Page 161 - 《广西植物》2025年第7期

７ 期 蒋琼海等: 秋石斛遗传转化筛选标记基因及筛选剂的筛选 １ ３ ５ ３

Ａ. 秋石斛‘诺贝尔’在含有不同浓度潮霉素分化培养基中的存活率ꎻ Ｂ. 原球茎在含有不同浓度潮霉素分化培养基中培养 ４ 周后
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的生长状态 ａ－ｄ 分别表示潮霉素浓度为 ０、１０、３０、５０ ｍｇＬ ꎬ比例尺 ＝ １ ｃｍꎮ
Ａ. Ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ‘Ｎｏｂｉｌｅ Ｌｉｎｄｌ.’ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎꎻ Ｂ. Ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｔｕｓ
ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍｓ ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ｆｏｕｒ ｗｅｅｋｓ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ ａ － ｄ ｉｎｄｉｃａｔｅ
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ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ０ꎬ １０ꎬ ３０ꎬ ５０ ｍｇＬ ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｂａｒｓ＝ １ ｃｍ.
图 ３ 不同潮霉素浓度对原球茎分化的影响
Ｆｉｇ. ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ

生褐化ꎬ根据外形特征很难判断外植体是否死亡ꎮ 其他明显的表型变化ꎮ 因此ꎬ未对外植体的存活
相反ꎬ原球茎对 Ｇ４１８ 敏感且易于观察ꎬ浓度为 ５０ 率进行统计ꎮ 相比之下ꎬ原球茎对双丙氨膦的敏
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ｍｇＬ 即可以达到显著的生长抑制效果ꎮ 因此ꎬ 感性更直观ꎬ将其接种到 １ ~ ９ ｍｇＬ 双丙氨膦培
若以 ｎｐｔ 作为筛选标记基因ꎬ可以选择 Ｇ４１８ 作为 养基中ꎮ １ 周后ꎬ除 １ ｍｇＬ 培养基中原球茎分
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筛选剂ꎮ 将转化后的胚性愈伤组织转入 ３０ ｍｇ 化未受到明显抑制以外ꎬ３ ~ ９ ｍｇＬ 培养基中的
Ｌ Ｇ４１８ 增殖筛选培养基中筛选 １ 个周期后转入 原球茎有轻微变黄ꎮ ２ 周后ꎬ所有子叶开始变黄ꎬ
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Ｇ４１８ 浓度为 ５０ ｍｇＬ 的分化培养基中进行第二 随着双丙氨膦浓度的升高ꎬ黄化程度加深ꎬ７ ~ ９
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轮筛选ꎬ第三轮转入 ８０ ~ １００ ｍｇＬ 的培养基中 ｍｇＬ 培养基中个别子叶甚至变白ꎮ ３ 周后ꎬ７ ~ ９
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分化ꎬ直到获得绿色转基因植株后转入无筛选分 ｍｇＬ 的培养基中大部分子叶变白ꎬ根部褐化ꎮ ４
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化培养基ꎮ 周后ꎬ７ ｍｇＬ 培养基中约 ７０％ 的外植体白化死
２.４ 双丙氨膦对胚性愈伤组织增殖及原球茎分化 亡(图 ７Ａꎻ图 ７Ｂ:ｅ)ꎮ ６ 周后观察ꎬ７ ｍｇＬ 培养
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的影响 基中的外植体全部死亡ꎮ 因此ꎬ本研究确定双丙
双丙氨膦是 ｂａｒ 筛选标记基因常用的筛选剂ꎬ 氨膦对秋石斛的生长具有抑制作用ꎬ如果以该物
本试验发现双丙氨膦对秋石斛胚性愈伤组织的生 质作为筛选剂ꎬ７ ~ ９ ｍｇＬ 的筛选效果较佳ꎮ
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长影响较温和ꎬ将胚性愈伤组织接种到 １ ~ ９ ｍｇ ２.５ 潮霉素浓度对转基因外植体获得的影响
Ｌ 双丙氨膦增殖培养基ꎬ表现为增殖缓慢ꎬ并没有 以秋石斛胚性愈伤组织为外植体进行遗传转
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