Page 166 - 《广西植物》2025年第3期
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５ ４ ６ 广 西 植 物 ４５ 卷
软件为 Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ７(Ｂｅｒｋｍａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎮ ２.３ ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 转录因子保守基序的功能预测
１.２.７ 数据分析 采用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ 和 ＳＡＳ 软件 ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 转录因子保守基序的分布见图 ３ꎬ
(Ｖｅｒｓｉｏｎ ９.２) 进行统计学分析ꎮ 所有数据采用单 保守基序的功能预测见附表 ８ꎮ 其中ꎬＭＥＭＥ￣１ / ２ /
因素方差分析( ｏｎｅ￣ｗａｙ ＡＮＯＶＡ)ꎬＤｕｎｃａｎ 新复极 ４ 共同构成了 ＡＰ２ / ＥＲＦ 结合结构域( 包含 ３ 个 β￣
差法进行多重比较( Ｐ<０.０１)ꎮ 数据显示为至少 ３ 折叠链和 １ 个 α￣螺旋) 及其侧翼序列ꎮ ＭＥＭＥ￣１１
个生物学重复的平均值±标准误差ꎬ所用图像处理 与 ＭＥＭＥ￣１２ 共 同 构 成 了 潜 在 的 负 调 控 区 域
( ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｄｏｍａｉｎꎬ ＮＲＤ )ꎮ 大 多 数
软件为 Ａｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ ＣＳ６ꎮ
ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 转录因子拥有 Ａ￣２ 亚组的典型保守基
２ 结果与分析 序(附表 ９)ꎬ如 ＰｗＤＲＥＢ２ＡＬ１ / ２ＡＬ２ 含有 ＣＭＩＶ￣１ /
２ / ３ 组 分ꎬ ＰｗＤＲＥＢ２Ａ 含 有 ＣＭＩＶ￣１ / ２ 组 分ꎬ
２.１ 文采报春苣苔 ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 基因的获得 ＰｗＤＲＥＢ２Ｄ / ２ＤＬ / ２Ｆ 仅 含 ＣＭＩＶ￣１ 组 分ꎬ
针 对 转 录 组 中 序 列 信 息 不 完 整 的 ＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ１ / ２ＥＬ２ 仅 含 ＣＭＩＶ￣３ 组 分ꎮ ＣＭＩＶ￣１
组分由 ８ 个保守的氨基酸( [ Ｋ / Ｒ] ＧＫＧＧＰｘＮ) 定
ＰｗＤＲＥＢ２ＤＬ 和 ＰｗＤＲＥＢ２Ｆ 基 因ꎬ 通 过 改 良 ｔａｉｌ￣
ＰＣＲ 技术获取了缺少的侧翼序列ꎮ 利用 ＰＣＲ 扩 义ꎬ为 ＤＲＥＢ 亚族成员共同的保守基序ꎮ ＣＭＩＶ￣２
组分由 ２９ 个氨基酸(ＫＫＲＫＲＲＧＧＲＤＶＡＥＩＬＫＫＷＫ
增获得了 ８ 个 ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 基因的 ｇＤＮＡ 和 ｃＤＮＡ
全长ꎬ经比对后发现其 ＣＤＳ 区均无内含子存在( 附 ＥＹＮＥＱＶＥＡＤＳ)定义ꎬ通常包含 ＮＬＳ 序列ꎮ ＣＭＩＶ￣
３ 组分由 １１ 个保守的氨基酸( ＦＤＩＮＥＬＬＧＤＬＮ) 定
表 ２)ꎮ 为与模式植物中该基因的命名保持一致ꎬ
经序 列 比 对 后ꎬ 将 上 述 ８ 个 基 因 分 别 命 名 为 义ꎬ 一 般 为 转 录 激 活 区 域ꎮ 由 此 可 见ꎬ
ＰｗＤＲＥＢ２Ａ / ２ＡＬ１ / ２ＡＬ２ / ２Ｄ 包含 ＮＬＳ 基序ꎬ表明
ＰｗＤＲＥＢ２Ａ、 ＰｗＤＲＥＢ２ＡＬ１、 ＰｗＤＲＥＢ２ＡＬ２、
它们 可 在 细 胞 核 内 发 挥 作 用ꎮ ＰｗＤＲＥＢ２ＡＬ１ /
