Page 134 - 《广西植物》2024年第2期
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３ ３ ６ 广 西 植 物 ４４ 卷
ＡＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧ￣３′)(Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９０) 两 对 白色ꎬ边缘整齐ꎬ绒毛状ꎬ菌落环纹不明显ꎻ分生孢
引物分别扩增所分离菌株的 ＬＳＵ 和 ＩＴＳ 保守区 子长约 １０.７７ μｍꎬ宽约 ５.９２ μｍꎬ小型分生孢子为
段ꎬ扩增后的样品送测序ꎮ 测序结果用 ＢｉｏＥｄｉｔ 编 主ꎬ呈卵圆形ꎬ大型分生孢子稍弯ꎬ有一个分隔或
辑后ꎬ在 ＮＣＢＩ 数据库中进行 Ｂｌａｓｔｎꎬ下载高同源性 无分隔ꎬ菌丝透明ꎬ有隔ꎬ从菌丝中部产孢ꎮ 菌株
序列和相关数据ꎬ以 Ｒｕｓｓｕｌａ ｖｅｓｃａ 菌株作为系统发 Ｍ１２、Ｍ１９ 和 Ｍ２２ 的菌落正面呈白色并带有淡黄
育树的外群ꎬＭＥＧＡ￣Ｘ( Ｃｌｕｓｔａｌ ＷꎬＮｅｉｇｈｂｏｒ￣Ｊｏｉｎｉｎｇꎬ 色ꎬ菌落中心高于边缘ꎬ有或无环纹ꎻ分生孢子长
ｂｏｏｔｓｔｒａｐ ＝ １ ０００)构建系统发育树ꎮ 约 ４.６８ μｍꎬ宽约 ３.１６ μｍꎬ椭圆形ꎬ表面光滑ꎬ无
１.２.４ 致病性鉴定 (１) 柯赫氏法则检测ꎮ 将鉴定 隔透明ꎻ菌丝白色絮状ꎬ菌丝透明有隔ꎬ顶端呈帚
出的 ７ 种真菌培养平板ꎬ用打孔器打直径为 ０.５ 状分枝ꎮ 菌株 Ｍ１７ 和 Ｍ２１ 生长迅速ꎬ分生孢子长
ｃｍ 的菌饼ꎬ菌丝面接在健康魔芋块茎片上ꎬ以无 约 ５.５４ μｍꎬ宽约 ４.０１ μｍꎬ小型分生孢子为椭圆
菌琼脂饼为空白对照置于 ２８ ℃ 温箱保湿培养ꎬ观 形ꎬ大型分生孢子为球形ꎻ菌丝分枝少ꎬ透明状ꎬ菌
察是否出现软腐病特征ꎮ 患病组织块再次分离真 丝的顶端有球形孢子囊产孢ꎮ 菌株 Ｍ１８、Ｍ２０ 和
菌ꎬ鉴定ꎮ (２)病原细菌和真菌接种试验ꎮ 处理 １ Ｍ２３ 生长迅速ꎬ菌落正面靠里颜色呈深灰色ꎬ边缘
(Ｆ＋Ｐ):将轮纹镰刀 菌 的 菌 饼 ( 直 径 ０. ５ ｃｍ) 和 呈白色ꎬ反面呈白色ꎬ质地疏松ꎬ边缘不整齐ꎬ无菌
ＯＤ 为 ０.１ 的胡萝卜果胶杆菌菌液 ２０ μＬ 接种到 落环纹ꎬ菌落表面有黑色ꎻ分生孢子为圆形或椭圆
６００
健康魔芋块茎上ꎮ 处理 ２( Ｆ):只接种轮纹镰刀菌 形ꎬ分生孢子长约 ４.３５ μｍꎬ宽约 ３.６１ μｍꎬ孢子壁
菌饼和 ２０ μＬ 无菌水到健康魔芋块茎上ꎮ 处理 ３ 厚ꎻ有营养菌丝ꎬ大部分无隔ꎬ会产生黄色色素ꎬ顶
(Ｐ):只接种 ＯＤ 为 ０.１ 的胡萝卜果胶杆菌菌液 端膨大形成孢子囊进行产孢ꎮ 菌株 Ｍ２４ 生长迅
６００
２０ μＬ 和无菌琼脂饼到健康魔芋块茎上ꎮ 处理 ４ 速ꎬ菌落正面呈灰白色发青ꎬ反面呈灰白色ꎬ边缘
(ＣＫ):接种无菌水和无菌琼脂饼ꎮ 将 ４ 种处理置 不整齐ꎬ 绒 毛 状ꎬ 菌 落 环 纹 明 显ꎻ 分 生 孢 子 长 约
于 ２８ ℃ 保湿培养 ３ ｄꎬ用硅胶勺将软腐组织挖出 ３.１５ μｍꎬ宽约 ２.６７ μｍꎬ分生孢子为球形或卵圆
