Page 84 - 《广西植物》2026年第5期

８ １ ６ 广 西 植 物 ４６ 卷
碱解氮 ４５ ｍｇｋｇ ꎬ速效磷 １８ ｍｇｋｇ ꎬ速效钾 １.４ ＡＭＦ 接种效率测定
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￣１ ＡＭＦ 定殖率测定采用酸性品红染色法ꎬ取各
１２０ ｍｇｋｇ ꎮ
１.２ 方法 处理玉米植株的新鲜根段 １ ~ ２ ｃｍꎬ经 ＫＯＨ 透明、
实验在辽宁省丹东市辽东学院作物育种试验 ＨＣｌ 酸化后染色ꎬ在光学显微镜下观察ꎬ计算定殖
基地人工气候室中进行ꎬ环境条件设置如下:白天 率(定殖率 ＝ 定殖根段数 / 总根段数×１００％)ꎻ土壤
温度( ２８ ± ２)℃ ꎬ夜 间 温 度 ( ２２ ± ２)℃ ꎬ 光 照 强 度 ＡＭＦ 孢子密度测定采用湿筛倾注－蔗糖离心法ꎬ称
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４００ μｍｏｌｍ ｓ ꎬ光照时长 １４ ｈｄ ꎬ相对湿度 取 １００ ｇ 风干土样分级过滤ꎬ用 １.２ ｇｃｍ 蔗糖溶
６０％ ~ ７０％ꎮ 采用盆栽控制实验ꎬ共设置 ４ 个处理 液离心分离孢子ꎬ在体视显微镜下计数ꎮ
组(６ 次生物学重复):对照组( ＣＫ)、ＡＭＦ 组、１５０ １.５ 抗氧化系统指标测定
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￣１ ￣１ 取新鲜叶片 ０.５ ｇꎬ加入预冷的 ５０ ｍｍｏｌＬ 磷
ｍｍｏｌ Ｌ ＮａＣｌ 胁 迫 组、 ＡＭＦ ＋ １５０ ｍｍｏｌ Ｌ
ＮａＣｌ 胁迫组(ＮａＣｌ＋ＡＭＦ)ꎮ 酸缓冲液( ｐＨ ７.８)ꎬ在冰浴条件下研磨成匀浆ꎬ４
每盆装土 ２ ｋｇꎬ将 ＡＭＦ 接种剂按每盆 ５０ ｇ 的 ℃、１２ ０００ ｒｍｉｎ 离心 ２０ ｍｉｎꎬ取上清液用于抗氧
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量均匀混入土壤ꎬ对照组加入等量灭菌后的 ＡＭＦ 化酶活性和丙二醛(ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅꎬＭＤＡ) 含量测
接种剂ꎮ 每盆播种 ３ 粒ꎬ待玉米幼苗长至三叶一 定ꎮ 超氧化物歧化酶(ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅꎬＳＯＤ)活
心期时(播种后 １５ ｄ)ꎬ间苗保留 １ 株长势一致的 性采用氮蓝四唑(ｎｉｔｒｏｂｌｕｅ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍꎬＮＢＴ) 光化还
幼苗后开始处理ꎬ通过浇灌 １５０ ｍｍｏｌＬ ＮａＣｌ 溶 原法测定ꎻ过氧化物酶(ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅꎬＰＯＤ) 活性采用
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液(以 ０.５ 倍 Ｈｏａｇｌａｎｄ 营养液配制) 进行ꎬ每周浇 愈创木酚法测定ꎻ过氧化氢酶( ｃａｔａｌａｓｅꎬＣＡＴ) 活性
灌 ２ 次(以基质表面开始出现干燥为准)ꎬ每次每 采用紫外吸收法测定ꎻＭＤＡ 含量采用硫代巴比妥酸
盆浇灌 ３００ ｍＬ(基质渗滤液约 １５％)ꎬ对照组浇灌 (ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃ ａｃｉｄꎬＴＢＡ)法测定ꎮ
等量 ０.５ 倍 Ｈｏａｇｌａｎｄ 营养液ꎬ共处理 ４ 周ꎬ直至玉 １.６ 光合作用参数测定
米拔节期( 播种后 ４５ ｄ) 结束ꎮ 试验期间使用 ＥＣ 使用便携式光合仪( ＬＩ￣６４００ꎬＬＩ￣ＣＯＲꎬ美国)
测定仪( Ｂ１７３ꎬ霍里巴公司ꎬ 日本) 测定基质滤出 于上 午 ９: ００—１１: ００ 测 定 叶 片 的 净 光 合 速 率
液电导率( ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙꎬ ＥＣꎬｄＳｍ ) 以 (Ｐ )、气孔导度(Ｇ )、胞间 ＣＯ 浓度(Ｃ )ꎮ 测定时
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ｎ
ｓ
监测盐胁迫水平的稳定性(图 １)ꎮ 选取植株顶部完全展开叶ꎬ设定光照强度为 １ ２００
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μｍｏｌｍ ｓ ꎬＣＯ 浓度为 ４００ μｍｏｌｍｏｌ ꎬ叶室
２
温度为 ２８ ℃ ꎮ
１.７ 离子稳态指标测定
将烘干后的植株叶片样品研磨成细粉ꎬ称取 ０.２
ｇ 样品置于消煮管中ꎬ加入 ５ ｍＬ 浓 ＨＮＯ 和 １ ｍＬ
３
Ｈ Ｏ ꎬ在电热板上进行消煮至溶液澄清透明ꎮ 消煮
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液冷却后ꎬ用去离子水定容至 ５０ ｍＬꎬ采用火焰原子
吸收分光光度计 ( ＡＡ￣６８８０ꎬ Ｓｈｉｍａｄｚｕꎬ 日本) 测定
＋ ＋ ＋ ＋
Ｎａ 和 Ｋ 浓度ꎬ并计算叶片中 Ｎａ / Ｋ 比值ꎮ
１.８ 基因表达分析
图 １ 实验期间基质滤出液电导率的变化 取新鲜叶片 ０. ２ ｇꎬ采用 ＴＲＩｚｏｌ 试 剂 提 取 总
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Ｆｉｇ. １ Ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｅａｃｈａｔｅ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ＲＮＡꎬ通过逆转录试剂盒( ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ
ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐｅｒｉｏｄ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ｇＤＮＡ ＥｒａｓｅｒꎬＴａＫａＲａꎬ日本) 合成 ｃＤＮＡꎮ
利用实时荧光定量 ＰＣＲ( ｑＲＴ￣ＰＣＲ) 检测 ＺｍＮＨＸ１
１.３ 植株生长指标测定 和 ＺｍＨＡＫ１ 基因的表达水平ꎬ以玉米 β￣ａｃｔｉｎ 基因
实验处理结束后ꎬ每个处理随机选取 ６ 株玉米 为内参基因ꎮ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 反应体系(２０ μＬ)如下:１０
ＴＭ
苗ꎬ测定株高(从基部至植株顶端的垂直高度)、地 μＬ ＳＹＢＲ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ Ⅱ(ＴａＫａＲａ)ꎬ０.８ μＬ 上、
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径(茎基部直径)ꎬ之后将植株地上部分收集ꎬ于 下游引物( １０ μｍｏｌＬ )ꎬ２ μＬ ｃＤＮＡ 模 板ꎬ６. ４
１０５ ℃ 杀青 ３０ ｍｉｎꎬ７５ ℃ 烘干至恒重ꎬ称取干重ꎮ μＬ ｄｄＨ Ｏꎮ 反应程序如下:９５ ℃ 预变性 ３０ ｓꎻ９５
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