ＰｗＤＲＥＢ２Ｄ、 ＰｗＤＲＥＢ２ＤＬ、 ＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ１、
２ＡＬ２ / ２Ｄ / ２ＤＬ / ２ＥＬ１ / ２ＥＬ２ 拥有转录激活域ꎬ推测
ＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ２ 和 ＰｗＤＲＥＢ２Ｆꎮ 开 放 阅 读 框 ( ｏｐｅｎ
它们能参与蛋白间的相互作用ꎮ ＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ１ /
ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅꎬ ＯＲＦ)分别编码 １９８ ~ ３８６ 个氨基酸ꎬ
２ＥＬ２ 存在非典型富含丝氨酸 / 苏氨酸残基的多肽
预测分子量范围为 ２１.４ ~ ４３.６ ｋＤａꎬ理论等电点范
(ＮＲＤ)ꎬ暗示它们可能参与了包括去稳定化在内
围为 ４.７９ ~ ７.７３ꎮ 其编码蛋白均含由 ５８ 个氨基酸
的翻译后调控ꎮ
组成的 ＡＰ２ / ＥＲＦ 结合结构域ꎬ以及保守的缬氨酸
２.４ ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 基因响应单一胁迫的表达模式
(Ｖ１４) 与谷氨酸( Ｅ１９) 位 点 ( ＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ１ / ２ 除
在 ６ 种单一胁迫下ꎬ 利用 ｓｑＲＴ￣ＰＣＲ 分 析 了
外ꎬ第 １９ 位由 Ｅ 突变为 Ｄ)ꎮ 其中ꎬＰｗＤＲＥＢ２Ａ /
ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 基因在文采报春苣苔叶片中转录本的积
２ＡＬ１ / ２ＡＬ２ / ２Ｄ 转 录 因 子 ＡＰ２ / ＥＲＦ 保 守 域 的 左
累情况(图 ４)ꎮ 其中ꎬＰｗＤＲＥＢ２Ａ 基因能强烈响应
翼ꎬ还包含预测的 ＮＬＳ 序列(图 １:Ａ)ꎮ
低温、高盐及氧化胁迫ꎬ中度响应热激、渗透及外源
２.２ ＰｗＤＲＥＢ２ｓ 转录因子的系统进化分析 ＡＢＡ 处理ꎻＰｗＤＲＥＢ２ＡＬ１ 基因受低温胁迫强烈诱
系统 进 化 分 析 结 果 表 明ꎬ ＰｗＤＲＥＢ２Ａ/ ２ＡＬ１ / 导ꎬ受热激、渗透、高盐及氧化胁迫中度诱导ꎬ同时
２ＡＬ２、ＰｗＤＲＥＢ２Ｄ/ ２ＤＬ 和 ＰｗＤＲＥＢ２Ｆ 转录因子隶 受外源 ＡＢＡ 处理轻度诱导ꎻＰｗＤＲＥＢ２ＡＬ２ 基因能强
属于 Ａ￣２ 亚组ꎬＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ１ / ２ＥＬ２ 则被归入 Ａ￣６ 烈应答热激胁迫ꎬ中度应答低温、渗透、高盐、外源
亚组( 图 ２:Ａ)ꎮ 其中ꎬＰｗＤＲＥＢ２Ａ/ ２ＡＬ１ / ２ＡＬ２ 转 ＡＢＡ 处理及氧化胁迫ꎻＰｗＤＲＥＢ２Ｄ 基因能强烈响应
录因子被进一步归入 Ａ￣２ 亚组亚型 １ꎬ表明它们可 低温及氧化胁迫ꎬ中度或轻度响应热激、渗透、高盐
能为胁迫应答型蛋白ꎮ ＰｗＤＲＥＢ２Ｄ/ ２ＤＬ 转录因子 及外源 ＡＢＡ 处理ꎻＰｗＤＲＥＢ２ＤＬ 基因受低温胁迫轻
被进一步归入 Ａ￣２ 亚组亚型 ２ꎬＰｗＤＲＥＢ２Ｆ 转录因 度诱导ꎬ受热激、渗透、高盐、外源 ＡＢＡ 处理及氧化
子被进一步归入 Ａ￣２ 亚组亚型 ３ꎬ说明它们对胁迫 胁迫微弱诱导ꎻＰｗＤＲＥＢ２Ｆ 基因能轻度应答低温和
的敏感性可能较低ꎮ ＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ１ / ２ＥＬ２ 转录因子 热激胁迫ꎬ微弱应答渗透、高盐和外源 ＡＢＡ 处理ꎬ但
则形成了一个独立的外类群ꎬ未被归入 Ａ￣２ 亚组的 不应答氧化胁迫ꎻＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ１ / ２ＥＬ２ 基因几乎不
任一亚型ꎬ暗示其与 ＥＲＦ 亚族、Ａ￣１ 亚组及 Ａ￣２ 亚组 受上述胁迫的诱导ꎬ仅在渗透胁迫下ꎬＰｗＤＲＥＢ２ＥＬ２
其他成员的功能可能存在差异(图 １:Ｂꎬ图 ２:Ｂ)ꎮ 基因有极微弱的应答ꎮ
