Page 172 - 《广西植物》2025年第8期
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１ ５ ３ ８                                广  西  植  物                                         ４５ 卷


















             Ａ Ｍ. ＤＬ ２ ０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ . 水对照ꎻ . ＲｃＳＭＰＤ 克隆载体质粒ꎻ １、２. 含有 ＲｃＳＭＰＤ 植物表达载体质粒的大肠杆菌菌液ꎮ Ｂ
             Ｍ. ＤＬ ２ ０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ . 水对照ꎻ . ＲｃＳＭＰＤ 克隆载体质粒ꎻ １－３. 含 ＲｃＳＭＰＤ 植物表达载体质粒农杆菌菌液ꎮ
             Ａ Ｍ. ＤＬ ２ ０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ . Ｗａｔｅｒ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ . ＲｃＳＭＰＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ ｐｌａｓｍｉｄꎻ １ꎬ ２. Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＲｃＳＭＰＤ ｐｌａｎｔ
             ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐｌａｓｍｉｄｓ. Ｂ Ｍ. ＤＬ ２ ０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ  . Ｗａｔｅｒ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ  . ＲｃＳＭＰＤ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ ｐｌａｓｍｉｄꎻ １ － ３. Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
             ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＲｃＳＭＰＤ ｐｌａｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐｌａｓｍｉｄｓ.
                      图 ５  ＲｃＳＭＰＤ 植物表达载体质粒的验证(Ａ)及含表达载体农杆菌菌液的 ＰＣＲ 验证(Ｂ)
                        Ｆｉｇ. ５  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ＲｃＳＭＰＤ ｐｌａｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐｌａｓｍｉｄｓ (Ａ) ａｎｄ ＰＣＲ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
                               ｏｆ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ (Ｂ)


            位在叶绿体或液泡上ꎬ也有较小的可能定位于细                              响应环境变化和发育信号也需要后续深入探索ꎮ

            胞核与线粒体中ꎬ此分析结果更倾向于 ＲｃＳＭＰＤ                           ３.３ ＲｃＳＭＰＤ 单独的过量表达不足以引起拟南芥
            属于 ＮＳＭ ( 王 荣 悦 等ꎬ ２０２３)ꎮ 在 使 用 ＮＣＢＩ 的              抗逆特性的改变

            ＣＤＤ 工 具 ( ｈｔｔｐｓ: / / ｗｗｗ. ｎｃｂｉ. ｎｌｍ. ｎｉｈ. ｇｏｖ /        砂藓在抗逆过程中的部分差异 表 达 基 因 应
            Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ / ｃｄｄ) 对 ＲｃＳＭＰＤ 进 行 保 守 结 构 域 预 测        具有提高植物抗逆性的功能ꎬ这些抗逆功能的具
            时ꎬ发现其具有完整的 ＮＳＭ 结构域ꎬ然而展开观察                          体机制与这些基因编码蛋白质的本质生化或分
            后发现ꎬ数据显示该保守结构域与 ＲｃＳＭＰＤ 的一                          子生物学功能相关ꎮ 前人研究发现ꎬＡＯＳ 可能与
            致性仅有约 ３０％ꎬ虽然一致的序列中包含 ＳＭＰＤ                          植物对干旱胁迫的信号转导途径有关ꎬ将快速脱
            关键的催化位点ꎬ但更多的序列差异表明 ＲｃＳＭＰＤ                          水过程中砂藓的一个差异表达的 ＡＯＳ 编码基因
            与其他植物中 ＳＭＰＤ 已发现的蛋白质功能有所不                           ＲｃＡＯＳ１ 在拟南芥中过表达提高了转基因拟南芥
            同ꎮ 在进行生物信息学分析时ꎬ我们本想寻找一                             的抗旱性( 秦瑞峰等ꎬ２０１８) ꎻ一些 ＭＹＢ 转录因子
            些与 ＲｃＳＭＰＤ 亲缘关系较近的植物与 ＳＭＰＤ 进行                       在植物的生长发育及应对各种环境胁迫中发挥
            系统进化分析和序列相似度分析ꎬ然而意外的是ꎬ                             着关键作用ꎬ将同样在砂藓脱水处理下差异表达
            在现有的数据库中并未发现较多植物 ＳＭＰＤ 序列                           的 ＲｃＭＹＢ 转入到烟草( Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ) 中并超
            记录ꎬ并且在目前已有的序列中ꎬＲｃＳＭＰＤ 相似度                          量表达后发现ꎬ在干旱胁迫条件下转基因烟草具
            最高的序列也仅有约 ５１％的相似度ꎬ序列一致性                            有比野生型植株更强的稳定性和恢复能力( 孙静
            为 ３２％ꎬ这说明类似 ＲｃＳＭＰＤ 这类的植物蛋白质                        等ꎬ２０１７) ꎮ ＲｃＳＭＰＤ 同 样 是 砂 藓 在 脱 水 胁 迫 和
            研究十分稀少ꎬ相关蛋白质的特性需要更广泛的                              高温胁迫中的差异表达基因ꎬ为进一步探究过表
            后续研究ꎮ 由于之前 ＳＭＰＤ 的亚细胞定位研究基                          达 ＲｃＳＭＰＤ 是否会使拟南芥的生长状态和抗 逆
            本不来自植物ꎬ因此植物细胞叶绿体和液泡中主                              特性发生改变ꎬ本研究构建了 ＲｃＳＭＰＤ 过表达转
            要有哪类 ＳＭＰＤ 发挥功能有待进一步研究ꎬＳＭＰＤ                         基因拟南芥植株ꎬ对其进行 ２０％ ＰＥＧ￣６０００ 模拟
            的水解酶本质特性符合液泡的生物学功能ꎬ推测                              的干旱胁迫处理和 ４５ ℃ 高温胁迫处理ꎬ并与野
            ＲｃＳＭＰＤ 在一般情况下储存于液泡中的可能性较                           生型拟南芥植株进行对比以验证其功能ꎮ 研究
            大ꎬ而其是否能够进入叶绿体ꎬ是否确实在植物中                             结果表明ꎬ在 ＰＥＧ￣６０００ 和 ４５ ℃ 高温胁迫下转基
            通过水解 ＳＭ 产生 Ｃｅｒ 调控各种信号代谢通路以                         因植株与野生型植株相比抗逆性未产生显著性
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