Page 163 - 《广西植物》2024年第2期

２ 期 周锦燕等: 刺五加新品种‘紫加 １ 号’多糖分离纯化及抗氧化活性分析 ３ ６ ５

ＴＭ ＴＭ 式中: Ａ 为纯水代替样品的吸光度ꎻ Ａ 为加入
色 谱 条 件: Ｄｉｏｎｅｘ ＣａｒｂｏＰａｃ ＰＡ２０ ( １５０
１ ２
ｍｍ × ３.０ ｍｍꎬ １０ μｍ) 阴离子色谱柱ꎻ进样量:５ 样品溶液的吸光度ꎻ Ａ 为邻苯三酚溶液被纯水代
３
μＬꎻ流动相 Ａ 为 ０.１ ｍｏｌＬ ＮａＯＨꎬ流动相 Ｂ 为 替的吸光度ꎮ
￣１
￣１ ￣１ (３)ＤＰＰＨ 清除能力测定:采用 ＤＰＰＨ 法对多
０.１ ｍｏｌＬ ＮａＯＨꎻ０.２ ｍｏｌＬ ＮａＡｃꎻ流速:０.５
￣１
ｍＬｍｉｎ ꎻ柱温:３０ ℃ ꎮ 糖的体外抗氧化活性进行测定ꎬ当抗氧化剂存在
１.３.６ 抗氧化活性测定 (１) ＯＨ清除能力测定: 时ꎬＤＰＰＨ 溶液由深紫色变为淡黄色ꎬ在 ５１７ ｎｍ 下
采用 水 杨 酸 法 测 定 多 糖 对 ＯＨ 清 除 能 力ꎬ 根 据 吸光度变低ꎬ吸光度的变化与接受电子数量成定
Ｆｅｎｔｏｎ 反应产生的ＯＨ与水杨酸反应ꎬ在 ５１０ ｎｍ 量关系ꎬ可对抗氧化能力进行分析ꎮ 参考王铖博
处生成有色物质ꎬ当抗氧化剂存在时有色物质相应 等(２０１９)的方法ꎬ并稍加修改ꎮ 称取多糖粉末ꎬ溶
减少ꎬ可通过吸光度的大小来判断清除ＯＨ的能 于适量纯水中ꎬ配置不同质量浓度(０.１、０.３、０.５、
力ꎮ 参考葛智超等(２０２１)的方法ꎬ稍加修改ꎮ 称取 ０.７、０.９、１.０ ｍｇｍＬ ) 的溶液ꎬ分别吸取 ２ ｍＬ 于
￣１
￣１
多糖粉末ꎬ溶于适量纯水ꎬ配制不同质量浓度 (０.１、 试管中ꎬ加入 ２ ｍＬ ２ ｍｍｏｌＬ 的 ＤＰＰＨ－无水乙醇
￣１
０.３、０.５、０.７、０.９、１.０ ｍｇｍＬ )的溶液ꎬ分别吸取 ２ 溶液ꎬ２５ ℃ 避光反应 ３０ ｍｉｎꎬ在 ５１７ ｎｍ 处测定吸
ｍＬ 溶液于试管中ꎬ加入 ９ ｍｍｏｌＬ 的硫酸亚铁溶 光度ꎮ 以 Ｖｃ 溶液为阳性对照、纯水为空白对照ꎬ
￣１
￣１
液和 ８.８ ｍｍｏｌＬ 的过氧化氢溶液(３％ꎬＶ/ Ｖ)各 １ 重复 ３ 次ꎮ
ｍＬꎬ摇匀后加入 １ ｍＬ ９ ｍｍｏｌＬ 的水杨酸－乙醇溶 对 ＤＰＰＨ 的清除活性:
￣１
液ꎬ将混合溶液于 ３７ ℃下反应 １.０ ｈꎬ在波长 ５１０ ｎｍ Ａ －Ａ ２
１
处测定吸光度ꎬ以纯水和维生素 Ｃ(Ｖｃ)溶液分别为 清除率(％)＝ (１－ Ａ ) × １００ꎮ
０
空白对照和阳性对照ꎬ重复 ３ 次ꎮ 式中: Ａ 为纯水代替样品的吸光度ꎻ Ａ 为加入
０ １
对ＯＨ的清除活性: 样品溶液的吸光度ꎻ Ａ 为 ＤＰＰＨ－无水乙醇溶液被
２
Ａ －Ａ 纯水代替的吸光度ꎮ
清除率(％)＝ (１－ ２ ３ ) × １００ꎮ
Ａ １.４ 数据处理
１
