Page 7 - 《广西植物》2026年第3期
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３ 期                  江敏等: 罗汉果苷Ⅴ在帕金森病模型中的神经保护机制研究                                            ３ ８ ３

            抑制促炎因子释放(Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎮ 此外ꎬ在抑                  β￣Ａｃｔｉｎ 抗 体 ( 中 国 北 京 普 利 莱 基 因 技 术 有 限 公
            郁症模型中ꎬＭＶ 通过抑制炎症与氧化应激通路ꎬ                            司)ꎻ ＤＡＰＩ 染 料、 山 羊 抗 兔 / 小 鼠 Ａｌｅｘａ￣ｆｌｕｏｒ
            激活 ＢＤＮＦ / ＴｒｋＢ / ＡＫＴ 信号ꎬ显著改善小鼠抑郁样                  ４８８ / ５９４荧光二抗、ＢＣＡ 蛋白质定量试剂盒( 美国
            行为且促进神经修复( Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２３)ꎮ 这些结                  Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公司)ꎻ山羊抗兔 ８００ / 小鼠 ６８０ 荧
            果提示ꎬＭＶ 在神经系统疾病中具有潜在的神经保                            光 二 抗 ( 美 国 ＬＩ￣ＣＯＲ 公 司 )ꎻ 聚 偏 二 氟 乙 烯
            护作用ꎮ Ｌｕｏ 等(２０２２) 在 ＰＤ 模型中发现ꎬＭＶ 有                   (ＰＶＤＦ) 膜( 美国 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ 公司)ꎻＤＭＥＭ 培养基、
            效改善 ＰＤ 小鼠的运动症状ꎬ并缓解 ＤＡ 能神经元                         Ｏｐｔｉ￣ＭＥＭ 培养基、１００×青链霉素双抗( Ｐ￣Ｓ)、胎牛
            的损伤ꎮ 结合 ＤＲＤ１ 在黑质－纹状体运动通路中                          血清 ( ＦＢＳ)、 Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ、５０ × Ｂ２７ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、
            的重要作用ꎬ其表达水平下降与运动能力密切相                              １００ × Ｌ￣Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ、 ０. ２５％ Ｔｒｙｐｓｉｎ￣ ＥＤＴＡ ( 美 国
            关ꎬ我们推测 ＭＶ 对运动的积极作用可能与其调控                           Ｇｉｂｃｏ 公 司 )ꎻ Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００ ( 美 国 Ｔｈｅｒｍｏ

            ＤＲＤ１ 的表达有关ꎮ                                        Ｆｉｓｈｅｒ 公司)ꎻ ＮＭＤＡＲ１ 质 粒 购 自 生 工 生 物 工 程
                 此外ꎬＦｉｏｒｅｎｔｉｎｉ 等(２００３) 研究发现ꎬＤＲＤ１ 和             (上海)股份有限公司ꎮ

