Page 191 - 《广西植物》2023年第11期
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１１ 期 张宝等: 蛇含委陵菜的化学成分及抗炎活性研究 ２ １ ５ １
Ｆｒ.Ｃ 经正相硅胶柱层析( 硅胶:２００ ~ ３００ 目ꎮ
洗脱剂:石油醚－乙酸乙酯 ２０ ∶ １ ~ １ ∶ １ꎬＶ / Ｖ)梯度
洗脱得到 Ｆｒ. Ｃ１ ~ Ｆｒ. Ｃ４ꎮ Ｆｒ. Ｃ２ ~ Ｆｒ. Ｃ４ 经反复正
相硅胶、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ( 二 氯 甲 烷 － 甲 醇 １ ∶ １ꎬ
Ｖ / Ｖ)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ( 二 氯 甲 烷 － 甲 醇 １ ∶ １ꎬ
Ｖ / Ｖ)、ＯＤＳ(甲醇－水 ８０ ∶ ２０ ~ ９５ ∶ ５ꎬＶ / Ｖ) 柱层析
纯化ꎬ最终得化合物 ２(１１.８ ｍｇ)、３(１３.２ ｍｇ)、４
(２.９ ｍｇ)、５(１１.３ ｍｇ)、８(６.３ ｍｇ)、１１(５.３ ｍｇ)ꎮ
Ｆｒ. Ｄ 经 ＭＣＩ 柱 层 析ꎬ 乙 醇 － 水 ( ３０ ∶ ７０、
４０ ∶ ６０、５０ ∶ ５０、６０ ∶ ４０、７０ ∶ ３０、８０ ∶ ２０、９０ ∶ １０、
１００ ∶ ０ꎬＶ / Ｖ)梯度洗脱得到 Ｆｒ.Ｄ１ ~ Ｆｒ.Ｄ８ꎮ Ｆｒ.Ｄ２
减压浓缩并放至室温后析出少量难溶性粉末状沉
淀ꎬ过滤沉淀备用ꎬ滤液经正相硅胶柱层析( 硅胶:
３００ ~ ４００ 目ꎮ 洗 脱 剂: 二 氯 甲 烷 － 甲 醇 ２０ ∶ １ꎬ
Ｖ / Ｖ)得 ６ 个组分ꎬ其中 Ｆｒ. Ｄ２.３ ~ Ｆｒ. Ｄ２.４ 经反复
Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０( 甲醇)、ＯＤＳ( 甲醇 － 水 ３０ ∶ ７０ ~
６０ ∶ ４０ꎬＶ / Ｖ)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ( 甲醇) 纯化ꎬ得
化合物 ７(７.２ ｍｇ)、１２(１２.３ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.Ｄ４ 经正相硅
胶柱层析(硅胶:３００ ~ ４００ 目ꎮ 洗脱剂:二氯甲烷－
甲醇 １０ ∶ １ ~ ２ ∶ １ꎬＶ / Ｖ) 得 ９ 个 组 分 Ｆｒ. Ｄ４. １ ~
Ｆｒ.Ｄ４.９ꎬ其中 Ｆｒ.Ｄ４.５ 依次经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０( 甲
醇)、半制备 ＨＰＬＣ (２２％甲醇－水溶液)洗脱ꎬ得化
图 １ 蛇含委陵菜标本 合物 １４(３.８ ｍｇ)、１５(４.１ ｍｇ)ꎮ
Ｆｉｇ. １ Ｓａｍｐｌｅ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ｋｌｅｉｎｉａｎａ
Ｆｒ.Ｆ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 凝胶柱色谱(甲醇) 得
