Page 50 - 《广西植物》2026年第3期

４ ２ ６ 广 西 植 物 ４６ 卷
制备液相色谱(甲醇 ∶ 水ꎬ１８ ∶ ８２ꎬ Ｖ / Ｖ) 分离后经 ２０.０
１２６.５ ℃ ꎻ 比 旋 光 度 [ α] ＋ ８. ６ ( ｃ ＝ ０. １ꎬ
Ｄ
过重结晶得到化合物 １５ ( ｔ ＝ ７０ ｍｉｎꎬ １.５ ｍｇ)ꎻ
Ｒ ＋
ＭｅＯＨ)ꎻＨＲ￣ＥＳＩ￣ＭＳ ( ｍ / ｚ) ２７３. １４６ ０ [ Ｍ ＋ Ｎａ]
Ｆｒ.ｙ２－２－５ 经硅胶柱色谱分离后ꎬ重结晶得到化合
(计算值为Ｃ Ｈ ＮａＯ ꎬ２７３.１４６ １)ꎬ 确定分子式
１５ ２２ ３
物 １６ (５.７ ｍｇ)ꎻＦｒ.ｙ２－２－６ 经硅胶柱色谱分离后ꎬ
为 Ｃ Ｈ Ｏ ꎬ 不 饱 和 度 为 ５ꎮ ＩＲ 中 ３ ４３５、 １ ６３３
３
１５
２２
再进行半制备液相色谱(甲醇 ∶ 水ꎬ３３ ∶ ６７ꎬ Ｖ / Ｖ)
￣１
ｃｍ 提示可能含有羟基和羰基ꎮ
分离ꎬ 得 到 化 合 物 １３ ( ｔ ＝ ４９ ｍｉｎꎬ ５６. ７ ｍｇ)ꎻ
Ｒ １ Ｈ￣ＮＭＲ (５００ ＭＨｚꎬ ＣＤＣｌ ) 显示含有 ２ 个烯
Ｆｒ.ｙ２－２－７ 先 后 经 硅 胶 柱 色 谱、 葡 聚 糖 凝 胶 ３
氢信号[ δ ６.１７ (１Ｈꎬ ｄｄꎬ Ｊ ＝ １０.１ꎬ ６.６ Ｈｚꎬ Ｈ￣
Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 色谱分离纯化ꎬ再经过重结晶得到 Ｈ
３)ꎬ δ ４.８２ (２Ｈꎬ ｄｄꎬ Ｊ ＝ ３.６ꎬ ２.１ Ｈｚꎬ Ｈ￣１２)]ꎬ３
化合物 ９ (５.２ ｍｇ)ꎻＦｒ.ｙ２－２－９ 经硅胶柱色谱分离 Ｈ
个亚甲基氢信号 [δ ２.３９ (２Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣４)ꎬ δ ２.３２
和重结晶得到化合物 １０ (１７.１ ｍｇ)ꎮ Ｈ Ｈ
(２Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣６)ꎬ δ １. ２３ ( １Ｈꎬ ｄｄｄꎬ Ｊ ＝ １２. ６ꎬ
１.３.２ 单 体 化 合 物 细 胞 毒 活 性 筛 选 试 验 采 用 Ｈ
１０.０ꎬ ２.６ Ｈｚꎬ Ｈ￣９ａ)ꎬ δ ２.５１ (１Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣９ｂ)]ꎬ３
ＭＴＳ 法测定分得的单体化合物对人白血病 ＨＬ￣６０、 Ｈ
非小 细 胞 肺 癌 Ａ５４９、 肝 癌 ＳＭＭＣ￣７７２１、 结 肠 癌 个次甲基氢信号 [ δ ４.９８ ( １Ｈꎬ ｄｄｄꎬ Ｊ ＝ １１.８ꎬ
Ｈ
ＳＷ４８０ 和乳 腺 癌 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 的 体 外 细 胞 毒 活 ４.０ꎬ １.７ Ｈｚꎬ Ｈ￣１０)ꎬ δ ３.０３ (１Ｈꎬ ｄｑꎬ Ｊ ＝ １４.５ꎬ
Ｈ
５.０ Ｈｚꎬ Ｈ￣５)ꎬ δ ２.４５ (１Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣８)] 和 ３ 个甲
性ꎮ 将化合物溶于 ＤＭＳＯ 配制成 ４０ μｍｏｌＬ 的 Ｈ
￣１
各样品储备液ꎬ测试前稀释到合适的浓度ꎮ 阳性 基氢信号 [δ １.９４ (３Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣１５)ꎬ １.８１ (３Ｈꎬ ｓꎬ
Ｈ
Ｈ￣１３)ꎬ １.０２ (３Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ６.７ Ｈｚꎬ Ｈ￣１４)]ꎮ
对照选用阿霉素和紫杉醇ꎬ均按 Ｋａｕｍｄａ 等(２０２０)
