Page 17 - 《广西植物》2025年第7期

７ 期 陈东亮等: 大豆荫蔽胁迫响应基因 ＧｍＹＵＣ２ 的克隆、自然变异分析及 ＫＡＳＰ 分子标记开发 １ ２ ０ ９

表 ２ ＧｍＹＵＣ２ 基因的 ＫＡＳＰ 分子标记引物序列
Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＫＡＳＰ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｐｒｉｍｅｒｓ ｏｆ ＧｍＹＵＣ２ ｇｅｎｅ
引物名称 ＫＡＳＰ 引物序列 携带位点
Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＫＡＳＰ Ｌｏｃｕｓ
ＳＮＰ２ＦＡＭ ＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＴＣＡＴＧＣＴＡＧＡＡＡＡＧＡＡＣＡＴＡＣＴＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＡＡＧＧＣ Ｃ
ＳＮＰ２ＨＥＸ ＧＡＡＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣＡＡＣＧＧＡＴＴＡＧＡＡＡＡＧＡＡＣＡＴＡＣＴＡＴＣＡＡＴＡＴＣＡＡＡＧＧＴ Ｔ
ＳＮＰ２ＣｏｍＲ ＣＡＴＧＧＴＣＣＴＣＡＡＴＡＧＴＴＡＧＣＡＴＧＣ —
ＳＮＰ３ＦＡＭ ＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＴＣＡＴＧＣＴＡＣＴＡＴＴＡＡＣＴＣＴＡＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＡＣＴＣＴＴＴＧ Ｃ
ＳＮＰ３ＨＥＸ ＧＡＡＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣＡＡＣＧＧＡＴＴＡＣＴＡＴＴＡＡＣＴＣＴＡＡＡＧＡＡＡＣＡＡＡＡＣＴＣＴＴＴＡ Ｔ
ＳＮＰ３ＣｏｍＲ ＧＣＡＴＧＣＴＡＡＣＴＡＴＴＧＡＧＧＡＣＣＡＴＧ —
ＳＮＰ４ＦＡＭ ＧＡＡＧＧＴＧＡＣＣＡＡＧＴＴＣＡＴＧＣＴＡＣＡＧＡＡＡＣＴＡＡＴＡＧＡＣＡＧＣＴＡＧＴＴＡＡＡＧ Ｇ
ＳＮＰ４ＨＥＸ ＧＡＡＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣＡＡＣＧＧＡＴＴＡＣＡＧＡＡＡＣＴＡＡＴＡＧＡＣＡＧＣＴＡＧＴＴＡＡＡＡ Ａ
ＳＮＰ４ＣｏｍＲ ＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＴＴＣＡＡＡＴＡ —

荫大豆品种‘贡豆 ７ 号’ 幼苗的叶片 ｃＤＮＡ 为模板
进行 ＰＣＲ 扩增ꎬ将克隆序列连接到载体转化大肠

杆菌ꎬ通过菌落 ＰＣＲ 检测阳性单克隆并提取质粒ꎬ
进一步使用双酶切鉴定扩增片段( 图 １)ꎬ片段大
小约为 １ ０００ ｂｐꎬ与预期基因片段大小相符ꎮ 测序
结果表明克隆得到的 Ｇｌｙｍａ.０５ｇ２３１１００ 基因 ＣＤＳ
序列长 １ １４８ ｂｐꎬ编码 ３８２ 个氨基酸ꎬ编码蛋白均
含有 ＦＭＯ￣ｌｉｋｅ、Ｐｙｒ￣ｒｅｄｏｘ￣２ 和 Ｐｙｒ￣ｒｅｄｏｘ￣３ 结构域ꎬ
将该基因命名为 ＧｍＹＵＣ２ꎮ
２.２ ＧｍＹＵＣ２ 基因的表达模式分析
利用 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 技术对大豆强耐荫品种(‘ 矮
脚早’‘ 贡豆 ７ 号’) 和不耐荫品种(‘ 齐佩华’ ‘ 直
子豆’)中 ＧｍＹＵＣ２ 基因的表达模式进行分析ꎬ结
果如图 ２ 所示ꎮ 遮荫处理后 ＧｍＹＵＣ２ 基因在强耐
荫品种 与 不 耐 荫 品 种 中 的 表 达 均 为 上 调ꎬ 说 明
ＧｍＹＵＣ２ 基因受荫蔽胁迫诱导ꎻ同时ꎬ本研究发现
强耐荫品种‘ 矮脚早’ ‘ 贡豆 ７ 号’ 中 ＧｍＹＵＣ２ 基
因的表达量均显著高于不耐荫品种‘ 齐佩华’ ‘ 直
子豆’ꎮ 因此ꎬ将 ＧｍＹＵＣ２ 基因确定为与大豆耐荫
性相关的重要候选基因ꎬ是基因克隆的重要候选
对象ꎮ
２.３ ＧｍＹＵＣ２ 基因的自然变异分析
通过重 测 序 分 析 ３９４ 份 大 豆 自 然 变 异 群 体
Ｍ. ６ ０００ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ １. 泳道 １ 为 ＧｍＹＵＣ２ 基因及其
ＧｍＹＵＣ２ 基因的自然等位变异ꎮ 结果表明ꎬＧｍＹＵＣ２
载体ꎮ
基 因 位 于 大 豆 ５ 号 染 色 体 上ꎬ 起 始 位 置 为
Ｍ. ６ ０００ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ １. Ｌａｎｅ １ ｉｓ ＧｍＹＵＣ２ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ
４０８８５４１４ꎬ结束位置为 ４０８８８８１０ꎬ该基因包含 ４ 个 ｃａｒｒｉｅｒ.
ＣＤＳ 区域ꎬ物理位置分别为 ４０８８７４３８ － ４０８８８１３３、
图 １ ＧｍＹＵＣ２ 基因的酶切电泳图谱
４０８８６１９８－ ４０８８６４４６、４０８８５８９１ － ４０８８６０１３、４０８８５６１３ － Ｆｉｇ. １ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍａｐ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ
４０８８５７８９ꎬ ５′物理位置为 ４０８８８１３４－４０８８８８１０ꎬ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ ＧｍＹＵＣ２ ｇｅｎｅ