Page 89 - 《广西植物》2025年第8期

８ 期 刘艳娇等: 枯落物输入变化对云南松林土壤微生物群落结构及功能影响 １ ４ ５ ５

表 １ 不同枯落物处理方法
Ｔａｂｌｅ １ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｉｔｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ
处理 描述
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
对照 枯落物正常输入
Ｃｏｎｔｒｏｌ (ＣＫ) Ｎｏｒｍａｌ ｌｉｔｔｅｒ ｉｎｐｕｔｓ
去除枯落物 于每年秋季树木生长期结束后ꎬ人工移除小区地上部分的枯落物
Ｎｏ ｌｉｔｔｅｒ (ＮＬ) Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｅｎｄ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅｅ ｇｒｏｗｔｈ ｐｅｒｉｏｄ ｅａｃｈ ａｕｔｕｍｎꎬ ｔｈｅ ｌｉｔｔｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｉｓ
ｍａｎｕａｌｌｙ ｒｅｍｏｖｅｄ
双倍枯落物 将 ＮＬ 小区移除的枯落物加入ꎬ使地上部分的枯落物输入加倍
Ｄｏｕｂｌｅ ｌｉｔｔｅｒｓ (ＤＬ) Ａｄｄ ｔｈｅ ｌｉｔｔｅｒ ｒｅｍｏｖｅｄ ｆｒｏｍ ＮＬ ｐｌｏｔꎬ ｄｏｕｂｌｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｐｕｔ ｏｆ ｌｉｔｔｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｎｄ
去除根系 通过挖壕沟法切断根系(壕沟深度达到土壤 Ｃ 层顶部)ꎬ保持地上部分枯落物正常输入
Ｎｏ ｒｏｏｔ (ＮＲ) Ｃｕｔ ｏｆｆ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｓｙｓｔｅｍ ｂｙ ｔｒｅｎｃｈｉｎｇ ( ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｒｅｎｃｈ ｄｅｐｔｈ ｒｅａｃｈｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｐ ｏｆ ｔｈｅ Ｃ ｌａｙｅｒ ｏｆ ｓｏｉｌ)ꎬ
ｗｈｉｌｅ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｎｏｒｍａｌ ｉｎｐｕｔ ｏｆ ｌｉｔｔｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ａｂｏｖｅｇｒｏｕｎｄ ｐａｒｔ
无输入 切断根系并去除地上部分枯落物ꎮ 无地上枯落物输入ꎬ也无地下根系输入
Ｎｏ ｉｎｐｕｔ (ＮＩ) Ｃｕｔ ｏｆｆ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｒｅｍｏｖｅ ｔｈｅ ｌｉｔｔｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｎｄ. Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｉｎｐｕｔ ｏｆ ｌｉｔｔｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｕｎｄꎬ ｎｏｒ
ｉｓ ｔｈｅｒｅ ａｎｙ ｉｎｐｕｔ ｏｆ ｕｎｄｅｒｇｒｏｕｎｄ ｒｏｏｔ ｓｙｓｔｅｍ
去除有机层和 Ａ 层 去除有机层(Ｏ 层)和 Ａ 层(腐殖质层)之后ꎬ维持正常的枯落物输入
Ｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ａ ｈｏｒｉｚｏｎｓ ｒｅｍｏｖｅｄ (ＯＡ) Ａｆｔｅｒ ｒｅｍｏｖｉｎｇ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｌａｙｅｒ (Ｏ ｌａｙｅｒ) ａｎｄ Ａ ｌａｙｅｒ (ｈｕｍｕｓ ｌａｙｅｒ)ꎬ ｍａｉｎｔａｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｌｉｔｔｅｒ ｉｎｐｕｔ

１.３ 土壤化学性质的测定 少测序深度不同对 α 和 β 多样性分析的干扰ꎬ将
采用电位法测定土壤 ｐＨ( 鲍士旦ꎬ２０００)ꎻ采 细菌 和 真 菌 样 本 序 列 数 分 别 抽 平 至 ３７ ２２６ 和
用盐酸酸化－总碳分析仪( Ｖａｒｉｏ ＴＯＣꎬ德国) 测定 ３９ ２３８ꎮ 利用 ＲＤＰ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ ２.１３ 进行 ＯＴＵ 分类学
土壤有机碳( ｓｏｉｌ ｏｒｇａｎｉｃ ｃａｒｂｏｎꎬ ＳＯＣ) 含量ꎻ采用 注释( Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７)ꎬ参考细菌 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基