            Ｎ￣甲基￣Ｄ￣天冬氨酸受体( Ｎ￣ｍｅｔｈｙｌ￣Ｄ￣ａｓｐａｒｔｉｃ ａｃｉｄ                细胞培养箱、低温台式离心机( 美国 Ｔｈｅｒｍｏ
            ｒｅｃｅｐｔｏｒꎬＮＭＤＡＲ) 在细胞内通过以组成型异源多                      Ｆｉｓｈｅｒ 公司)ꎻ体视显微镜(日本 ＯＬＹＭＰＵＳ 公司)ꎻ
            聚体复合体的形式被组装ꎬ并传递到功能位点ꎮ                              水平摇床( 中国北京中科环试仪器有限公司)ꎻ电
            激活的 ＤＲＤ１ 可以增强 ＮＭＤＡＲ 对细胞内 Ｃａ 浓                      泳仪、电转仪(美国 Ｂｉｏ￣Ｒａｄ 公司)ꎻＯＤＹＳＳＥＹ 双色
                                                       ２＋
            度的调节作用(Ｋｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００９)ꎬ而 ＤＲＤ１ 突变               红外荧光成像系统(美国 ＬＩ￣ＣＯＲ 公司)ꎻ荧光显微
            的小鼠海马中 ＮＭＤＡＲ１ 的激活显著降低( Ｘｉｎｇ ｅｔ                     镜(日本 ＮＩＫＯＮ 公司)ꎮ
            ａｌ.ꎬ ２０１０)ꎮ 然而ꎬＮＭＤＡＲ１ 是否参与 α￣Ｓｙｎ ＰＦＦ               １.２ 方法
            导致的 ＤＲＤ１ 表达下降ꎬＭＶ 能否抑制 α￣Ｓｙｎ ＰＦＦ                    １.２.１ Ｃ５７ＢＬ / ６Ｊ 胎鼠大脑皮层原代神经元体外培
            导致的 ＤＲＤ１ 表达下调ꎬ以及 ＭＶ 能否通过调节                         养  Ｃ５７ＢＬ / ６Ｊ 孕鼠饲养于桂林医科大学第一附
            ＮＭＤＡＲ１ 水平发挥抑制 ＤＲＤ１ 表达下降的作用ꎬ                        属医院动物研究中心ꎬ恒温恒湿ꎬ自由饮食、饮水ꎮ
            尚缺乏直接证据ꎮ 本研究利用 α￣Ｓｙｎ ＰＦＦ 构建 α￣                     本实验过程中操作方法均符合实验动物护理和使
            Ｓｙｎ 过表达的 ＰＤ 原代和细胞模型ꎬ在细胞水平评                         用研究指南ꎬ并已获得桂林医科大学实验动物伦
            价 ＭＶ 对 ＤＲＤ１ 和 ＮＭＤＡＲ１ 表达的影响ꎬ并通过                     理委员会批准( Ｎｏ.２０１９￣００１０)ꎮ 用异氟烷麻醉后
            质粒过表达等方式阐释其具体作用机制ꎬ旨在阐                              取出胎鼠ꎬ于体视显微镜下剥离血管脑膜ꎻ０.２５％
            明 ＭＶ 参与 ＰＤ 神经保护作用的潜在机制ꎬ为 ＰＤ                        Ｔｒｙｐｓｉｎ￣ＥＤＴＡ 消化 １５ ｍｉｎ 后 轻 柔 吹 打 成 细 胞 悬
            天然药物研发提供理论依据ꎮ                                      液ꎬ２００ 目细胞筛过滤成单细胞悬液后进行细胞计
                                                                         ６
                                                               数ꎻ将 ２×１０ 个细胞接种于 ６ ｃｍ 的细胞培养皿中ꎬ
            １  材料与方法                                           用于蛋白质免疫印迹(Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ)实验ꎬ将 １×１０             ５
                                                               个细 胞 接 种 于 ２４ 孔 板 中ꎬ 用 于 免 疫 荧 光 染 色
            １.１ 材料                                             (ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｔａｉｎｉｎｇꎬＩＦ)实验ꎻ含 １０％ ＦＢＳ
                 罗汉果苷Ⅴ( ＭＶ) 购自北京索莱宝科技有限                        和 １％ Ｐ￣Ｓ 的 ＤＭＥＭ 培养细胞至贴壁ꎬ更换培养基
            公司ꎻ大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤( ＰＣ１２) 细胞购自武                         为 Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ Ａ ＋ ２％ Ｂ２７ ＋ １％ Ｌ￣Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ＋ １％
            汉普诺赛生命科技有限公司ꎻＣ５７ＢＬ / ６Ｊ 小鼠购自                       Ｐ￣Ｓꎬ置于 ３７ ℃ 、５％ ＣＯ 的细胞培养箱中培养ꎬ每
                                                                                    ２
            湖南斯莱克景达实验动物有限公司ꎮ                                   ３ ｄ 换半液ꎻ培养 ７ ｄ 后进行 α￣Ｓｙｎ 及 ＭＶ 干预ꎮ
                 重组 人 α￣Ｓｙｎ 蛋 白 及 抗 α￣Ｓｙｎ 单 克 隆 抗 体            １.２.２ 细胞外加 α￣Ｓｙｎ 处理  在 ５ ｍＬ 离心管中先
            (３Ｄ５ꎬＡＢ＿２３１５７８２) 由首都医科大学宣武医院于                      分别加入等量培养基ꎬ再分别加入 α￣Ｓｙｎ 单体或 α￣
                                                                                             ￣１
            顺教授惠赠ꎻ重组人 α￣Ｓｙｎ 预成型纤维( ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ                   Ｓｙｎ ＰＦＦ 至终浓度为 １０ μｇｍＬ ꎬ于超声破碎仪
            ｆｉｂｒｉｌｓꎬＰＦＦ)(加拿大 ＳｔｒｅｓｓＭａｒｑ 公司)ꎻα￣Ｓｙｎ 抗体           ３００ Ｗ 下ꎬ２０％超声破碎 １０ ｓ 混匀备用( Ｖｏｌｐｉｃｅｌｌｉ￣
            和 ＮＭＤＡＲ１       抗 体 ( 美 国 ＢＤ         Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ   Ｄａｌｅｙ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４)ꎻ吸弃旧培养基ꎬ分别加入上述
            Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 公司)ꎻＤＲＤ１ 和 ＮＭＤＡＲ１ 抗体( 美国              含 α￣Ｓｙｎ 单体或 ＰＦＦ 的培养基ꎬ于细胞培养箱中继
            Ａｆｆｉｎｉｔｙ 公司)ꎻＤＲＤ１ 抗体(美国 Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ 公司)ꎻ            续培养ꎮ
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