Page 164 - 《广西植物》2025年第3期

５ ４ ４ 广 西 植 物 ４５ 卷
包含 ３ 个亚型ꎬ其中亚型 １ 代表受胁迫诱导的成
员ꎬ拟 南 芥 ( Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ) ＡｔＤＲＥＢ２Ａ / ２Ｂ / １ 材料与方法
２Ｃ / ２Ｅ / ２Ｈ 以及水稻( Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ) ＯｓＤＲＥＢ２Ａ / ２Ｂ
均属此类ꎬ它们都能强烈地响应干热胁迫ꎬ而亚型 １.１ 材料
２(如 ＡｔＤＲＥＢ２Ｄ / ２Ｇ 和 ＯｓＤＲＥＢ２Ｃ) 与亚型 ３( 如 由于短期内难以通过有性繁殖获得足够的种
ＡｔＤＲＥＢ２Ｆ 和 ＯｓＤＲＥＢ２Ｅ)中的成员几乎不受胁迫 苗(附图 １)ꎬ因此选择了长势基本一致的文采报
诱导(Ｍａｔｓｕｋｕｒａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０)ꎮ 近十几年来ꎬ多种 春苣苔组培苗为实验材料ꎮ 组培苗保存于广西壮
水果( Ａｒｒｏｙｏ￣Ｈｅｒｒｅｒａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６ꎻＬｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７ꎻ 族自治区中国科学院植物研究所组培室(２４ ℃ / ２４
Ｃｈａｕｄｈａｒｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２２ )、 蔬 菜 ( Ｈｉｃｈｒｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ℃ ꎬ１２ ｈ / １２ ｈ)ꎬ继代培养(培养基为 ＭＳ＋０.５ ｍｇ
￣１ ￣１
Ｌ ６￣ＢＡ＋ ０. ５ ｍｇＬ ＮＡＡ) ６０ ｄ 后 ( 冼 康 华 等ꎬ
２０１６)、作 物 ( Ｌｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００５ꎻ Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６ꎻ
Ａｋｂｕｄａｋ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８)、花卉( Ｗｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８) 及 ２０１４)ꎬ将 植 株 转 移 到 生 根 培 养 基 上 ( ＭＳ ＋ ０. １
￣１
草坪草(可祥等ꎬ２０１６)中的 ＤＲＥＢ２ 转录因子被鉴 ｍｇＬ ＩＢＡ)(附图 ２)ꎮ ３０ ｄ 后进行炼苗ꎬ移栽于
定ꎬ其在提高植物对干旱、高盐和高温的耐受性方 含混合基质( 草炭土 ∶ 蛭石 ∶ 珍珠岩 ＝ １ ∶ １ ∶ １)
的穴盘中ꎬ随后置于人工气候箱中( 生长参数设置
面具有巨大的潜力( Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００６ꎻＹａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ
为 ２５ ℃ / ２３ ℃ ꎬ１６ ｈ / ８ ｈ) 再生长 ３０ ｄꎬ采集上述
２０１０ꎻＯｓａｋａｂｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１１)ꎮ 在模式植物拟南芥
中ꎬＡｔＤＲＥＢ２Ａ 基因既可以分别受单一的干旱或热 幼 苗 叶 片 作 为 半 定 量 ＲＴ￣ＰＣＲ ( ｓｅｍｉ￣ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ
ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ＰＣＲꎬ ｓｑＲＴ￣ＰＣＲ)分析的样品ꎮ
激胁迫诱导ꎬ也可以被两者交叉诱导( Ｓａｋｕｍａ ｅｔ
