Page 160 - 《广西植物》2025年第7期

１ ３ ５ ２ 广 西 植 物 ４５ 卷

Ａ. 秋石斛‘三亚阳光’在含有不同浓度潮霉素增殖培养基中的存活率ꎻ Ｂ. 胚性愈伤组织在含有不同浓度潮霉素增殖培养基中培
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养 ４ 周后的生长状态 ａ－ｆ 分别表示潮霉素浓度为 ０、１０、３０、５０、７０、９０ ｍｇＬ ꎬ比例尺 ＝ １ ｃｍꎮ
Ａ. Ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ‘Ｓｏｎｉａ Ｈｉａｓａｋｕｌ’ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎꎻ
Ｂ. Ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ＥＣｓ ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ｆｏｕｒ ｗｅｅｋｓ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ ａ－ｆ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ
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ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ０ꎬ １０ꎬ ３０ꎬ ５０ꎬ ７０ꎬ ９０ ｍｇＬ ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｂａｒｓ＝ １ ｃｍ.
图 ２ 不同潮霉素浓度对胚性愈伤组织增殖的影响
Ｆｉｇ. ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＥＣｓ

进一步测试卡那霉素浓度对原球茎分化的影 敏感性ꎮ 参考其他作物研究结果ꎬ选择 ５０ ~ ４００
响ꎮ ２ 周后统计ꎬ所有处理中原球茎的存活率都为 ｍｇＬ 的浓度梯度进行测试ꎬ将胚性愈伤组织转
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１００％(图 ５Ａ)ꎮ ３ 周后ꎬ１００ ~ ５００ ｍｇＬ 的培养 入不同浓度 Ｇ４１８ 增殖培养基中ꎮ 如表 １ 所示ꎬ当
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基中原球茎存活率为 １００％ꎬ７００ ｍｇＬ 培养基中 Ｇ４１８ 浓度为 ５０ ｍｇＬ 时ꎬ胚性愈伤组织虽无明
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的存活率为 ９０.４８％( 图 ５Ａ)ꎬ９００ ｍｇＬ 的培养 显褐化ꎬ但用镊子夹时能明显感知细胞组织变软ꎬ
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基中的存活率为 ８４.４６％ꎮ ４ 周后ꎬ１００、３００ ｍｇ 由于无法判断胚性愈伤组织是否存活ꎬ统计褐化
Ｌ 培养基中的原球茎与对照相比仍未出现明显变 率为 １３.３３％ꎻ当浓度为 １００ ~ ４００ ｍｇＬ 时ꎬ胚性
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化(图 ５Ｂ:ａ、ｂ、ｃ)ꎬ５００ ~ ９００ ｍｇＬ 培养基中的原 愈伤组织的褐化程度和数量随着 Ｇ４１８ 浓度的升
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高而 上 升ꎬ 当 浓 度 为 ４００ ｍｇ Ｌ 时ꎬ 褐 化 率
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球茎的分化受到不同程度的抑制ꎬ其中 ９００ ｍｇ
Ｌ 培养基中的原球茎大部分分化子叶呈现半褐半 为 １００％ꎮ
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绿状态ꎬ平均存活率为 ７４.２１％( 图 ５Ａꎻ图 ５Ｂ:ｆ)ꎮ 相比胚性愈伤组织ꎬ原球茎在不同浓度 Ｇ４１８
后期发现ꎬ９００ ｍｇＬ 培养基中的外植体继续培 培养基中的生长状态更容易判断ꎮ 从图 ６Ａ 统计曲
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养 ２ ~ ３ 周ꎬ９０％以上发生褐死ꎬ说明秋石斛对卡那 线可以观察到原球茎对 Ｇ４１８ 非常敏感ꎮ 培养 １ 周
后ꎬ５０ ｍｇ Ｌ 培养基中的原球茎平均存活率为
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霉素的敏感性具有滞后性ꎮ
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综上表明ꎬ秋石斛对卡那霉素不敏感ꎬ适当延 ５０.３３％ꎬ３００~４００ ｍｇＬ 培养基中几乎所有原球茎
长筛选时间才可以观察到明显的表型变化ꎮ 如果 都变白ꎮ ２ 周后ꎬ５０ ｍｇＬ 培养基中还有部分绿色
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选择卡那霉素作为秋石斛遗传转化的筛选剂ꎬ需 原球茎ꎬ存活率为 ３３.５％ꎻ１００ ~ ４００ ｍｇＬ 培养基
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要浓度高达 ９００ ｍｇＬ 才能实现肉眼可见的致死 中存活率为 ０％ꎮ ４ 周后ꎬ５０ ｍｇＬ Ｇ４１８ 培养基中
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效果ꎬ相比其他抗生素ꎬ使用剂量非常高ꎮ 有零星绿色原球茎ꎬ其他培养基中的原球茎根部褐
２.３ 胚性愈伤组织及原球茎对 Ｇ４１８ 的敏感性 化、子叶变白(图 ６Ｂ)ꎮ
秋石斛外植体对卡那霉素不敏感ꎬ为寻找 ｎｐｔ 综上表明ꎬ秋石斛外植体对 Ｇ４１８ 敏感ꎬ胚性
基因对应的有效筛选剂ꎬ测试了外植体对 Ｇ４１８ 的 愈伤组织接种到含该抗生素的培养基中由于不发