Page 94 - 《广西植物》2025年第7期

１ ２ ８ ６ 广 西 植 物 ４５ 卷

Ｏｓ. 水稻ꎻ Ｚｍ. 玉米ꎻ Ｍａ. 巴西蕉ꎻ Ｖｖ. 葡萄ꎻ Ｇｍ. 大豆ꎻ Ｃｍ. 甜瓜ꎻ Ｓｌ. 番茄ꎻ Ｓｏ. 菠菜ꎻ Ａｔ. 拟南芥ꎮ 下同ꎮ
Ｏｓ. Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａꎻ Ｚｍ. Ｚｅａ ｍａｙｓꎻ Ｍａ. Ｍｕｓａ ａｃｕｍｉｎａｔａ Ｌ. ＡＡＡ ｇｒｏｕｐꎬ ｃｖ. Ｃａｖｅｎｄｉｓｈꎻ Ｖｖ. Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａꎻ Ｇｍ. Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘꎻ Ｃｍ. Ｃｕｃｕｍｉｓ
ｍｅｌｏꎻ Ｓｌ. Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍꎻ Ｓｏ. Ｓｐｉｎａｃｉａ ｏｌｅｒａｃｅａꎻ Ａｔ. Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ. Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
图 １ ＣＭＯ 蛋白系统进化分析
Ｆｉｇ. １ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＣＭＯ ｐｒｏｔｅｉｎ

染色 ２ ｈ 后转入脱色液中脱色 １２ ｈꎬ重复 ３ 次ꎬ拍 体积的 Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒ( 上海雅酶生物医药科技有限

照保存ꎮ 公司) 清洗柱子ꎮ 用 ２ 倍柱体积的 Ｅｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ
１.２.６ 蛋白诱导表达及纯化 将上述诱导体系扩 (上海雅酶生物医药科技有限公司) 洗脱 ２ 次ꎬ收
大至 １ Ｌꎬ３７ ℃ 、２００ ｒｍｉｎ 条件下摇菌到 ＯＤ ＝ 集产物ꎮ 取 ８ μＬ 纯化产物ꎬ加入 ２ μＬ ５ × ＳＤＳ￣
￣１
６００
￣１
０.６ 后 ３７ ℃ 、ＩＰＴＧ ＝ ０.１ ｍｍｏｌＬ 诱导 １２ ｈꎮ ４０ ＰＡＧＥ 蛋白上样缓冲液进行 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 电泳检测ꎬ
ｍＬ Ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ 重悬菌液超声破碎后ꎬ１２ ０００ ｒ 重复 ３ 次ꎬ拍照保存ꎮ
ｍｉｎ 、４ ℃ 条件下离心 １０ ｍｉｎ ３ ~ ５ 次ꎬ分别保留上
￣１
清液与沉淀ꎬ上清液经 Ｎｉ￣ＮＴＡ 琼脂糖纯化树脂纯 ２ 结果与分析
化[生工生物工程( 上海) 股份有限公司]ꎬ采用重

力法在 ４ ℃ 条件下进行纯化ꎬ２ 倍柱体积的 Ｌｙｓｉｓ ２.１ ＭａＣＭＯ 系统进化分析及多重序列比对
ｂｕｆｆｅｒ(上海雅酶生物医药科技有限公司) 平衡柱 基于系 统 发 生 学 分 析 方 法ꎬ 为 研 究 ＭａＣＭＯ
子ꎮ 将样品液加入柱子中ꎬ重复过柱 ３ 次ꎮ ２ 倍柱 蛋白的系统进化关系ꎬ 筛选拟南芥 ( Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