此外ꎬ采集苗龄两年左右( 存在半木质化的较短根
ａｌ.ꎬ ２００６ｂ)ꎬ并且超量表达 ＡｔＤＲＥＢ２Ａ 基因比转入
状茎)的组织样品用于基因克隆与实时荧光定量
单个抗性基因在抗性改良上更为有效( Ｇｕｊｊａｒ ｅｔ
ＰＣＲ( ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲꎬ ｑＲＴ￣ＰＣＲ) 分析ꎬ
ａｌ.ꎬ ２０１４)ꎬ这说明 ＡｔＤＲＥＢ２Ａ 基因在干热复合胁
样品采集后立即用液氮速冻保存于 － ８０ ℃ 冰箱
迫应答途径中发挥了重要的调控作用ꎮ
中ꎬ采样零点均设在上午 １０ 点左右ꎮ
文采报春苣苔(２ｎ ＝ ３６)(Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４)隶
１.２ 方法
属 于 苦 苣 苔 科 ( Ｇｅｓｎｅｒｉａｃｅａｅ ) 报 春 苣 苔 属
１.２.１ 非生物胁迫处理 半定量 ＲＴ￣ＰＣＲ 分析的样
(Ｐｒｉｍｕｌｉｎａ) ( Ｗａｎｇ ＹＺ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１１)ꎬ是属内唯一
品采集需要将幼苗根部洗净ꎬ并从土壤基质转移
叶片特化为肉质的类群之一( 邢全等ꎬ２００５)ꎬ主要
至 １ / ２ 改 良 Ｈｏａｇｌａｎｄ 营 养 液 中 ( １０ ｍｍｏｌ Ｌ ￣１
分布于广西崇左市龙州县和宁明县ꎬ原生于裸露
ＭＥＳꎬｐＨ 调至 ５.７)ꎬ于人工气候箱中适应 １ ~ ２ ｄꎬ
石灰岩矮石山上的深岩缝中ꎬ具有木质根状茎和
再分别进行以下单一胁迫处理:低温(４ ℃ )、热激
肉质叶片ꎬ这些形态特征暗示其对干热环境具有
￣１
(４０ ℃ )、渗透(４００ ｍｍｏｌＬ 甘露醇)、高盐(３００
较强的耐受能力( 王莉芳等ꎬ２０１２)ꎮ 高温与干旱
ｍｍｏｌ Ｌ ￣１ ＮａＣｌ)、 外 源 脱 落 酸 ( １００ μｍｏｌ Ｌ ￣１
胁迫在文采报春苣苔原生境中常伴随出现ꎬ但其 ＡＢＡ)和氧化(３％ Ｈ Ｏ )(Ｘｉｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０)ꎮ 处理
２ ２
应答干热复合胁迫的遗传基础尚未见报道ꎮ 因
节点分别为 ０、０.５、１、３、６、１２、２４ ｈꎮ
此ꎬ本研究依据文采报春苣苔干热胁迫下的转录 实时荧光定量 ＰＣＲ 分析的样品采集需要将
组数据ꎬ采用同源克隆法ꎬ通过 ＰＣＲ 扩增从文采报 所有植株置于两种生长条件下ꎬ第一种为液体培
春苣苔中分离 ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 基因ꎬ并对其序列结构 养ꎬ分别采用 ２５ ℃ 正常条件( ＣＫ１) 、４００ ｍｍｏｌ
与表达模式进行分析ꎬ拟探讨以下问题:(１) 文采 Ｌ 甘露醇处理 ２ ｈ( Ｄ１) 、４０ ℃ 处理 ２ ｈ( Ｈ１) 和
￣１
报春苣苔 ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 同源基因是否具有数个不同 ４００ ｍｍｏｌ Ｌ 甘 露 醇 ＋ ４０ ℃ 复 合 处 理 ２ ｈ
￣１
的成员ꎻ( ２) 与 单 一 干 旱 和 高 温 胁 迫 相 比ꎬ 哪 些 ( ＤＨ１) ꎻ第二种为土壤栽培ꎬ分别采用 ２５ ℃ 正常
ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 成员在干热复合胁迫下的表达水平显 条件( ＣＫ２) 、缺水处理 １４ ｄ( Ｄ２) 、４０ ℃ 处理 ２ ｈ
著较高ꎮ 这对于筛选应答干旱与高温双重胁迫的 ( Ｈ２) 和 缺 水 处 理 １４ ｄ ＋ ４０ ℃ 复 合 处 理 ２ ｈ
ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 基因ꎬ深入理解干热信号调控文采报春 ( ＤＨ２) ꎮ 于同一天采集 ３ ~ ４ 株植物上的肉质叶
苣苔幼苗的环境适应性具有重要意义ꎬ并可为报 或根状茎ꎬ混合作为 １ 个生物学重复ꎬ每个处理
春苣苔抗逆种质的创制提供新的基因储备ꎮ 节点取 ３ 个生物学重复ꎮ