浓硫酸￣过氧化氢消解和连续流动分析仪( ＳＥＡＬ 因数据库( Ｓｉｌｖａ１３８ / １６ｓ＿ｂａｃｔｅｒｉａ) 和真菌 ＩＴＳ 基因
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ＡＡ３ꎬ 德 国) 测 定 总 氮 ( ｔｏｔａｌ ｎｉｔｒｏｇｅｎꎬ 数据库(ｕｎｉｔｅ８.０ / ｉｔｓ＿ｆｕｎｇｉ)ꎬ统计各样本群落组成ꎮ
ＴＮ)、 总 磷 ( ｔｏｔａｌ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓꎬ ＴＰ ) 和 总 钾 ( ｔｏｔａｌ 使 用 ＰＩＣＲＵＳｔ２ 软 件 进 行 １６Ｓ 功 能 预 测 分 析
ｐｏｔａｓｓｉｕｍꎬ ＴＫ)的含量(欧阳林梅等ꎬ２０１４)ꎮ (Ｄｏｕｇｌａｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎬ 使 用 京 都 ＫＥＧＧ ( Ｋｙｏｔｏ
１.４ 高通量测序 Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅｓ) 数据库注释细

使用 ＱＪ 磁珠 ＤＮＡ 抽提试剂盒( 德国 Ｑｉａｇｅｎ 菌功能ꎮ 使用 ＦＵＮＧｕｉｌｄ( Ｆｕｎｇｉ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｕｉｌｄ) 数
公司)提取 ＤＮＡꎬ采用质量分数 １％琼脂糖凝胶电 据库预测真菌功能(Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎮ
泳 ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００( 美国 Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公 采用 ｍｏｔｈｕｒ１.３０.２ 计算 α 多样性指数(Ｓｃｈｌｏｓｓ
司) 检 测 质 量 与 纯 度ꎻ 利 用 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基 因 引 物 ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００９)ꎻ采用 ＰＣｏＡ 分析( Ｂｒａｙ￣Ｃｕｒｔｉｓ 距离)

３３８Ｆ ( ５′￣ＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ￣３′) 和 检验 样 本 微 生 物 群 落 相 似 性ꎬ 并 通 过 ＡＮＯＳＩＭ
８０６Ｒ(５′￣ＧＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＷＴＣＴＡＡＴ￣３′) 扩增细 (ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ)来进行样本间微生物群落
菌 的 Ｖ３Ｖ４ 区ꎬ 使 用 ＩＴＳ 引 物 ＩＴＳ１Ｆ ( ５′￣ 结构差异检验ꎻ采用 ＲＤＡ( ｒｅｄｕｎｄａｎｃｙ ａｎａｌｙｓｉｓ) 分
ＣＴＴＧＧＴＣＡＴＴＴＡＧＡＧＧＡＡＧＴＡＡ￣３′) 和 ＩＴＳ２Ｒ ( ５′￣ 析探讨土壤微生物与土壤理化性质之间的关联
ＧＣＴＧＣＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧＣ￣３′) 扩 增 真 菌 的 ＩＴＳ１ 性ꎻ基于 Ｓｐｅａｒｍａｎ 相关系数( ｜ ｒ ｜ >０.６ꎬＰ<０.０５) 进
区ꎮ ＰＣＲ 的反应条件如下:９５ ℃ ꎬ３ ｍｉｎꎻ细菌 ２７ 行土壤化学性质的测定与微生物功能的相关性分
个循环、真菌 ３５ 个循环(９５ ℃ ꎬ３０ ｓꎻ５５ ℃ ꎬ３０ ｓꎻ 析ꎻ使 用 Ｅｘｃｅｌ ２０１６ 整 理 数 据ꎻ 使 用 ＳＰＳＳ １７. ０
７２ ℃ ꎬ３０ ｓ)ꎻ最后 ７２ ℃ 延伸 １０ ｍｉｎꎮ 扩增产物经 (ＳＰＳＳꎬＩＢＭꎬ美国)进行统计分析ꎮ
回收、纯化、检测、定量后构建文库ꎬ使用 Ｉｌｌｕｍｉｎａ
ＭｉＳｅｑ(ＰＥ３００)进行高通量测序ꎬ委托上海美吉生 ２ 结果与分析
物医药科技有限公司进行ꎮ
１.５ 数据处理和分析 ２.１ 微生物群落组成及多样性变化特征
原始数据经过质控、拼接、聚类和嵌合体去除 ２.１.１ 土壤细菌和真菌群落组成的变化 测序数
后ꎬ最终基于 ９７％的相似性阈值划分 ＯＴＵꎮ 为减 据经 处 理 划 分 ＯＴＵ ( ９７％ 相 似 性) 后ꎬ 获 得 细 菌