Page 97 - 《广西植物》2025年第7期

７ 期 朱博为等: 巴西蕉 ＭａＣＭＯ 和 ＭａＢＡＤＨ 原核表达体系筛选及纯化 １ ２ ８ ９

Ａ. Ｎ 端信号肽ꎻ Ｂ. 醛脱氢酶保守十肽序列ꎻ Ｃ. 醛脱氢酶保守半胱氨酸残基ꎻ Ｄ. Ｃ 端信号肽ꎮ
Ａ. Ｎ￣ｔｅｒｍｉｎａｌ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅꎻ Ｂ. Ａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｄｅｃａｐｅｐｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅꎻ Ｃ. Ａｌｄｅｈｙｄｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｃｙｓｔｅｉｎｅ
ｒｅｓｉｄｕｅꎻ Ｄ. Ｃ￣ｔｅｒｍｉｎａｌ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ.
图 ４ ＢＡＤＨ 蛋白多重序列比对
Ｆｉｇ. ４ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ＢＡＤＨ ｐｒｏｔｅｉｎ

２.４ ＭａＣＭＯ 蛋白原核表达体系筛选 ２.５ ＭａＢＡＤＨ 蛋白原核表达体系筛选
ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 电泳 检 测 结 果 如 图 ６ 所 示ꎬ 未 经 为探究 ＭａＢＡＤＨ 蛋白在原核表达体系中的最
ＩＰＴＧ 诱导的转化表达载体 ｐＥＴ２８ａ￣ＭａＣＭＯ 菌株 优表达条件ꎬ对 ＭａＢＡＤＨ 表达条件进行筛选ꎬ从图
在上清液与包涵体中均无目的蛋白表达ꎬ经不同 ７ 可看出ꎬ在破碎后的菌体上清液中ꎬ未经 ＩＰＴＧ 诱
ＩＰＴＧ 浓度及温度的诱导下ꎬｐＥＴ２８ａ￣ＭａＣＭＯ 菌株 导的转化表达载体 ｐＥＴ２８ａ￣ＭａＢＡＤＨ 菌株无目的
在上清液和包涵体中均表达了大小为 ４８ ｋＤａ 的蛋 蛋白表达ꎬ经不同 ＩＰＴＧ 浓度及温度的诱导条件
白ꎬ与 ＭａＣＭＯ 目 的 蛋 白 分 子 量 大 小 相 符ꎬ 在 ２８ 下ꎬ所有 ｐＥＴ２８ａ￣ＭａＢＡＤＨ 菌株均表达了大小为 ５５
℃ 、ＩＰＴＧ ＝ ０.５ ｍｍｏｌＬ 、诱导 １８ ｈ 时表达量最 ｋＤａ 的蛋白ꎬ与目的 ＭａＢＡＤＨ 蛋白分子量大小相
￣１
大ꎬ但在上清液中并未检测到 ＣＭＯ 活性蛋白的 符ꎮ 通过观察比较ꎬ确定 ３７ ℃ 、ＩＰＴＧ ＝ ０.１ ｍｍｏｌ
￣１
表达ꎮ Ｌ 、 诱导 １２ ｈ 作为 ＭａＢＡＤＨ 蛋白诱导表达条件ꎮ