Page 71 - 《广西植物》2026年第5期

５ 期 李妤等: 辣椒黄化环斑病毒主要功能基因 Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 的 ＶＩＧＳ 体系构建及效率验证 ８ ０ ３

( １. Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ/ Ｙｕｎｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｋｅｙ
Ｌａｂ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２０５ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｙｕｎｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０５００ꎬ Ｃｈｉｎａ )

Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｃｈｉｌｌｉ ｙｅｌｌｏｗ ｒｉｎｇｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓ (ＣＹＲＳＶ) ｃａｕｓｅｓ ｓｅｖｅｒｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ ｍａｎｙ ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｐｌａｎｔｓ ｓｕｃｈ ａｓ
ｃａｓｈ ｃｒｏｐｓ ａｎｄ ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｆｌｏｒａꎬ ｉｔｓ ｍａｊｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｇｅｎｅｓ ( Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ) ａｒｅ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ.
Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｎｏ ｒｅｐｏｒｔ ｈａｓ ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｖｉｒｕｓ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ (ＶＩＧＳ) ｓｙｓｔｅｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｎꎬ ＮＳｓꎬ
ＮＳｍ ｇｅｎｅｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｉｔｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ. Ｔｏ ａｄｄｒｅｓｓ ｔｈｉｓꎬ ａ ＶＩＧＳ ｓｙｓｔｅｍ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｎꎬ ＮＳｓ ａｎｄ ＮＳｍ
ｇｅｎｅｓ ｏｆ ＣＹＲＳＶꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｇｅｎｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ＣＹＲＳＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ. Ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ ３００ ｂｐ ｔａｒｇｅｔ
ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ＣＹＲＳＶ Ｎꎬ ＮＳｓ ａｎｄ ＮＳｍ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｓｅｒｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｐＴＲＶ２ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ. Ｔｈｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｅａｃｈ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｍｏｄｅｓ. Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ
ｆｕｒｔｈｅｒ ｖａｌｉｄａｔｅｄ ｉｎ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ ａｎｄ ｐｅｐｐｅｒ ｐｌａｎｔｓ. Ｔｈｅ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ Ｎꎬ ＮＳｓ ａｎｄ ＮＳｍ ｇｅｎｅｓ ｗａｓ
ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ ( ｑＲＴ￣ＰＣＲ). Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ: (１) Ｔｈｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ ｆｏｒ ＶＩＧＳ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｎꎬ ＮＳｓꎬ ＮＳｍ ｗｅｒｅ ８２.０７％ꎬ ８７.０２％ꎬ ａｎｄ ９４.３９％ ｉｎ Ｎ.ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ａｎｄ
８６.６３％ꎬ ８９.２２％ꎬ ８３.４３％ ｉｎ ｐｅｐｐｅｒꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ. (２) Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａ ＶＩＧＳ ｓｙｓｔｅｍ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｎꎬ ＮＳｓ ａｎｄ ＮＳｍ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ＣＹＲＳＶꎬ ｗｈｉｃｈ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ Ｎꎬ ＮＳｓ ａｎｄ ＮＳｍ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｎ. ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ ａｎｄ ｐｅｐｐｅｒꎬ ｗｉｔｈ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ ｒａｎｇｉｎｇ ｆｒｏｍ ８２％ ｔｏ ９５％. Ｔｈｅ Ｎꎬ
ＮＳｓ ａｎｄ ＮＳｍ ＶＩＧＳ ｓｙｓｔｅｍ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｆｕｔｕｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ＣＹＲＳＶ ａｎｄ ｏｆｆｅｒｓ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｌｙ ｆｒｉｅｎｄｌｙ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｃｈｉｌｌｉ ｙｅｌｌｏｗ ｒｉｎｇｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓ (ＣＹＲＳＶ)ꎬ ｖｉｒｕｓ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ (ＶＩＧＳ)ꎬ ｑＲＴ￣ＰＣＲꎬ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒꎬ
Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａꎬ ｐｅｐｐｅｒ