称重ꎬ获得的数据用 ＳＰＳＳ(ＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ １９) 形ꎬ孢子壁厚ꎻ菌丝有隔ꎬ中部产孢或顶端的产孢
进行单因素方差分析( ｏｎｅ￣ｗａｙ ＡＮＯＶＡ)ꎬ用 Ｔｕｋｅｙ 结构产孢(图 ２ꎬ图 ３)ꎮ
方法检验ꎬ用 Ｅｘｃｅｌ 制图ꎮ ２.２ 球茎软腐真菌分子生物学鉴定
由表 ２ 和图 ４ 可知ꎬ除 Ｍ５ 菌株的 ＩＴＳ 序列与
２ 结果与分析 轮纹镰刀菌模式菌株的相似度为 ９６. ８９％ 以 外ꎬ
Ｍ１、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ６、Ｍ８、Ｍ９、Ｍ１１、Ｍ１４ 和 Ｍ２５ 的 ＩＴＳ
２.１ 球茎软腐真菌分离纯化 和 ＬＳＵ 序列与轮纹镰刀菌模式菌株的相似度均大
从发病花魔芋球茎组织中分离、纯化出 ２２ 株 于 ９７.７７％( 表 １)ꎮ 系统发育分析结果表明ꎬＭ１、
真菌ꎬ编 号 为 Ｍ１￣Ｍ２５ ( Ｍ２、 Ｍ１３ 和 Ｍ１６ 纯 化 失 Ｍ３、Ｍ４、Ｍ６、Ｍ８、Ｍ９、Ｍ１１、Ｍ１４ 和 Ｍ２５ 与轮纹镰
败)ꎬ在 ＰＤＡ 培养基 ２５ ℃ 培养 ５ ｄ 后观察菌落形 刀菌的进化地位接近ꎬ并且系统发育分析显示在
态、微观结构特征ꎮ 其中ꎬ菌株 Ｍ１、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、 同一进化分支的支持度为 ７２％ꎬ可认为它们是同
Ｍ６、Ｍ８、Ｍ９、Ｍ１１、Ｍ１４ 和 Ｍ２５ 生长迅速ꎬ菌落正 一物种ꎮ Ｍ１０ 和 Ｍ１５ 与 Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｍｂｒｏｓｉｕｍ 的进
反面都呈砖红偏紫色或淡紫色ꎬ边缘齐整ꎬ绒毛 化 地 位 接 近ꎬ 支 持 度 为 ８０％ 且 与 模 式 株 Ｆ.
状ꎬ菌落表面有白色棉絮状ꎬ环纹不明显ꎻ分生孢 ａｍｂｒｏｓｉｕｍ 的 ＩＴＳ 和 ＬＳＵ 两 段 序 列 相 似 性 在
子长约 ７.５１ μｍꎬ宽约 ３.５１ μｍꎬ以小型分生孢子为 ９７.８２％以上ꎬ可认为它们是同一物种ꎮ Ｍ７ 与尖孢
主ꎬ呈肾形ꎬ分生大孢子稍弯、或有隔ꎻ菌丝有隔ꎬ 镰刀菌的进化地位接近ꎬ支持度为 ９９％且序列相
可产生红色色素ꎬ菌丝中部产孢ꎮ 菌株 Ｍ７ 在 ＰＤＡ 似度为 ９８.９５％ꎬ可它们认为是同一物种ꎮ Ｍ１２、
生长迅速ꎬ菌落中部正、反面都呈红偏淡紫色ꎬ边 Ｍ１９ 和 Ｍ２２ 的 ＩＴＳ 和 ＬＳＵ 序列与粉红螺旋聚孢霉
缘白色不整齐ꎻ分生孢子长约 ７.６０ μｍꎬ宽约 ４.０３ (Ｃｌｏｎｏｓｔａｃｈｙｓ ｒｏｓｅａ ｆ. ｃａｔｅｎｕｌａｔａ) 模式菌株的相似
μｍꎬ小型分生孢子卵圆形ꎬ大型分生孢子镰刀形ꎬ 度大于 ９９％且支持度为 ８４％ꎬ可认为它们是同一
有隔ꎬ会产生红色色素ꎬ菌丝有隔ꎬ从菌丝中间产 物种ꎮ Ｍ１７ 的 ＩＴＳ 和 ＬＳＵ 序 列 与 拜 尼 尔 毛 霉
孢ꎮ 菌株 Ｍ１０ 和 Ｍ１５ 生长迅速ꎬ菌落正反面都呈 (Ｍｕｃｏｒ ｂａｉｎｉｅｒｉ)模式菌株的相似度分别是 ９７.２２％
