Page 164 - 《广西植物》2025年第7期
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１ ３ ５ ６ 广 西 植 物 ４５ 卷
Ａ. 秋石斛‘诺贝尔’在含有不同浓度双丙氨膦分化培养基中的存活率ꎻ Ｂ. 原球茎在含不同浓度双丙氨膦培养基中培养 ４ 周后生
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长状态 ａ－ｆ 各浓度分别为 ０、１、３、５、７、９ ｍｇＬ ꎬ比例尺 ＝ １ ｃｍꎮ
Ａ. Ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ‘Ｎｏｂｉｌｅ Ｌｉｎｄｌ.’ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂｉａｌａｐｈｏｓꎻ Ｂ. Ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ
ｔｈｅ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍｓ ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ｆｏｕｒ ｗｅｅｋｓ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂｉａｌａｐｈｏｓ ａ－ｆ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｔｈｅ ｂｉａｌａｐｈｏｓ
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ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ０ꎬ １ꎬ ３ꎬ ５ꎬ ７ꎬ ９ ｍｇＬ ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｂａｒｓ ＝ １ ｃｍ.
图 ７ 双丙氨膦浓度及培养时间对原球茎分化的影响
Ｆｉｇ. ７ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｂｉａｌａｐｈｏｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｉｍｅ ｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
Ａ. 秋石斛继代 １ 个周期的胚性愈伤组织ꎻ Ｂ. ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３ 转化胚性愈伤组织 １ 个月后 ＧＵＳ 染色ꎬ箭头所指为蓝色位点ꎻ Ｃ. 继
代 ３ 个周期的胚性愈伤组织ꎻ Ｄ. ＧＵＳ 染色 ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３ 转化 ３ 个月的胚状体ꎮ
Ａ. ＥＣｓ ａｆｔｅｒ ｏｎｅ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｃｙｃｌｅ ｏｆ Ｄｅｎ￣Ｐｈａｌｓꎻ Ｂ. ＧＵＳ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ＥＣｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３ ｏｎｅ ｍｏｎｔｈ ｌａｔｅꎬ ａｒｒｏｗｓ ｒｅｆｅｒ ｔｏ ｂｌｕｅ
ｓｉｔｅｓꎻ Ｃ. ＥＣｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｒｅｅ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｃｙｃｌｅｓꎻ Ｄ. ＧＵＳ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｔｈｒｅｅ ｍｏｎｔｈｓ ｂｙ ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３.
图 ８ ＧＵＳ 染色检测秋石斛 ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３ 转基因抗性愈伤组织
Ｆｉｇ. ８ ＧＵＳ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＥＣｓ ｏｆ ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３ ｉｎ Ｄｅｎ￣Ｐｈａｌｓ
株ꎮ 未来ꎬ获得多基因聚合转基因植株需要多次 遗传转化应用最广泛、最高效的方法之一ꎮ 秋石
转入 １ 个或多个基因ꎬ这个过程需要不同筛选标 斛至今还没有建立出一个广谱、高效、稳定的遗传
记基因 辅 助 进 行 多 轮 转 化 才 能 实 现 ( Ｖｉｂｈａ ＆ 转化体系ꎬ该技术还有待突破ꎮ 本研究测试了秋
Ｊａｍｅｓꎬ ２０１６ꎻＬｉ ＹＭ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２２)ꎮ 影响农杆菌介 石斛不同外植体对不同筛选剂的敏感性ꎬ同时以
导法转化效率的因素有很多ꎬ其中筛选剂种类和 潮霉素为筛选剂进行了转化测试ꎬ并获得了转化
筛选浓度是关键要素之一( 曹政ꎬ２０２０)ꎮ 因此ꎬ测 外植体ꎮ 本研究结果将为秋石斛高效转基因育种
试秋石斛对不同筛选剂的敏感性是建立高效遗传 奠定基础ꎮ
转化体系的前提ꎮ 目前ꎬ农杆菌介导法是石斛兰 本研究发现秋石斛对潮霉素敏感ꎬ５０ ｍｇＬ ￣１
