Page 159 - 《广西植物》2025年第7期
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７ 期 蒋琼海等: 秋石斛遗传转化筛选标记基因及筛选剂的筛选 １ ３ ５ １
图 １ 遗传转化载体 ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３ 图谱
Ｆｉｇ. １ Ｍａｐ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３
８％ꎬ绝大部分发白或褐化ꎻ５０ ~９０ ｍｇＬ 培养基中
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２ 结果与分析 存活率为 ０％ꎮ 分化 ３ 周后ꎬ在潮霉素浓度为 ３０
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ｍｇＬ 及以上的培养基中原球茎全部白化死亡ꎮ ４
２.１ 胚性愈伤组织及原球茎对潮霉素的敏感性 周后ꎬ仅在 １０ ｍｇＬ 的培养基中有少量不定芽呈
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将秋石斛‘三亚阳光’胚性愈伤组织接种到含 现绿色(图 ３Ｂ:ｂ)ꎬ平均存活率为４.８６％ꎻ１０ ｍｇＬ ￣１
不同浓度潮霉素培养基中 ４ 周后ꎬ观察并统计存 以上培养基中无外植体存活(图 ３Ｂ:ｃ、ｄ)ꎮ
活率ꎬ结果如图 ２ 所示ꎬ随潮霉素浓度升高ꎬ胚性 以上实验结果说明ꎬ如果 ｈｐｔ 作为筛选标记基
￣１ 因ꎬ潮霉素是较佳的筛选剂ꎮ 同时ꎬ考虑抗生素对
愈伤组织存活率显著降低ꎬ当浓度为 １０ ｍｇＬ
时ꎬ胚性愈伤组织存活率不受影响ꎬ但出现轻微水 外植体的抑制作用ꎬ在秋石斛遗传转化体系构建
渍化(图 ２Ｂ:ｂ)ꎻ当浓度为 ３０ ｍｇＬ 时ꎬ平均存活 中ꎬ第一轮筛选潮霉素浓度选择 ３０ ｍｇＬ 较好ꎮ
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率为 ６７.４１％ꎬ胚性愈伤组织开始褐化且大部分停 ２.２ 胚性愈伤组织及原球茎对卡那霉素的敏感性
止增殖(图 ２Ｂ:ｃ)ꎻ当浓度升高至 ５０ ｍｇＬ 及以 将‘三亚阳光’胚性愈伤组织置于含不同浓度
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上时ꎬ存活率为 ０％(图 ２Ａ)ꎬ胚性愈伤组织无生长 卡那霉素的增殖培养基中ꎮ １ ~ ２ 周后ꎬ观察发现
趋势ꎬ褐化死亡(图 ２Ｂ:ｄ、ｅ、ｆ)ꎮ 胚性愈伤组织增殖并未受到卡那霉素浓度影响ꎬ
进一步测试潮霉素对秋石斛原球茎分化的影 仍表现出嫩黄色ꎬ并出现少许分化ꎮ ４ 周后ꎬ卡那
响ꎮ 从图 ３ 可以观察到潮霉素对原球茎生长也具有 霉素浓度即使高达 ９００ ｍｇＬ ꎬ与对照相比胚性
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显著的抑制作用ꎮ 分化 １ 周后ꎬ５０ ｍｇＬ 潮霉素的 愈伤组织质地并未发生明显变化ꎬ仅增殖速度变
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培养基中只有极少部分原球茎呈现绿色ꎻ７０ ｍｇ 慢(图 ４)ꎮ 这说明胚性愈伤组织对卡那霉素不敏
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Ｌ 和 ９０ ｍｇＬ 的培养基中原球茎全部白化死亡ꎮ 感ꎬ高浓度虽然能够抑制其增殖ꎬ但并不影响存
分化 ２ 周后ꎬ３０ ｍｇ Ｌ 培养基中平均存活率为 活率ꎮ
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