Page 113 - 《广西植物》2025年第8期

８ 期 胡继文等: 基于流式细胞仪分析的欧洲云杉原胚团细胞核提取液筛选 １ ４ ７ ９

Ａ. 增殖培养基上的欧洲云杉胚性细胞系ꎬ比例尺 ＝ １ ｃｍꎻ Ｂ、Ｃ. 光学显微镜下的欧洲云杉胚性细胞系包含细胞质致密的分生细
胞和高度液泡化的液泡细胞两种细胞类型ꎬ比例尺 ＝ １００ μｍꎮ
Ａ. Ｎｏｒｗａｙ ｓｐｒｕｃｅ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｕｓ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍꎬ ｂａｒ ＝ １ ｃｍꎻ Ｂꎬ Ｃ. Ｔｈｅ Ｎｏｒｗａｙ ｓｐｒｕｃｅ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｃａｌｌｕｓ ｕｎｄｅｒ ｏｐｔｉｃａｌ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅꎬ ｎｏｔｅ ｔｈｅ ｄｅｎｓｅｌｙ ｍｅｒｉｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｄｅｎｓｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ａｎｄ ｈｉｇｈｌｙ ｖａｃｕｏｌａｔｅｄ ｖｅｓｉｃｕｌａｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓꎬ ｂａｒｓ＝ １００ μｍ.
图 １ 欧洲云杉原胚团形态观察
Ｆｉｇ. １ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｎｏｒｗａｙ ｓｐｒｕｃｅ ｐｒｏｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃ ｍａｓｓｅｓ

视野 / ＤＡＰＩ 染色观察ꎬ结果发现细胞核被染上清 ＣＶ 越小ꎬ说明细胞核完整性越好ꎬ碎片越少( 黄雄
晰的蓝色荧光ꎬＬＢ０１ 提取液提取获得的细胞核大 等ꎬ２０２０)ꎮ 一般而言ꎬ草本植物 ＣＶ 需小于 ３.０％ꎬ

多保持了 完 整 的 核 膜 结 构 ( 图 ４)ꎮ 综 上 认 为ꎬ 以及木本植物 ＣＶ 需小于 ５.０％ 即可被认为合格
ＬＢ０１ 提取液为提取欧洲云杉胚性细胞系细胞核 (Ｄｏｌｅｚｅｌ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７ꎻ 赖彪等ꎬ２０１９)ꎮ 本研究中

的最优提取液ꎮ 欧洲云杉属于大型木本植物ꎬＬＢ０１ 提取欧洲云杉
ＰＥＭ 得到 的 Ｇ０ / Ｇ１ 和 Ｇ２ / Ｍ 细 胞 核 ＣＶ 分 别 为
３ 讨论与结论 ５.０％和 ４.４％ꎬ均为 ６ 种提取液中最低且均不大于
５.０％ꎬ说明 ＬＢ０１ 作为欧洲云杉 ＰＥＭ 细胞核提取
本研究基于流式细胞仪比较分析 ６ 种细胞核 液是合格的ꎮ
提 取 液 ( ＬＢ０１、 Ｏｔｔｏｓ、 Ｇａｌｂｒａｉｔｈｓ、 ＧＰＢ、 ＷＰＢ 和 前人使用 ＬＢ０１ 对 ０.１ ｇ 苜蓿幼嫩叶片( 刘倩

ＴｒｉｓＭｇＣｌ )提取欧洲云杉 ＰＥＭ 细胞核的效率ꎬ 和魏臻武ꎬ２０１４) 及 ２ ｃｍ 大豆幼嫩根尖( 陈林等ꎬ
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结果发现 ＬＢ０１ 提取欧洲云杉 ＰＥＭ 获得的细胞核 ２０２０)进行细胞核提取ꎬ可分别获得超过 ５ ０００ 个、
数量最多ꎬ细胞碎片少ꎬ为最适提取液ꎮ 这与刘倩 １０ ０００个有效细胞核ꎮ 针叶树中ꎬ沈捷等(２０１５)
和魏臻 武 ( ２０１４) 发 现 的 ＬＢ０１ 是 苜 蓿 ( Ｍｅｄｉｃａｇｏ 在使用 ＬＢ０１ 对杉木发芽种子细胞核提取研究中
ｓａｔｉｖａ)叶片细胞核最适提取液ꎬ陈林等(２０２０) 发 指出ꎬ２０ 粒发芽种子可获得 １００ ０００ 个有效细胞
现的 ＬＢ０１ 是大豆(Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ ｃｖ. Ｗｉｌｌｉａｍｓ ８２) 根 核ꎮ 本研究中ꎬ为获得超过 １５ ０００ 个有效细胞核ꎬ
细胞核最适提取液ꎬ沈捷等(２０１５)发现的 ＬＢ０１ 是 至少需 ２ ｇ 欧洲云杉 ＰＥＭꎬ核提取效率较苜蓿、大
杉木根尖细胞核最适提取液的研究结果一致ꎬ说 豆等被子植物明显低ꎬ而与杉木等针叶树相当ꎮ
明 ＬＢ０１ 在不同物种间提取细胞核具有一定的普 这说明相同细胞核提取液在物种间的提取效率差
适性ꎮ 异明显ꎬ 可 能 是 针 叶 树 含 有 更 多 的 多 糖 类 物 质
流式细胞仪是一种通过检测细胞样品中的荧 (Ｄｏｎｇ ＆ Ｄｕｎｓｔａｎꎬ １９９６)ꎬ并且组织表面具有较厚
光、吸收和散射等物理特性对样品进行快速分析 的角质层ꎬ胞内次生代谢产物多等所致( 田新民
和筛选的常用工具ꎬ可监测细胞大小、染色体倍性 等ꎬ２０１１ꎻ沈捷等ꎬ２０１５)ꎮ
等特征ꎬ从而判断样品质量( 陈林等ꎬ２０２０)ꎮ 其 细胞核提取液的主要成分及作用机理各不相
中ꎬＣＶ 是流式细胞仪中检验精准度的一个标准ꎬ 同ꎮ ＬＢ０１ 主要成分包括三( 羟甲基) 氨 基 甲 烷、