缘种
２ 结果分析 遗传多样性较为丰富ꎬ其中图 ２ 为引物 ＰＣ１０ 在钟
花樱及其近缘种的 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 扩增图ꎮ
２.１ ＤＮＡ 提取质量和最佳退火温度的筛选 ２.３ 聚类分析
１６ 个样品 ＯＤ / ＯＤ 比值均在 １.６ 至 １.８ 之 根据 ＳＳＲ 扩增结果ꎬ利用 ＮＴＳＹＳｐｃ２.１０ｅ 软件
２６０ ２８０
间ꎬ说明提取的 ＤＮＡ 质量较好ꎬ符合后续实验要 进行 Ｊａｃｃａｒｄ 相似性系数分析ꎬ计算出它们之间的
求ꎮ 在梯度 ＰＣＲ 仪器上对所有引物的最佳退火温 遗传相似系数( ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔꎬＣ )ꎬ
ＧＳ
其范围为０.６５３ １ ~ ０.９１８ ４ꎬ具体见表 ４ꎬ其中钟花
度进行筛选ꎬ筛选范围为 ４８ ~ ６４ ℃ ꎬ以提高 ＰＣＲ
樱和高盆樱遗传相似系数最大( Ｃ ＝ ０.９１８ ４)ꎬ武
扩增效率ꎬ有利于得到清晰的聚丙烯凝胶电泳图ꎬ ＧＳ
减少实验误差ꎬ其中图 １ 为部分合成引物最佳退 夷红樱和野生早樱遗传相似系数最小(０.６５３ １)ꎮ
由表 ４ 的遗传相似系数可知ꎬ钟花樱与高盆樱亲
火温度的筛选ꎮ
缘关系最近( Ｃ ＝ ０. ９１８ ４)ꎬ其 次 与 崖 樱 ( Ｃ ＝
ＧＳ ＧＳ
０.８９８ ０) 亲缘关系也很近ꎬ但与野生早樱( Ｃ ＝
ＧＳ
０.７７５ ５)、沼生矮樱(Ｃ ＝ ０.７８５ ７)、黑樱桃( Ｃ ＝
ＧＳ ＧＳ
０.７９５ ９)、尾叶樱( Ｃ ＝ ０.７９５ ９) 等亲缘关系相对
ＧＳ
较远ꎻ武夷红樱与高盆樱( Ｃ ＝ ０.８５７ １)、钟花樱
ＧＳ
(Ｃ ＝ ０.８１６ ３)、迎春樱( Ｃ ＝ ０.８１６ ３) 等亲缘关
ＧＳ ＧＳ
系最近ꎬ 而 与 野 生 早 樱 ( Ｃ ＝ ０. ６５３ １)、 黑 樱 桃
ＧＳ
(Ｃ ＝ ０.６７３ ５)亲缘关系相对较远ꎮ
ＧＳ
通过遗传相似系数进行 ＵＰＧＭＡ 聚类分析ꎬ构
建了 １６ 种樱属植物的聚类关系图(图 ３)ꎮ 由图 ３
可知ꎬ基本体现了 １６ 种樱属植物彼此之间亲缘关
系的远近ꎮ 除了野生早樱和黑樱桃外ꎬ其余 １４ 份
植物可聚为一大类( 图 ３:Ⅰ)ꎬ其中钟花樱与高盆
樱聚在一起ꎬ崖樱和雪落樱聚在一起ꎬ山樱和迎春
Ｍ 代表 Ｍａｒｋꎬ下同ꎻ ＰＣ１、ＰＣ３、ＰＣ６ 和 ＰＣ８ 分别代表不同
樱聚在一起ꎬ郁李和毛樱桃聚在一起ꎬ散毛樱和浙
引物ꎮ
闽樱聚在一起ꎬ尾叶樱和沼生矮樱聚在一起ꎬ武夷
Ｍ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ Ｍａｒｋꎬ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗꎻ ＰＣ１ꎬ ＰＣ３ꎬ ＰＣ６ ａｎｄ ＰＣ８
ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｉｍｅｒｓꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. 红樱和华中樱聚在一起ꎻ野生早樱和黑樱桃与其
图 １ 部分合成引物最佳退火温度的筛选 余樱属植物亲缘关系较远ꎬ单独聚类ꎮ
Ｆｉｇ. １ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｐｔｉｍａｌ ａｎｎｅａｌｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ２.４ 嫁接成活率分析
ｆｏｒ ｐａｒｔｉａｌｌｙ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｐｒｉｍｅｒｓ 通过嫁接实验可知ꎬ华中樱作为砧木嫁接钟
花樱成活率最高ꎬ达 ９５％ꎬ野生早樱作为砧木嫁接
２.２ ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物的遗传多样分析 钟花樱成活率最低ꎬ为 ４０％ꎮ 此外ꎬ山樱作为砧木
从 Ｙｏｓｈｉａｋｉ 等(２００９) 开发出的 １２ 对引物以 嫁接钟花樱成活率为 ８０％ꎬ浙闽樱作为砧木嫁接
