Page 76 - 《广西植物》2026年第5期
P. 76
８ ０ ８ 广 西 植 物 ４６ 卷
Ａ、Ｂ、Ｃ 分别表示 Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 基因的标准曲线ꎮ
Ａꎬ Ｂꎬ Ｃ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅｓ ｏｆ Ｎꎬ ＮＳｓꎬ ＮＳｍ ｇｅｎｅｓꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
图 ３ ＣＹＲＳＶ Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 基因的绝对实时荧光定量 ＰＣＲ 标准曲线
Ｆｉｇ. ３ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅｓ ｏｆ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｑＲＴ￣ＰＣＲ ｆｏｒ ＣＹＲＳＶ Ｎꎬ ＮＳｓ ａｎｄ ＮＳｍ ｇｅｎｅｓ
的模式 １ 以及 ＮＳｍ 和 ＮＳｓ 的模式 ５ 差异不显著以
外ꎬ其余均显著降低(图 ５)ꎮ 其中ꎬ３ 种基因的模式
３ 沉默效率最高ꎬ分别为 ８１.５７％、７６.５２％和８８.１９％ꎮ
这表明 ＶＩＧＳ 体系注射 ２ ｄ 后再接种 ＣＹＲＳＶꎬ接种
１０ ｄ 后 ＣＹＲＳＶ 对应基因的沉默效率最高ꎮ
２.４ ｐＴＲＶ２￣Ｎ、ｐＴＲＶ２￣ＮＳｓ、ｐＴＲＶ２￣ＮＳｍ 的 ＶＩＧＳ
体系在本氏烟和辣椒中的沉默验证
根据以上不同接种模式下 ｐＴＲＶ２￣Ｎ、ｐＴＲＶ２￣
ＮＳｓ、ｐＴＲＶ２￣ＮＳｍ 的 ＶＩＧＳ 体系在本氏烟中的沉默
效率ꎬ优先选择先注射 ＶＩＧＳ 体系 ２ ｄ 后 再 接 种
ＣＹＲＳＶ 的方法在本氏烟和辣椒中进行再次验证ꎬ
图 ４ ｐＴＲＶ２￣ＰＤＳ 和 ｐＴＲＶ２ 空载体侵染后 并在 ＣＹＲＳＶ 接种后 １０ ｄ 收集叶片样本进行沉默
本氏烟叶片的光漂白症状
效率分析ꎮ 由图 ６ 可知ꎬ注射了 ｐＴＲＶ２ 空载体并
Ｆｉｇ. ４ Ｐｈｏｔｏｂｌｅａｃｈｉｎｇ ｏｆ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ ａｆｔｅｒ
摩擦接种 ＣＹＲＳＶ 的本氏烟出现明显心叶卷曲和
ｐＴＲＶ２￣ＰＤＳ ａｎｄ ｐＴＲＶ２ ｅｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
坏死 症 状ꎬ 而 分 别 注 射 了 ｐＴＲＶ２￣Ｎ、 ｐＴＲＶ２￣ＮＳｓ、
ｐＴＲＶ２￣ＮＳｍ 的 ＶＩＧＳ 侵染液再接种 ＣＹＲＳＶ 的本氏
为了探索不同接种模式下 ｐＴＲＶ２￣Ｎ、ｐＴＲＶ２￣ 烟只 出 现 了 心 叶 卷 曲 并 无 坏 死 症 状 且 注 射 了
ＮＳｓ、ｐＴＲＶ２￣ＮＳｍ ＶＩＧＳ 体系的沉默效率ꎬ我们在本 ｐＴＲＶ２￣Ｎ 的心叶卷曲程度最小ꎻ注射了 ｐＴＲＶ２ 空
氏烟中设置了 ５ 种接种模式:模式 １ 为 ＣＹＲＳＶ 接 载体并摩擦接种 ＣＹＲＳＶ 的辣椒叶片出现明显的
种 ２ ｄ 后注射 ＶＩＧＳ 体系( ＣＹＲＳＶ ２ ｄ＋ｐＴＲＶ２￣Ｎ / 黄化环斑症状ꎬ而分 别 注 射 了 ｐＴＲＶ２￣Ｎ、ｐＴＲＶ２￣
ＮＳｓ/ ＮＳｍ １０ ｄ)ꎻ模式 ２ 为 ＣＹＲＳＶ 接种后马上注 ＮＳｓ、ｐＴＲＶ２￣ＮＳｍ ＶＩＧＳ 的辣椒叶片症状则明显减
射 ＶＩＧＳ 体 系ꎬ １０ ｄ 后 取 样 ( ＣＹＲＳＶ ＋ ｐＴＲＶ２￣Ｎ / 轻ꎮ 这表明本文建立的 Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ ＶＩＧＳ 体系成
ＮＳｓ/ ＮＳｍ １０ ｄ)ꎻ模式 ３ 为 ＶＩＧＳ 体系注射 ２ ｄ 后接 功抑制了 ＣＹＲＳＶ 的侵染ꎮ
种 ＣＹＲＳＶꎬ１０ ｄ 后取样( ｐＴＲＶ２￣Ｎ / ＮＳｓ/ ＮＳｍ ２ ｄ＋ 为 进 一 步 验 证 重 组 病 毒 载 体 ｐＴＲＶ２￣Ｎ、
ＣＹＲＳＶ １０ ｄ)ꎻ模式 ４ 为 ＶＩＧＳ 体系注射 ５ ｄ 后接 ｐＴＲＶ２￣ＮＳｓ、ｐＴＲＶ２￣ＮＳｍ 在本氏烟中对 ＣＹＲＳＶ 的
种 ＣＹＲＳＶꎬ１０ ｄ 后取样( ｐＴＲＶ２￣Ｎ / ＮＳｓ/ ＮＳｍ ５ ｄ＋ 沉默效果ꎬ我们采用实时荧光定量 ＰＣＲ 技术检测
ＣＹＲＳＶ １０ ｄ)ꎻ模式 ５ 为 ＶＩＧＳ 体系注射 ８ ｄ 后接 对应本氏烟和辣椒中 ＣＹＲＳＶ 的 Ｎ、ＮＳｓ、ＮＳｍ 基因
种 ＣＹＲＳＶꎬ１０ ｄ 后取样( ｐＴＲＶ２￣Ｎ / ＮＳｓ/ ＮＳｍ ８ ｄ＋ 的拷 贝 数ꎮ 结 果 如 图 ７ 所 示ꎬ ｐＴＲＶ１ / ｐＴＲＶ２￣Ｎ、
ＣＹＲＳＶ １０ ｄ)ꎮ 绝对定量检测对应基因的拷贝数ꎬ ｐＴＲＶ１ / ｐＴＲＶ２￣ＮＳｓ、ｐＴＲＶ１ / ｐＴＲＶ２￣ＮＳｍ 农杆菌注
与相应的对照组(ｐＴＲＶ２)相比ꎬ５ 种接种模式下对 射本氏烟和辣椒后ꎬ对应基因的拷贝数均显著下
应的 ３ 种基因拷贝数均为明显降低ꎬ除 Ｎ 和 ＮＳｍ 调ꎮ Ｎ 基因在本氏烟和辣椒中的沉默效率分别为
