Page 156 - 《广西植物》2025年第7期
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Ｇｕｉｈａｉａ Ｊｕｌ. ２０２５ꎬ ４５(７): １３４８－１３５８
ＤＯＩ: １０.１１９３１/ ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０２４１００１５
蒋琼海ꎬ 李亚梅ꎬ 李崇晖ꎬ 等ꎬ ２０２５. 秋石斛遗传转化筛选标记基因及筛选剂的筛选 [Ｊ]. 广西植物ꎬ ４５(７): １３４８－１３５８.
ＪＩＡＮＧ ＱＨꎬ ＬＩ ＺＱꎬ ＬＩ ＣＨꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２５. Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｒｋｅｒ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ￣ｔｙｐｅ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｓ [Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ ４５(７): １３４８－１３５８.
秋石斛遗传转化筛选标记基因及筛选剂的筛选
蒋琼海 ꎬ 李亚梅 ꎬ 李崇晖 ꎬ 尹俊梅 ２ꎬ３∗
１ꎬ２
２
２ꎬ４
( １. 海南大学 热带农林学院ꎬ 海南 儋州 ５７１７３７ꎻ ２. 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所ꎬ 海口 ５７１１０１ꎻ ３. 中国热带
农业科学院三亚研究院ꎬ 海南 三亚 ５７２０２４ꎻ ４. 中国热带农业科学院海口实验站ꎬ 海口 ５７１１０１ )
摘 要: 秋石斛(Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ￣ｔｙｐｅ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｓ)是热带地区重要观赏植物ꎬ其因花形奇特、花色丰富ꎬ
在花卉市场中具有极高的产业价值ꎮ 分子育种是突破传统育种局限性的重要手段ꎬ筛选标记基因辅助转化
可以加速转基因进程ꎮ 为获得适合于秋石斛遗传转化的筛选标记基因和筛选剂ꎬ该研究以‘ 三亚阳光’ 和
‘诺贝尔’的胚性愈伤组织(ＥＣｓ) 和原球茎为外植体ꎬ将其置于含不同浓度卡那霉素、遗传霉素(Ｇ４１８)、潮
霉素和双丙氨膦的培养基中ꎬ测试其对不同筛选剂的敏感性ꎬ观察其生长状态ꎬ统计存活率ꎬ并以最优筛选
标记基因和筛选剂进行遗传转化测试ꎮ 结果表明:(１)２ 个品种的外植体对不同筛选剂的敏感性表现一致ꎬ
￣１
即对潮霉素、Ｇ４１８、双丙氨膦较为敏感ꎬ而对卡那霉素不敏感ꎻ在卡那霉素浓度为 ７００ ｍｇＬ 的培养基中ꎬ
外植体仍能正常生长ꎮ (２)潮霉素、Ｇ４１８ 和双丙氨膦的最低致死浓度分别为 ３０、５０、７ ｍｇＬ ꎮ (３)当以潮
￣１
霉素作为筛选剂、ｈｐｔ 作为筛选标记基因时ꎬ初次筛选采用 ３０ ｍｇＬ 的浓度效果最佳ꎻ随着筛选周期的延
￣１
长ꎬ适当提高筛选剂浓度有利于获得转基因株系ꎮ 该研究明确了秋石斛 ２ 个栽培种对不同筛选剂的敏感性
及其最低致死浓度ꎬ验证潮霉素抗性基因(ｈｐｔ)、新霉素磷酸转移酶基因(ｎｐｔ)和除草剂抗性基因(ｂａｒ)都可
以作为秋石斛遗传转化体系构建的筛选标记基因ꎬ对应筛选剂分别为潮霉素、Ｇ４１８ 和双丙氨膦ꎮ 此外ꎬ在
遗传转化筛选过程中采用筛选剂浓度梯度递增策略ꎬ有利于转基因外植体的获得ꎮ
关键词: 秋石斛ꎬ 筛选标记基因ꎬ 筛选剂ꎬ 遗传转化ꎬ 筛选浓度
中图分类号: Ｑ９４３ 文献标识码: Ａ 文章编号: １０００￣３１４２(２０２５)０７￣１３４８￣１１
Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｒｋｅｒ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓ￣ｔｙｐｅ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｓ
１ꎬ２ ２ꎬ４ ２ ２ꎬ３∗
ＪＩＡＮＧ Ｑｉｏｎｇｈａｉ ꎬ ＬＩ Ｙａｍｅｉ ꎬ ＬＩ Ｃｈｏｎｇｈｕｉ ꎬ ＹＩＮ Ｊｕｎｍｅｉ
( １. Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙꎬ Ｈａｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｄａｎｚｈｏｕ ５７１７３７ꎬ Ｈａｉｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｈａｉｋｏｕ ５７１１０１ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３. Ｓａｎｙａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｓａｎｙａ ５７２０２４ꎬ Ｈａｉｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ４. Ｈａｉｋｏｕ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏｎꎬ ＣＡＴＡＳꎬ Ｈａｉｋｏｕ ５７１１０１ꎬ Ｃｈｉｎａ )
收稿日期: ２０２４－１２－２９ 接受日期: ２０２５－０４－１４
基金项目: 海南省重点研发项目(ＺＤＹＦ２０２４ＸＤＮＹ２３９)ꎻ 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(１６３００３２０２２)ꎮ
第一作者: 蒋琼海(２０００—)ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为观赏园艺学ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)３５０４６９９７５４＠ ｑｑ.ｃｏｍꎮ
∗
通信作者: 尹俊梅ꎬ研究员ꎬ研究方向为热带花卉种质资源创新利用及新品培育ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｙｉｎｊｕｎｍｅｉ２００４＠ １６３.ｃｏｍꎮ