式中: Ａ 为纯水代替样品的吸光度ꎻ Ａ 为加入 使用 Ｅｘｃｅｌ ２０１０ 软件绘图以及 ＳＰＳＳ ２１.０ 软
１ ２
样品溶液的吸光度ꎻ Ａ 为不加过氧化氢溶液的吸
３ 件进行方差分析ꎮ
光度ꎮ
(２)Ｏ 清除能力测定:采用邻苯三酚自氧 ２ 结果与分析
－
２
化法测定多糖对Ｏ 的清除能力ꎬ邻苯三酚在碱
－
２
性条件下迅速自氧化生成Ｏ ꎬ加入抗氧化剂会 ２.１ 多糖提取和含量测定
－
２
抑制自氧化速度ꎬ并由绿色变为黄色ꎬ在 ３２５ ｎｍ 取‘紫加 １ 号’样品 ３００ ｇ 经热水煮提过滤、醇
下通过测吸光度的大小来判断抗氧化活性ꎮ 参考 沉、ＡＢ￣８ 大孔吸附树脂除杂脱色ꎬ浓缩干燥后得到
杨洋等(２０１８) 的方法ꎬ并稍加修改ꎮ 称取多糖粉 粗多糖粉末 ５９.１９ ｇꎬ得率为 １９.７３％ꎬ多糖含量为
末ꎬ溶于适量纯水ꎬ配制不同质量浓度(０.１、０.３、 (８.４１±０.０９)％ꎮ
￣１
０.５、０.７、０.９、１.０ ｍｇｍＬ ) 的溶液ꎬ分别吸取 ２.０ ２.２ 用 ＤＥＡＥ￣Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２ 制备柱分离多糖
￣１
ｍＬ 于试管中ꎬ加入 ４. ５ ｍＬ ５０ ｍｍｏｌＬ 的 Ｔｒｉｓ￣ 如图 １ 所示ꎬＡＳＰＳ 在 ＤＥＡＥ－纤维素柱上的线
ＨＣｌ 缓冲液(ｐＨ ８.２)ꎬ在 ２５ ℃ 条件下反应 ２０ ｍｉｎꎬ 性洗脱中主要分离出 ４ 个峰ꎬ分别对应超纯水、０.３
￣１ ￣１ ￣１ ￣１
加入 ０.５ ｍＬ ２５ ｍｍｏｌＬ 的邻苯三酚溶液ꎬ反应 ５ ｍｏｌＬ ＮａＣｌ、０.６ ｍｏｌＬ ＮａＣｌ 和 ０.８ ｍｏｌＬ
ｍｉｎ 后加入 １ ｍＬ １０ ｍｍｏｌＬ 的 ＨＣｌ 溶液终止反 ＮａＣｌ 溶液ꎮ 依次用 ４ Ｌ 上述洗脱液分离 ＡＳＰＳꎬ洗
￣１
应ꎬ于 ３２５ ｎｍ 处测定吸光度ꎮ 以 Ｖｃ 溶液作阳性 脱液经减压浓缩、透析、冷冻干燥后得到 ４ 个组
对照ꎬ１０ ｍｍｏｌ Ｌ ￣１ ＨＣｌ 溶 液 作 空 白 对 照ꎬ 重 复 分ꎬ命名为 ＡＳＰＡ￣１、ＡＳＰＡ￣２、ＡＳＰＡ￣３ 和 ＡＳＰＮꎬ得
３ 次ꎮ 率分别为 ７.４１％、４.８７％、４.０７％和 ３.２９％ꎮ
－
对Ｏ 的清除活性: ２.３ 多糖的 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ￣１００ 过滤层析结果
２
Ａ －Ａ 上述 ４ 个组分经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ￣１００ 凝胶柱纯化
清除率(％)＝ (１－ ２ ３ ) × １００ꎮ
Ａ 结果如图 ２ 所示ꎬ 经凝胶柱纯化后的多糖为单一
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