Page 75 - 《广西植物》2026年第5期

５ 期 李妤等: 辣椒黄化环斑病毒主要功能基因 Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 的 ＶＩＧＳ 体系构建及效率验证 ８ ０ ７

Ａ. Ｎ、ＮＳｓ、Ｎｓｍ 片段的 ＰＣＲ 产物电泳图ꎻ Ｂ. ｐＴＲＶ２￣Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 质粒转化 ＧＶ３１０１ 后的菌落 ＰＣＲ 产物电泳图ꎻ Ｃ. ｐＴＲＶ２￣Ｎ、ＮＳｓ、
ＮＳｍ 重组载体菌落 ＰＣＲ 产物电泳图ꎮ
Ａ. Ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｆｏｒ Ｎꎬ ＮＳｓꎬ ＮＳｍ ｆｒａｇｍｅｎｔｓꎻ Ｂ. Ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｃｏｌｏｎｙ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｆｏｒ ｐＴＲＶ２￣Ｎꎬ ＮＳｓꎬ
ＮＳｍ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ＧＶ３１０１ꎻ Ｃ. Ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｆｏｒ ｐＴＲＶ２￣Ｎꎬ ＮＳｓꎬ ＮＳｍ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｌｏｎｙ.
图 １ ｐＴＲＶ２/ Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 重组载体及农杆菌菌落的琼脂糖凝胶电泳检测结果
Ｆｉｇ. １ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐＴＲＶ２/ Ｎꎬ ＮＳｓꎬ ＮＳｍ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｖｅｃｔｏｒ ａｎｄ ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｏｌｏｎｙ ｂｙ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ

２ ３ ４ ５
梯度为 ０.９４×１０ 、０.９４×１０ 、０.９４×１０ 、０.９４×１０ 、
０.９４ × １０ 、０. ９４ × １０ 、０. ９４ × １０ ꎬＮＳｓ/ ｐＭＤ１９￣Ｔ 和
８
７
６
２
ＮＳｍ / ｐＭＤ１９￣Ｔ 的拷贝数梯度均为 １.１ × １０ 、１.１ ×
３ ４ ５ ６ ７
１０ 、１.１ × １０ 、１. １ × １０ 、１. １ × １０ 、１. １ × １０ 、１. １ ×
１０ ꎮ 实时荧光定量 ＰＣＲ 检测后ꎬ以拷贝数的对数
８
作为横坐标ꎬＣＴ 值作为纵坐标ꎬ分别绘制 ＣＹＲＳＶ
Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 的标准曲线(图 ３)ꎮ Ｎ 基因标准曲线
方程为 ｙ ＝ －３.２７９ ９ｘ＋３７.１５(Ｒ ＝ ０.９９７ ５)ꎻＮＳｓ 基
２
２
因标准曲 线 方 程 为 ｙ ＝ － ３. ２３５ １ｘ ＋ ３８. ３３２ ( Ｒ ＝
０.９９８ ４)ꎻＮＳｍ 基因标准曲线方程为 ｙ ＝ －３.１４０ ３ｘ＋
３５.４０９(Ｒ ＝ ０.９９８ ０)ꎮ Ｒ 系数越接近 １ꎬ表明实验
２
２
操作精准度越高ꎬ在 Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 基因的标准曲线
中ꎬＣＴ 值与标准质粒浓度之间呈现出良好的线性
关系ꎬ可用于后续拷贝数分析ꎮ
Ａ. Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 标准片段的 ＰＣＲ 产物电泳图ꎻ Ｂ. Ｎ、ＮＳｓ 和 ２. ３ 不 同 接 种 方 法 下ꎬ ｐＴＲＶ２￣Ｎ、 ｐＴＲＶ２￣ＮＳｓ、
ＮＳｍ/ Ｔ 载体菌落 ＰＣＲ 产物电泳图ꎮ
Ａ. Ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｆｏｒ Ｎꎬ ＮＳｓꎬ ＮＳｍ ｐＴＲＶ２￣ＮＳｍ 的 ＶＩＧＳ 体系在本氏烟中的沉默效率
ｓｔａｎｄａｒｄ ｆｒａｇｍｅｎｔｓꎻ Ｂ. Ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ
检测ｐＴＲＶ２￣ＰＤＳ 作为 ＶＩＧＳ 体系的指示对照ꎬＰＤＳ￣
ｆｏｒ Ｎꎬ ＮＳｓ ａｎｄ ＮＳｍ/ Ｔ ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｌｏｎｙ.
ＶＩＧＳ 载体注射烟草后 １２ ｄꎬ烟草叶片出现白化症
图 ２ Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 片段及其 Ｔ 载体菌落的
ＰＣＲ 产物琼脂糖凝胶电泳结果 状ꎬｐＴＲＶ２ 空载体植株则没有出现任何表型变化
(图 ４)ꎬ这表明实验所用的 ＶＩＧＳ 体系和侵染方法
Ｆｉｇ. ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｎꎬ ＮＳｓꎬ ＮＳｍ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ
ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｔ ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｂｙ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ 在本氏烟中成功发挥作用ꎮ