Page 121 - 《广西植物》2020年第9期

１ ３ ３ ６ 广 西 植 物 ４０ 卷
＋
间(９６ ｈ) 的基础上ꎬ测定了 ９ 种金属离子( Ｎａ 、
表 １ ２ 株产壳聚糖酶菌株及其酶活力
Ｋ 、Ａｇ 、Ｃａ 、Ｍｎ 、Ｚｎ 、Ｃｄ 、Ｂａ 和 Ｆｅ ꎬ浓度均
＋
２＋
＋
３＋
２＋
２＋
２＋
２＋
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｗｏ ｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅ￣ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ
为 １００ ｍｍｏｌＬ )对酶活力的影响ꎬ结果如表 ３ 所
￣１
ｔｈｅｉｒ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
示ꎮ Ｍｎ 和 Ｃａ 对 Ｓｔｄｉｆ９￣４ 所产的壳聚糖酶活力
２＋
２＋
透明圈与菌落直径比值 发酵液酶活力 ２＋ ＋
内生真菌 Ｒａｔｉｏ ｏｆ ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔ Ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ 具有明 显 的 激 活 作 用ꎻ Ｂａ 和 重 金 属 离 子 Ａｇ 、
ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
２＋
３＋
２＋
Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｃｉｒｃｌｅ ｔｏ ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ Ｚｎ 、Ｃｄ 、Ｆｅ 对壳聚糖酶活力都有不同程度的抑
ｂｒｏｔｈ
ｆｕｎｇｉ
￣１
(ＵｍＬ ) ＋ ＋ ＋
３ ｄ ５ ｄ １０ ｄ (３ ｄ) 制作用ꎬ其中 Ａｇ 的抑制作用最为显著ꎻＫ 和 Ｎａ
对壳聚糖酶活力无显著影响ꎮ
Ｓｔｄｉｆ９ １.６４Ａａ １.５９ＡＢａ １.４１Ｂｂ ０.７８０ｂ
２.６ 内生真菌 Ｓｔｄｉｆ９￣４ 产壳聚糖酶稳定性测定
Ｓｔｄｉｆ９￣４ １.７１Ａａ １.６５Ｂａ １.５３Ｃａ ０.９６８ａ
将内生真菌 Ｓｔｄｉｆ９￣４ 转接继代培养五代ꎬ分别
注: 大写字母为每行数据结果差异性比较ꎬ小写字母为每列
测定相应发酵液壳聚糖酶活性ꎬ发现酶活性无显
数据结果差异性比较ꎮ 不同字母代表差异显著( Ｐ < ０. ０５)ꎮ
下同ꎮ 著差异(图 ４)ꎮ 图 ４ 结果表明该菌株产酶活力比
Ｎｏｔｅ: Ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｄｅｎｏｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｅａｃｈ ｒｏｗ ｏｆ ｄａｔａꎬ ａｎｄ
较稳定ꎮ
ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｄｅｎｏｔｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｅａｃｈ ｃｏｌｕｍｎ ｏｆ ｄａｔａ. Ｄｉｆｆｅｒ￣
ｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｍｅａｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ (Ｐ<０.０５). Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
３ 讨论与结论
通过平板初筛和液体复筛ꎬ从 １２２ 株内生真
菌中筛选到了 ２ 株产壳聚糖酶的菌株ꎮ 采用形态
学结合分子生物学的方法对其中产酶活力较高的
菌株进行鉴定ꎬ将其归为青霉属ꎮ 目前ꎬ人们从植
物内生真菌中筛选产壳聚糖酶菌株的研究较少ꎬ
主要还是从土壤、海洋等环境中进行筛选( Ｚｉｔｏｕｎｉ
图 １ ２ 株内生真菌产壳聚糖酶活力曲线
ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１７ꎻＣｈｉｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１８ꎻＦｕｋａｍｉｚｏ ＆ Ｓｈｉｎａｙａꎬ
Ｆｉｇ. １ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅ￣ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ
２０１９)ꎬ而 且 发 现 的 产 酶 菌 株 大 多 数 为 青 霉 属
ｂｙ ｔｗｏ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ
(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ) 或曲霉 属 ( Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ) ( 曾 嘉ꎬ２００２ꎻ
２.４ 内生真菌 Ｓｔｄｉｆ９￣４ 的鉴定 郑连 英 和 隋 斯 光ꎬ ２００４ꎻ 卓 少 玲ꎬ ２０１２ꎻ 单 秋 实ꎬ
采用形态学和分子生物 学 方 法 对 内 生 真 菌 ２０１５)ꎮ 本研究筛选到的产壳聚糖酶的内生真菌
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ. Ｓｔｄｉｆ９￣４ 也为青霉属菌株ꎬ分离自我
Ｓｔｄｉｆ９￣４ 进行鉴定ꎮ 参考« 中国真菌志» ( 孔华忠ꎬ
２００７)ꎬ根据显微形态图( 图 ２)ꎬ其分生孢子梗上 国重要药用植物血散薯块根ꎮ 由于不同来源的壳
只有一个分枝点ꎬ此分枝点上为单轮生的帚状枝ꎻ 聚糖酶 的 酶 学 性 质 往 往 有 较 大 差 异ꎬ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
分生孢子梗和分子孢子表面平滑ꎻ分生孢子球形 ｓｐ. Ｓｔｄｉｆ９￣４ 来源于药用植物ꎬ其特殊的生境是否会
或近球形ꎮ 结合 Ｓｔｄｉｆ９￣４ 在不同培养基上的菌落 使得其壳聚糖酶的结构、功能有别于其他环境菌
直径(表 ２)和菌落形态( 图 ３) 初步确定内生真菌 株ꎬ其对壳聚糖的作用类型是内切型还是外切型

Ｓｔｄｉｆ９￣４ 为青霉属( Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ) 菌株ꎮ 结合分子生 等ꎬ后期还需进一步研究ꎮ 此外ꎬ不同培养基及不
物学鉴定ꎬ将其测序结果与 ＧｅｎＢａｎｋ 中的序列进 同营养成分配比对不同菌株的生长及酶的诱导往
行比对ꎬ发现其 ＩＴＳ 序列与 Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ.的相似性 往有不同程度的影响ꎬ在进行初筛的过程中ꎬ由于
高达 １００％ꎮ 因 此ꎬ 将 Ｓｔｄｉｆ９￣４ 鉴 定 为 Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ 只用了一种选择培养基ꎬ这很可能会导致漏筛一
ｓｐ. Ｓｔｄｉｆ９￣４(ＧｅｎＢａｎｋ 登录号为 ＭＮ２３８８４９)ꎮ 部分产壳聚糖酶的菌株ꎮ 因此ꎬ后期可尝试多种
２.５ 金属离子对内生真菌 Ｓｔｄｉｆ９￣４ 壳聚糖酶活力影响 含壳聚糖的培养基进行筛选ꎮ
在确定 Ｓｔｄｉｆ９￣４ 壳聚糖酶活力最高的发酵时 发酵时间对壳聚糖酶活力有显著影响ꎮ Ｐｅｎｉ￣