Page 53 - 《广西植物》2026年第5期

５ 期 王建伟等: 甘蓝型油菜转录因子 ＭＹＢ４ 的克隆、亚细胞定位及表达分析 ７ ８ ５

星号( )、冒号(:)和点号(.)分别表示相同残基、保守替换和半保守替换ꎮ 比对物种为甘蓝型油菜(ＸＰ＿０４８６２６７１９.１)、甘蓝型
油菜 ( ＸＰ ＿ ０４８６０６２７１. １)、 甘 蓝 型 油 菜 ( ＡＭＰ４２９７９. １)、 甘 蓝 型 油 菜 ( ＸＰ ＿ ０１３６５６７４４. ２)、 蔓 菁 ( ＸＰ ＿ ００９１０９５４０. １)、 萝 卜
(ＫＡＪ４８８００４２.１)、拟南芥(ＮＰ＿１９５５７４.１)、琴叶拟南芥( ＸＰ ＿０２０８７２４０８.１)、甘蓝型油菜( ＭＹＢ４￣３.１￣ＮＹ８６８)、甘蓝型油菜( ＸＰ ＿
０１３７０５１０４.２)、萝卜(ＫＡＪ４８６８６３１. １)、 萝 卜 ( ＸＰ ＿０１８４８０２２１. １)、 萝 卜 ( ＸＰ ＿０５６８５７３１５. １)、 波 斯 滨 藜 ( ＫＡＬ２９３７１０８. １)、 山 茶
(ＷＱＱ４１７３０.１)、茶(ＡＲＢ５１５９９.１)、墨西哥辣椒(ＸＰ＿０１６５３９９５１.２)、风铃辣椒(ＰＨＴ４１９０２.１)ꎮ
Ａｓｔｅｒｉｓｋｓ ( )ꎬ ｃｏｌｏｎｓ (:)ꎬ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｓ (.) ｓｈｏｗ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｒｅｓｉｄｕｅｓꎬ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓꎬ ａｎｄ ｓｅｍｉｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓꎬ
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ＭＹＢ４ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ ( ＸＰ ＿ ０４８６２６７１９. １)ꎬ Ｂ. ｎａｐｕｓ ( ＸＰ ＿ ０４８６０６２７１. １)ꎬ Ｂ. ｎａｐｕｓ
(ＡＭＰ４２９７９.１)ꎬ Ｂ. ｎａｐｕｓ (ＸＰ＿０１３６５６７４４.２)ꎬ Ｂ. ｒａｐａ (ＸＰ＿００９１０９５４０.１)ꎬ Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ (ＫＡＪ４８８００４２.１)ꎬ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ (ＮＰ＿
１９５５７４.１)ꎬ Ａ. ｌｙｒａｔａ ｓｕｂｓｐ. ｌｙｒａｔａ (ＸＰ＿０２０８７２４０８.１)ꎬ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ (ＭＹＢ４￣３.１￣ＮＹ８６８)ꎬ Ｂ. ｎａｐｕｓ (ＸＰ＿０１３７０５１０４.２)ꎬ Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ
(ＫＡＪ４８６８６３１.１)ꎬ Ｒ. ｓａｔｉｖｕｓ (ＸＰ＿０１８４８０２２１.１)ꎬ Ｒ. ｓａｔｉｖｕｓ (ＸＰ＿０５６８５７３１５.１)ꎬ Ｂｉｅｎｅｒｔｉａ ｓｉｎｕｓｐｅｒｓｉｃｉ (ＫＡＬ２９３７１０８.１)ꎬ Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ
(ＷＱＱ４１７３０.１)ꎬ Ｃ. ｓｉｎｅｎｓｉｓ (ＡＲＢ５１５９９.１)ꎬ Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ (ＸＰ＿０１６５３９９５１.２)ꎬ Ｃ. ｂａｃｃａｔｕｍ (ＰＨＴ４１９０２.１).
图 ３ ＢｎａＭＹＢ４ 与部分植物 ＭＹＢ４ 氨基酸序列比对
Ｆｉｇ. ３ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ＢｎａＭＹＢ４ ｗｉｔｈ ＭＹＢ４ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ

ｐｒｏｔｅｉｎꎬＧＦＰ ) 的 融 合 表 达 载 体 ( ３５Ｓ:: ＢｎａＭＹＢ４￣ ２.１１ 镉胁迫下油菜中 ＢｎａＭＹＢ４ 的表达
ＧＦＰ)ꎬ并通过农杆菌介导的瞬时转化法在烟草叶 通过 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 技术ꎬ检测了 ＢｎａＭＹＢ４ 在甘蓝
片表皮细胞中表达ꎮ 激光共聚焦显微镜观察结果 型油菜根、茎、叶中的基础表达及其在 Ｃｄ 胁迫下
如图 １１ 所示ꎬ表达 ＢｎａＭＹＢ４￣ＧＦＰ 融合蛋白的细 的变化(图 １２)ꎮ 在未受胁迫的对照(０ ｍｇｋｇ ￣１
胞中ꎬ绿色荧光信号特异性地聚集在细胞核内ꎬ呈 Ｃｄ)植株中ꎬＢｎａＭＹＢ４ 呈现出组织特异性表达模
现出清晰的点状或团块状分布模式ꎮ 然而ꎬ表达 式ꎬ其在根中的相对表达量最高(２.４５)ꎬ显著高于
空载体 ＧＦＰ 对照的细胞中ꎬ绿色荧光均匀分布在 茎(１.００) 和叶(１.１８)ꎮ 这表明 ＢｎａＭＹＢ４ 可能在
整个细胞(包括细胞核和细胞质) 中ꎮ 本实验结果 根系生理活动中具有更重要的基础功能ꎮ

与生物信息学预测结果完全一致ꎬ确证 ＢｎａＭＹＢ４ 在镉胁迫处理下ꎬＢｎａＭＹＢ４ 表现出组织特异
是一个定位于细胞核的蛋白ꎬ符合其作为转录因 性调控ꎮ 在叶片中ꎬ随着镉浓度(５、１０ ｍｇｋｇ )
￣１
子的细胞学定位特征ꎮ 的增加ꎬＢｎａＭＹＢ４ 的表达量呈现轻微但逐步上调