Page 162 - 《广西植物》2025年第7期
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１ ３ ５ ４ 广 西 植 物 ４５ 卷
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Ａ. ０ ｍｇＬ ꎻ Ｂ. １００ ｍｇＬ ꎻ Ｃ. ３００ ｍｇＬ ꎻ Ｄ. ５００ ｍｇＬ ꎻ Ｅ. ７００ ｍｇＬ ꎻ Ｆ. ９００ ｍｇＬ ꎮ
图 ４ 不同卡那霉素浓度对胚性愈伤组织的影响
Ｆｉｇ. ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｋａｎａｍｙｃｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ＥＣｓ
Ａ. 秋石斛‘诺贝尔’在含有不同浓度卡那霉素分化培养基中的存活率ꎻ Ｂ. 原球茎在含有不同浓度卡那霉素分化培养基中培养 ４
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周后的生长状态 ａ－ｆ 分别表示卡那霉素浓度为 ０、１００、３００、５００、７００、９００ ｍｇＬ ꎬ比例尺 ＝ １ ｃｍꎮ
Ａ. Ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ‘Ｎｏｂｉｌｅ Ｌｉｎｄｌ.’ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｋａｎａｍｙｃｉｎꎻ Ｂ. Ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｔｕｓ
ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍｓ ａｆｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｆｏｒ ｆｏｕｒ ｗｅｅｋｓ ｏｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｋａｎａｍｙｃｉｎ ａ－ｆ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｔｈｅ
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ｋａｎａｍｙｃｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ０ꎬ １００ꎬ ３００ꎬ ５００ꎬ ７００ꎬ ９００ ｍｇＬ ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｂａｒｓ＝ １ ｃｍ.
图 ５ 不同卡那霉素浓度对原球茎分化的影响
Ｆｉｇ. ５ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｋａｎａｍｙｃｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｒｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
化测试ꎮ ＥＨＡ１０５￣ｐＣＡＭＢＩＡ１３０３(含 ｈｐｔ 筛选标记 第三轮筛选ꎬ为避免 ９０ ｍｇＬ 潮霉素浓度过高ꎬ
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基因)侵染胚性愈伤组织 ２０ ｍｉｎ 后ꎬ分别转入潮霉 造成抗性胚性愈伤组织快速死亡ꎬ将其转入浓度
素浓度为 ３０、５０、９０ ｍｇＬ 的筛选培养基中ꎮ 经 为 ８０ ｍｇＬ 的培养基中ꎬ最终获得外源基因稳定
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￣１ 整合到基因组中的转基因株系ꎬ如图 ８Ｄ 所示ꎬ与
过 ４ 周筛选后ꎬ发现仅在潮霉素浓度为 ３０ ｍｇＬ
的培养基中约有 ５０％的外植体存活ꎬ５０ ｍｇＬ 和 图 ８Ｃ 对照相比ꎬ转基因胚经 ＧＵＳ 染色后显现深蓝
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９０ ｍｇＬ 的培养基中的外植体全部发褐变白ꎬ存 色ꎮ 这说明秋石斛转基因筛选时筛选剂浓度梯度
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活率为 ０％ꎮ 对抗性胚性愈伤组织进行组织化学 上升有利于转基因株系的获得ꎮ
染色并未观察到颜色变蓝ꎬ仅有个别胚性愈伤组
织出现蓝色小点( 图 ８Ｂ)ꎮ 为了抑制非转基因胚 ３ 讨论与结论
性愈伤组织增殖ꎬ第二轮筛选将抗性胚性愈伤组
织转入潮霉素浓度为 ５０ ｍｇＬ 的筛选培养基ꎬ结 基因工程改良作物的难点是将目的基因插入
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果假阳性胚性愈伤组织比例仍较高ꎮ 因此ꎬ进行 到植物基因组ꎬ 筛选转化细胞再生获得转基因植
