Page 161 - 《广西植物》2024年第2期

２ 期 周锦燕等: 刺五加新品种‘紫加 １ 号’多糖分离纯化及抗氧化活性分析 ３ ６ ３

Ａｂｓｔｒａｃｔ: ‘Ｚｉｊｉａ １’ ｉｓ ａ ｎｅｗ ｖａｒｉｅｔｙ ｏｆ Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ ｂｒｅｄ ｂｙ ｏｕｒ ｔｅａｍꎬ ｉｔｓ ｔｅｎｄｅｒ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒａｙ￣ｐｕｒｐｌｅ ｃｏｌｏｒ ａｎｄ ｓｗｅｅｔ ｔａｓｔｅ. Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ａｉｍ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｙ ｔｈｅ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ
ｔｅｎｄｅｒ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ‘Ｚｉｊｉａ １’ꎬ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｆｔｅｒ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅａｃｈ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ. Ｔｈｅ ｃｒｕｄｅ Ａｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ (ＡＳＰＳ) ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｅｎｄｅｒ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ‘Ｚｉｊｉａ １’ ｂｙ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ
ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎꎬ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ＤＥＡＥ￣Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２ ｉｏｎ ｃｏｌｕｍｎ ａｎｄ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ￣１００ ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ
ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ａ ｕｎｉｆｏｒｍ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ. Ｔｈｅ ｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｇｅｌ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ￣ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ￣ｍｕｌｔｉ￣ａｎｇｌｅ
ｌａｓｅｒ ｌｉｇｈｔ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｘｐｌｏｉｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｔｈｅ
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ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ. Ｔｈｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ (ＯＨ)ꎬ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｒａｄｉｃａｌ (Ｏ ) ａｎｄ １ꎬ１￣ｄｉｐｈｅｎｙｌ￣２￣ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ
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ｒａｄｉｃａｌ ( ＤＰＰＨ) ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｏｆ ｅａｃｈ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ. Ｆｏｕｒ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ＡＳＰＡ￣１￣１ꎬ ＡＳＰＡ￣２￣１ꎬ ＡＳＰＡ￣３￣１ ａｎｄ ＡＳＰＮ￣１ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ ＡＳＰＳꎬ ｗｉｔｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ８.１０ꎬ ２６.１５ꎬ ０.９１ꎬ ０.８９ ｋＤａꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｍａｉｎｌｙ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ａｒａｂｉｎｏｓｅꎬ ｒｈａｍｎｏｓｅꎬ ｇａｌａｃｔｏｓｅꎬ ｇｌｕｃｏｓｅꎬ
ｘｙｌｏｓｅꎬ ｍａｎｎｏｓｅꎬ ｒｉｂｏｓｅꎬ ｇａｌａｃｔｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ. Ｔｈｅ ＡＳＰＡ￣１￣１ꎬ ＡＳＰＡ￣２￣１ꎬ
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ＡＳＰＡ￣３￣１ ａｎｄ ＡＳＰＮ￣１ ｆｒｏｍ ‘Ｚｉｊｉａ １’ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｎ ＯＨꎬ Ｏ ａｎｄ ＤＰＰＨ ｆｒｅｅ
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ｒａｄｉｃａｌꎬ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＡＳＰＡ￣２￣１ ｔｏ ｓｃａｖｅｎｇｅ ＯＨ ａｎｄ ＤＰＰＨ ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ＡＳＰＡ￣１￣１ꎬ ＡＳＰＡ￣３￣１ ａｎｄ ＡＳＰＮ￣１ꎻ
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ＡＳＰＡ￣３￣１ ｈａｓ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｓｃａｖｅｎｇｅ Ｏ . Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅꎬ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ‘ Ｚｉｊｉａ １’ ｈａｓ
２
ｏｂｖｉｏｕｓ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙꎬ ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｉｔｓ ｆｕｒｔｈｅｒ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ‘ Ｚｉｊｉａ １ ’ꎬ ｔｅｎｄｅｒ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓꎬ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓꎬ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬ ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓꎬ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔꎬ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ

‘紫加 １ 号’源自云南省哀牢山南麓墨江县境 进行综合比较和评价具有一定意义ꎮ
内的野生刺五加( Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ)ꎬ多年生 本研究以‘ 紫加 １ 号’ 嫩茎叶多糖为研究对
常绿 植 物ꎬ 由 本 课 题 组 选 育 ( 云 林 园 植 新 登 第 象ꎬ依托现代色谱分离技术、光谱学手段及药理学
２０２２００１１ 号)ꎮ 其嫩茎叶呈灰紫色且味甘ꎬ有别于 方法ꎬ拟探讨‘紫加 １ 号’嫩茎叶多糖的分子量、单
普通刺五加嫩茎叶绿色且味苦ꎻ富含蛋白质、粗纤 糖组成、体外抗氧化活性ꎬ以期为‘ 紫加 １ 号’ 作为
维和维生素ꎬ是一种高钾、高钙、高镁、低钠的木本 天然抗氧化剂的进一步开发利用及精细深加工提
蔬菜(管颖等ꎬ２０１８)ꎻ其根可入药ꎬ性温ꎬ具有益气 供依据ꎮ

健 脾、 补 肾 安 神 和 扶 正 固 本 的 作 用 ( 王 正 琴ꎬ
２０１８)ꎬ药用价值很高ꎬ在医疗和保健方面发展前 １ 材料与方法

景可观ꎮ
多糖是由多个单糖通过糖苷键连接而成的结 １.１ 材料和试剂
构复杂、极性大的化合物( Ｕｌｌａｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎮ 天 材料:以本课题组选育的刺五加新品种(云林
然多糖因具有良好生物活性、无毒性、生物降解性 园植新登第 ２０２２００１１ 号) ‘ 紫加 １ 号’ 的嫩茎叶ꎬ
和生物相容性等特点而成为目前国内外的研究热 即枝条顶端 ７ ~ ５ ｃｍ 幼嫩部分为材料ꎬ取自云南
点(周洋等ꎬ２０２１)ꎮ 刺五加多糖已被证实具有抗 省墨江县(１０１°４１′ Ｅ、２３°２５′ Ｎ ꎬ海拔 １ ２８２ ｍ)ꎮ
氧化( 姬普雨和王慧景ꎬ２０２２)、抑制癌细胞增殖 ７０ ℃ 烘干至恒重ꎬ揉碎ꎬ分装于自封袋中ꎬ样品于
(彭 莉 等ꎬ ２０２０) 和 治 疗 免 疫 性 肝 损 伤 等 能 力 常温干燥环境下避光保存ꎮ
(Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１９)ꎮ 目前ꎬ大多数研究主要集中 试剂:ＡＢ￣８ 大孔吸附树脂( 北京索莱宝科技
在刺五加的根茎和叶上ꎬ但对于‘ 紫加 １ 号’ 不同 有限公司)ꎻ玻璃层析柱[ 四川蜀玻( 集团) 有限责
级分多糖的抗氧化性分析却尚未见报道ꎮ 从‘ 紫 任公司]ꎻＤＥＡＥ￣Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ５２、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ￣１００、透析
加 １ 号’原料中提取的多糖含有大量的蛋白质、色 袋(上海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司)ꎻ 单 糖 标 准 品
素等杂质ꎬ分离纯化多糖是目前研究的重点ꎮ 因 (ＨＰＬＣ ≥ ９８％)、氢氧化钠( 色谱纯)、醋酸钠( 美
此ꎬ对‘紫加 １ 号’ 多糖的不同级分及抗氧化活性 国 Ｓｉｇｍａ 公司)ꎻ三氟乙酸( 色谱纯)、硝酸钠、甲