Page 167 - 《广西植物》2024年第5期
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５ 期 闫海锋等: 檀香 ＮＤＨ 脱氢酶基因的克隆、定位与启动子分析 ９ ５ ５
ＳｉＮｄｈ６ 和 ＶｖＮｄｈ６ 聚为一类ꎬ这与多重序列比对结
果较为一致ꎻ同时ꎬ我们发现 ＳａＮＤＨ６ 与葡萄、甜
樱桃( Ｐｒｕｎｕｓ ａｖｉｕｍ)、川桑( Ｍｏｒｕｓ ｎｏｔａｂｉｌｉｓ)、毛果
杨( Ｐｏｐｕｌｕｓ ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ)、麻 风 树 ( Ｊａｔｒｏｐｈａ ｃｕｒｃａｓ)
和橡胶树( Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ) 等木本植物 ＮＤＨ６ 的
进化关系均较近ꎮ
２.３ ＳａＮＤＨ６ 的亚细胞定位
将檀香 ＳａＮＤＨ６ 亚细胞定位载体瞬时转化到
Ａ. ３′ ＲＡＣＥ 扩增产物ꎻ Ｂ. ５′ ＲＡＣＥ 扩增产物ꎻ Ｃ. ＯＲＦ 扩 拟南芥原生质体ꎬ同时以转化 ＹＦＰ 空载体为对照ꎮ
增产物ꎮ 结果发现ꎬ转化的 ３５Ｓ: ＳａＮＤＨ６: ｐＳＡＴ６￣ＥＹＦＰ￣Ｎ１
和 ＹＦＰ 空载体均出现黄色荧光蛋白ꎬ说明转化过
Ａ. ３′ ＲＡＣＥ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔꎻ Ｂ. ５′ ＲＡＣＥ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｐｒｏｄｕｃｔꎻ Ｃ. ＯＲＦ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ.
程可靠ꎮ ３５Ｓ: ＳａＮＤＨ６: ｐＳＡＴ６￣ＥＹＦＰ￣Ｎ１ 融合蛋
图 １ ＳａＮＤＨ６ 的 ＰＣＲ 扩增 白的黄色荧光主要分布在叶绿体上ꎬ说明 ＳａＮＤＨ６
Ｆｉｇ. １ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＳａＮＤＨ６
蛋白定位于叶绿体( 图 ５)ꎬ与亚细胞定位预测结
果一致ꎮ
２.４ ＳａＮＤＨ６ 的组织表达
由图 ６ 可知ꎬＳａＮＤＨ６ 在檀香的根、 心材、叶片
和愈伤组织中均有表达ꎬ其中在叶片中的表达量
较高ꎬ其次为愈伤组织ꎬ在其余两种组织中的表达
量均相对较低ꎮ
２.５ ＳａＮＤＨ６ 的启动子分析
檀香 基 因 组 数 据 经 过 注 释 后ꎬ 我 们 提 取 了
ＳａＮＤＨ６ 基因起始密码子 ＡＴＧ 上游 ２ ０００ ｂｐ 的启
动子序列ꎮ 经过 ＰｌａｎｔＣＡＲＥ 分析发现ꎬ其含有大
量的光响应元件ꎬ如 ＡＣＥ、ＡＥ￣ｂｏｘ、Ｂｏｘ ４、Ｇ￣Ｂｏｘ、
ＧＴ１￣ｍｏｔｉｆ、 ＬＡＭＰ￣ｅｌｅｍｅｎｔ、 ＭＲＥ、 ＴＣＴ￣ｍｏｔｉｆ 和 ｃｈｓ￣
ＣＭＡ１ａꎬ说明 ＳａＮＤＨ６ 的表达主要受光的诱导ꎮ 同
时ꎬ还发现一些激素响应元件ꎬ如脱落酸( ＡＢＡ) 响
应 元 件 ＡＢＲＥ、 ＭｅＪＡ 响 应 元 件 ＣＧＴＣＡ￣ｍｏｔｉｆ 和
ＴＧＡＣＧ￣ｍｏｔｉｆ、 赤 霉 素 响 应 元 件 Ｐ￣ｂｏｘꎬ 说 明
ＳａＮＤＨ６ 的表达可能也受这些激素的调控ꎮ 此外ꎬ
还发现一些逆境响应元件ꎬ如厌氧诱导元件 ＡＲＥ、
防御 和 胁 迫 响 应 元 件 ＴＣ￣ｒｉｃｈ ｒｅｐｅａｔｓ 等ꎬ 说 明
图 ２ ＳａＮＤＨ６ 的 ＯＲＦ 序列 ＳａＮＤＨ６ 可能参与檀香的一些逆境胁迫反应过程
Ｆｉｇ. ２ ＯＲＦ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＳａＮＤＨ６ (图 ７)ꎮ
２.６ 可能结合 ＳａＮＤＨ６ 的转录因子分析
ＳｉＮｄｈ６ 的 相 似 度 为 ５２. ６０％ꎬ 与 木 薯 ( Ｍａｎｉｈｏｔ 通过 ＰｌａｎｔＲｅｇＭａｐ 分析( 图 ８) 发现ꎬ有 ７６ 个
ｅｓｃｕｌｅｎｔａ) ＭｅＮｄｈ６ 和 白 牧 豆 树 ( Ｐｒｏｓｏｐｉｓ ａｌｂａ ) 转录因子可能与 ＳａＮＤＨ６ 启动子结合ꎬ其中 ＥＲＦ
ＰａＮｄｈ６ 的 相 似 度 均 为 ５１. ８４％ꎬ 与 葡 萄 ( Ｖｉｔｉｓ 家族转录因子最多ꎬ共有 ４０ 个ꎻ其次为 Ｂ３ 类转录
ｖｉｎｉｆｅｒａ)ＶｖＮｄｈ６ 的序列相似性为 ５１.３０％ꎬ说明我 因子ꎬ共有 １３ 个ꎻＭＩＫＣ＿ＭＡＤＳ 和 ＡＰ２ 类转录因子
们正确地克隆到了檀香 ＮＤＨ 复合体 ６ 的基因ꎮ 分别有 ５ 个和 ４ 个ꎻ而 ＦＡＲ１ 和 ＭＹＢ 类转录因子
利用 ＭＥＧＡ ６.０ 对不同植物 ＮＤＨ 亚基的氨基 最少ꎬ分别只有 １ 个ꎮ 这说明 ＳａＮＤＨ６ 基因的表达
酸序列构建进化树ꎬ由图 ４ 可知ꎬ檀香 ＳａＮＤＨ６ 与 主要受到 ＥＲＦ 和 Ｂ３ 类转录因子的直接调控ꎮ