１３ Ｃ￣ＮＭＲ (１２５ ＭＨｚꎬ ＣＤＣｌ )和 ＤＥＰＴ 显示 １５
的方法配制ꎮ 取对数生长期细胞ꎬ使用培养基( 含 ３
个碳信号ꎮ δ ２１４.７、２０６.５ 为 ２ 个酮羰基碳信号ꎻ
１０％胎牛血清)制备单细胞悬液ꎬ将细胞接种于 ９６ Ｃ
δ １４７.６、１３７.１、１４２.８、１１０.６ 为 ４ 个烯碳信号ꎬ表
孔板ꎬ每孔体积 １００ μＬꎬ于 ３７ ℃ 、５％ ＣＯ 条件下 Ｃ
２
预培养 ２４ ｈꎮ 实验设置不同浓度实验组ꎬ同时设 明分子中有 ２ 个双键ꎻδ ４６.１、４１.７、３４.５ 为 ３ 个亚
Ｃ
甲基碳信号ꎻδ ７０.３、４６.８、４５.６ 为 ３ 个次甲基碳信
置阳性对照组和空白对照组ꎬ每组设置 ３ 个复孔ꎮ Ｃ
号ꎬ 其中 δ ７０.３ 为连氧碳信号ꎻ还有 ３ 个甲基碳
给药前弃去孔内原培养基ꎬ并使用 ＰＢＳ 清洗细胞ꎬ Ｃ
信号 δ ２１.３、１８.７、１２.４( 表 １)ꎮ 结合上述基团及
每孔加入 ２００ μＬ 含药培养基ꎬ３７ ℃ 连续培养 ４８ Ｃ
ｈꎮ 终止 培 养 后ꎬ 弃 去 孔 内 的 培 养 液ꎬ 每 孔 加 入 不饱和度提示该化合物存在 １ 个环ꎮ
１ Ｈ￣ Ｈ ＣＯＳＹ( 图 ２) 显示 Ｈ￣３ / ４ / ５ / ６ 相关ꎬ说
１
ＭＴＳ 试剂 ２０ μＬ 与培养液 １００ μＬꎬ同时设置 ３ 个
明存在 [￣ＣＨ－ＣＨ －ＣＨ－ＣＨ ￣] 片段ꎻＨ￣８ / ９ / １０ 相
空白复 孔 ( 仅 含 ＭＴＳ 试 剂 ２０ μＬ 与 培 养 液 １００ ２ ２
μＬ)ꎮ 孵育 ２ ~ ４ ｈ 后ꎬ使用多功能酶标仪于 ４９２ 关ꎬ说 明 存 在 [￣ＣＨ － ＣＨ － ＣＨ￣] 片 段ꎮ 由 ＨＭＢＣ
２
ｎｍ 波长下ꎬ读取各孔 ＯＤ 值ꎬ根据 ＯＤ 值推测活肿 (图 ２)可知ꎬＨ￣１２ 与 Ｃ￣１１、Ｃ￣５、Ｃ￣１３ 相关ꎬ推测存
瘤细胞的数目ꎬ并计算生长抑制率ꎮ 对 ５ 株肿瘤 在甲基乙烯基碎片且与 Ｃ￣５ 相连ꎻＨ￣１４ 与 Ｃ￣８、Ｃ￣９
细胞的增殖抑制作用大于 ５０％的单体化合物进行 相关ꎬＨ￣１５ 与 Ｃ￣２、Ｃ￣３ 相关ꎬ推测 Ｃ￣８、Ｃ￣２ 分别连
复筛ꎬ复筛的给药浓度分别为 ０.０６４、０.３２、１.６、８、 有甲基ꎻＨＭＢＣ 还显示 Ｈ￣９ 与 Ｃ￣１ 相关ꎬＨ￣４ 与 Ｃ￣２
∗
４０ μｍｏｌＬ ꎮ 采用两点法计算化合物对 ５ 株肿 相关ꎬＨ￣６ 与 Ｃ￣４ 相关ꎬ提示化合物 １ 存在 １ 个十
￣１
元环ꎬ确定其平面结构为 １０￣羟基￣５￣(１￣甲基乙烯
瘤细胞的 ＩＣ 值ꎮ
５０
基)￣２ꎬ８￣二 甲 基￣２￣环 癸 烯￣１ꎬ７￣二 酮 ( １０￣ｈｙｄｒｏｘｙ￣
２ 结果与分析 ２ꎬ ８￣ｄｉｍｅｔｈｙｌ￣５￣( １￣ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｎｙｌ)￣２￣ｃｙｃｌｏｄｅｃｅｎｅ￣１ꎬ
７￣ｄｉｏｎｅ)(图 ３)ꎻ经 ＳｃｉＦｉｎｄｅｒ 检索ꎬ化合物 １ 为新
∗
２.１ 化合物结构鉴定 化合物ꎬ为进一步确定其绝对构型ꎬ利用单晶 Ｘ 射
∗
测定分得单体化合物的 Ｈ￣ＮＭＲ、 Ｃ￣ＮＭＲ 以及 线衍射分析( 图 ４) 确定化合物 １ 的绝对构型为
１３
１
二维核磁共振谱、单晶 Ｘ 射线衍射等光谱数据ꎬ并 ５Ｓꎬ８Ｓꎬ １０Ｓꎬ 命 名 为 古 羊 藤 二 酮 Ａ ( ｓｔｒｅｊｕｖｄｉｏｎｅ
结合理化性质和文献对比等方法ꎬ进行数据分析和 Ａ)ꎬ化合物晶体结构参数见表 ２ꎮ
归属ꎬ分离鉴定到的 １６ 个化合物结构如图 １ 所示ꎮ 化合物 ２ 黄色油状物ꎬＥＳＩ￣ＭＳ ( ｍ / ｚ):２９９.２
＋
１
化合 物 １ 无 色 针 晶 ( 甲 醇 － 水)ꎬ 熔 点 为 [Ｍ＋Ｎａ] ꎮ 分子式为 Ｃ Ｈ Ｏ ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ (５００ ＭＨｚꎬ
∗
１７
２４
３