到 Ｆｒ.Ｆ１~ Ｆｒ.Ｆ６ꎬ其中 Ｆｒ.Ｆ２ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 凝胶
醇－水( ６０ ∶ ４０ꎬＶ / Ｖ) 回 流 提 取 ３ 次 ( ２、１. ５、１. ５ 柱色谱(甲醇)洗脱得 Ｆｒ.Ｆ２.１ ~ Ｆｒ.Ｆ２.２ꎮ Ｆｒ.Ｆ２.２ 经
ｈ)ꎬ提取液合并后减压浓缩至浸膏(２.１ ｋｇ)ꎮ 浸膏 反复正相硅胶(硅胶:３００ ~ ４００ 目ꎮ 洗脱剂:二氯甲
加入适量蒸馏水ꎬ超声振荡分散ꎬ经 Ｄ￣１０１ 大孔树 烷－甲醇 １０ ∶ １ ~ ２ ∶ １ꎬＶ/ Ｖ)、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０( 甲
脂ꎬ用乙醇 － 水( ０ ∶ １００ꎬ５０ ∶ ５０ꎬ９５ ∶ ５ꎬＶ / Ｖ) 洗 醇)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ(甲醇) 柱层析纯化ꎬ得化合
脱ꎬ收集各部分洗脱液ꎬ减压浓缩ꎮ 其中ꎬ５０％ 乙 物 ９(１９.０ ｍｇ)、１０(９５.９ ｍｇ)、１３(５.５ ｍｇ)ꎮ
醇部位(４２８ ｇ)经正相硅胶柱层析(硅胶:２００ ~ ３００ ２.２ 抗炎活性测试
目ꎮ 洗脱剂:氯仿－甲醇 ５０ ∶ １ ~ １ ∶ １ꎬＶ / Ｖ) 洗脱ꎬ 安全浓度考察:采用 ＣＣＫ￣８ 法考察各化合物
得到 ９ 个组分(Ｆｒ.Ａ~ Ｆｒ.Ｉ)ꎮ 的安全浓度ꎬ分别给予不同浓度的化合物溶液作
Ｆｒ.Ｂ 减压浓缩并放至室温后析出少量难溶性 用于 ＲＡＷ ２６４.７ 细胞ꎬ２４ ｈ 后检测细胞活力ꎬ通过
粉末状沉淀ꎬ过滤沉淀备用ꎬ滤液经正相硅胶柱层 细胞存活率确定化合物的安全浓度范围ꎮ
析( 硅胶:３００ ~ ４００ 目ꎮ 洗脱剂:二氯甲烷 － 甲醇 取对数生长期 ＲＡＷ ２６４.７ 细胞( 调整细胞浓
１００ ∶ １ꎬＶ / Ｖ)得到 Ｆｒ.Ｂ１ ~ Ｆｒ.Ｂ３ꎮ Ｆｒ.Ｂ３ 经正相硅 度为每毫升 ３×１０ 个)接种于 ９６ 孔板中ꎬ每孔 １００
５
胶柱层析(硅胶:３００ ~ ４００ 目ꎮ 洗脱剂:石油醚－丙 μＬꎬ实验设置空白对照组、模型组、地塞米松组( 阳
酮 ２０ ∶ １ꎬＶ / Ｖ) 得到 Ｆｒ.Ｂ３.１ ~ Ｆｒ.３.６ꎮ Ｆｒ.Ｂ３.６ 依 性药组)和药物组(待测化合物)ꎬ每组设置 ３ 个平
次经过 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ( 二 氯 甲 烷 － 甲 醇 １ ∶ １ꎬ 行孔ꎬ 于 培 养 箱 中 培 养 ２４ ｈꎮ 细 胞 同 时 用 ０. ２５
Ｖ / Ｖ)、正相硅胶( 硅胶:３００ ~ ４００ 目ꎮ 洗脱剂:二 μｇｍＬ ＬＰＳ 和不同浓度梯度的待测化合物刺激
￣１
氯甲烷－甲醇 １００ ∶ １ꎬＶ / Ｖ) 柱层析纯化ꎬ得化合物 ２４ ｈ 后ꎬ收集上清液ꎬ按照试剂盒说明书检测方法
１(１０.４ ｍｇ)、６(１５.１ ｍｇ)ꎮ 测定 ＮＯ 的含量ꎬ计算 ＮＯ 释放抑制率ꎮ