在中国ꎬ已报道了多种正番茄斑萎病毒属病 株会表现出生长受限、矮缩ꎬ叶片出现黄化环斑、

毒ꎬ 包 括 番 茄 斑 萎 病 毒 ( ｔｏｍａｔｏ ｓｐｏｔ ｗｉｌｔ ｖｉｒｕｓꎬ 紫脉等症状ꎻ果实会出现褪绿黄化、同心圆斑和
ＴＳＷＶ)、辣椒 褪 绿 病 毒 ( ＣａＣＶ)、 西 瓜 银 斑 病 毒 黄化环斑等症状ꎻ感染严重的植株会出现坏死ꎮ
(ＷＳＭｏＶ)等ꎮ ２０１４ 年ꎬ在云南红河哈尼族彝族自 ＣＹＲＳＶ 与其他正番茄斑萎病毒属病毒相似ꎬ是直
治州石屏县采集到一株表现出叶片黄环斑和坏死 径大小为 ８０ ~ １２０ ｎｍ 的球状病毒ꎬ为三分体基
症状的辣椒植株ꎬ从中分离出了一种正番茄斑萎 因组ꎬ 包 含 大、 中、 小 ３ 个 基 因 片 段ꎬ 编 码 主 要
病毒属( Ｏｒｔｈｏｔｏｓｐｏｖｉｒｕｓ) 病毒ꎬ并命名为辣椒黄化 ＣＹＲＳＶ 功能蛋白的基因有 Ｎ、ＮＳｓ 和 ＮＳｍ 基因ꎬ
环 斑 病 毒 ( ｃｈｉｌｌｉ ｙｅｌｌｏｗ ｒｉｎｇｓｐｏｔ ｖｉｒｕｓꎬ ＣＹＲＳＶ ) 以及编码糖蛋白的 Ｇｎ / Ｇｃ 和编码 ＲＮＡ 聚合酶的
(Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎮ 目前ꎬ由正番茄斑萎病毒属 ＲｄＲｐꎬ这些主要功能基因与病毒的分类、运动及
病毒侵染辣椒、番茄等作物引起的病毒病已经成 系统侵染能力均有密切联系ꎮ 其中ꎬＮ 基因编码
为全球范围的主要病毒病害( 刘勇等ꎬ２０１９ꎻ于海 ＣＹＲＳＶ 的结构蛋白－核衣壳蛋白ꎬＮＳｍ 和 ＮＳｓ 编
龙等ꎬ２０２０)ꎮ 近十年来ꎬ正番茄斑萎病毒病在中 码 ＣＹＲＳＶ 的非结构蛋白ꎬＮＳｍ 编码与病毒迁移、
国迅速扩散ꎬ现已蔓延到 １９ 个省份ꎮ 寄主植物感 传播相关的蛋白ꎬＮＳｓ 编码病毒沉默抑制子 ( 杨
染正番茄斑萎病毒属病毒后的症状极其相似ꎬ主 婷婷等ꎬ２０２２) ꎮ 目前ꎬ有关 ＣＹＲＳＶ 侵染机制的
要症状包括环斑( 如褪绿斑、黄斑、坏死斑和带状 研究仍处于空 白 阶 段ꎮ Ｎ 蛋 白 是 正 番 茄 斑 萎 病
斑)、芽坏死、银色斑驳和脉带ꎮ 褪绿斑、黄斑和坏 毒属病毒中最稳定、最保守的蛋白ꎬＮ 蛋白序列
死斑可出现在病毒侵染的所有阶段( 早期、中期和 相似度是用于鉴定划分种和血清组的主要依据

晚期)(Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎮ ( 张 仲 凯 等ꎬ ２００４ꎻ 陈 坤 荣 等ꎬ ２００５ꎻ 桂 敏 等ꎬ
辣椒黄化环斑病毒( ＣＹＲＳＶ) 属布尼亚病毒 ２０２２) ꎮ 因此ꎬ利用核壳体蛋白基因( Ｎ) 设计引
目( Ｂｕｎｙａｖｉｒａｌｅｓ) 番茄斑萎病毒科( Ｔｏｓｐｏｖｉｒｉｄａｅ) 物进行 ＲＴ￣ＰＣＲ 扩增现已成为鉴定该 属 病 毒 的
正番茄斑萎病毒属病毒ꎮ ＣＹＲＳＶ 侵染寄主后ꎬ植 关键方法ꎮ ＣＹＲＳＶ 在国内尚未见详细研究报道ꎬ