Page 165 - 《广西植物》2025年第7期
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７ 期 蒋琼海等: 秋石斛遗传转化筛选标记基因及筛选剂的筛选 １ ３ ５ ７
和 ３０ ｍｇＬ 分别是胚性愈伤组织和原球茎的致 总体而言ꎬ与其他兰科植物相比ꎬ秋石斛对潮
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死浓度ꎮ 这与前人的研究结果一致ꎬ即石斛兰对 霉素、Ｇ４１８ 敏感ꎬ对双丙氨膦较为敏感ꎬ对卡那霉
潮霉素 具 有 高 敏 感 性ꎬ工 作 浓 度 通 常 控 制 在 ５０ 素不敏感ꎮ ３ 种筛选标记基因都可以应用于秋石
￣１ 斛遗传转化研究ꎬｎｐｔ、ｈｐｔ 和 ｂａｒ 基因对应的筛选剂
ｍｇＬ 以内( 陈之林等ꎬ２００７ꎻ张妙彬等ꎬ２００８ꎻｄａ
Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６ａ)ꎮ 例如:金钗石斛遗传转化筛 及筛选剂浓度分别为 Ｇ４１８ ５０ ｍｇＬ 、潮霉素 ３０
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￣１ ｍｇＬ 和双丙氨膦 ７ ｍｇＬ ꎮ 如果以卡那霉素
选过程中潮霉素工作浓度为 ３０ ｍｇＬ ( Ｍｅｎ ｅｔ
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ａｌ.ꎬ ２００３)ꎻ铁皮石斛中使用的筛选浓度有 ９ ~ １８ 作为筛选剂则需要 ７００ ~ ９００ ｍｇＬ 的高浓度并
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ｍｇＬ 和 ３０ ｍｇＬ ( Ｐｈｌａｅｔｉｔａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５ａꎬｂꎻ 适当延长筛选时间才能实现有效筛选ꎮ 在遗传转
Ｋｕｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎮ 本研究还发现秋石斛对卡那霉 化过程中ꎬ潮霉素的初始筛选浓度为 ３０ ｍｇＬ ꎬ
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素极其不敏感ꎬ浓度为 ７００ ｍｇＬ 仍能正常生长ꎬ 随着筛选周期的延长ꎬ逐渐升高潮霉素浓度有利
９００ ｍｇＬ 才能实现肉眼可见的致死效果ꎮ 这说 于转基因株系的获得ꎮ 因此本研究为热带兰高效
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明石斛兰与其他兰科植物一样ꎬ不仅对卡那霉素 遗传转化体系的进一步完善提供了科学依据ꎮ
具有 天 然 的 耐 受 性ꎬ 而 且 耐 受 性 更 强ꎮ 石 斛 兰
Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ‘Ｍａｄａｍｅ Ｔｈｏｎｇ￣Ｉｎ’ 遗传转化使用 ２００
ｍｇＬ 卡那霉素进行抗性筛选ꎬ６ ~ ８ 个月后获得 参考文献:
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抗性小苗( Ｙｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００１)ꎮ 然而ꎬ本研究中 ２００
ＣＡＯ Ｚꎬ ２０２０. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
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ｍｇＬ 卡那霉素并不能有效地抑制外植体生长ꎮ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｏｒｃｈｉｄｓ [ Ｄ ]. Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ: Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ
相同地ꎬ兰科植物万代兰对卡那霉素也不敏感ꎬ外 Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ: ７－１１. [曹政ꎬ ２０２０. 农杆菌介导兰
植体在较高浓度下仍能正常生长ꎻ而 ５ ｍｇＬ 的 花转基因技术研究 [Ｄ]. 广州: 华南农业大学: ７－１１.]
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新霉素或 ３０ ｍｇＬ Ｇ４１８ 却能有效抑制非转基因 ＣＨＡＩ Ｄꎬ ＬＥＥ ＳＭꎬ ＮＧ ＪＨꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７. ｌ￣Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ
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株系生长(Ｇｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４)ꎮ 因此ꎬ本研究 ｓｕｌｆｏｘｉｍｉｎｅ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ
测试了秋石斛对 Ｇ４１８ 的敏感性ꎬ发现该筛选剂是 ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｃｈｉｄｓ [ Ｊ]. Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ
ｎｐｔ 基因对应的有效筛选剂ꎮ 虽然在胚性愈伤组 １３１(４): ４６６－４７２.
ＣＨＥＮ Ｊꎬ ＷＡＮＧ Ｌꎬ ＣＨＥＮ ＪＢꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８. Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
织阶段由于外植体不发生褐化ꎬ难以区别有效和
ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ
无效转化子ꎬ但在分化阶段 ５０ ｍｇＬ Ｇ４１８ 便足
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ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｃａｔｅｎａｔｕｍ Ｌｉｎｄｌ. [Ｊ]. Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ
以令非转化子发生白化死亡ꎮ 鉴于此ꎬ本研究认
Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ５４ (３): ２２８－２３９.
为在后续秋石斛遗传转化研究中ꎬ如果以胚性愈 ＣＨＥＮ ＺＬꎬ ＤＵＡＮ Ｊꎬ ＺＥＮＧ ＳＪꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７. Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ￣
伤组织作为转化受体ꎬ在胚性愈伤组织阶段 Ｇ４１８ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｒｃｈｉｄ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ
使用浓度可以选择 ３０ ｍｇＬ ꎬ在分化阶段则使用 ｐｒｏｔｏｃｏｒｍｓ [ Ｊ]. Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｒｕｍ Ｎａｔｕｒａｌｉｕｍ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ
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５０ ｍｇＬ ꎮ 值得注意的是ꎬ因为目前为止还未检 Ｓｕｎｙａｔｓｅｎｉꎬ ４６(１): ８６－９０. [陈之林ꎬ 段俊ꎬ 曾宋君ꎬ 等ꎬ
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２００７. 原球茎为转化受体的农杆菌介导石斛遗传转化
索到石斛兰对新霉素和 Ｇ４１８ 敏感性相关的研究
[Ｊ]. 中山大学学报(自然科学版)ꎬ ４６ (１): ８６－９０.]
报道ꎬ所以本研究是第一次在秋石斛中测试外植
ＣＵＩ Ｂꎬ ＬＩＵ Ｊꎬ ＷＡＮＧ ＪＱꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ
体对 Ｇ４１８ 的敏感性ꎮ Ｃｈａｉ 等(２００７) 曾利用 Ｌ￣蛋
Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ
氨酸亚砜酰亚胺(ＭＳＯ)作为 ｂａｒ 基因的筛选剂ꎬ并 ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ [Ｊ]. Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ４９
发 现 品 种 不 同ꎬ ＭＳＯ 的 致 死 浓 度 不 同ꎬ 如 (２): ２０８－２１２. [崔波ꎬ 刘佳ꎬ 王洁琼ꎬ 等ꎬ ２０１５. 农杆菌
Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ‘Ｍａｄａｍｅ Ｔｈｏｎｇ￣Ｉｎ’ 的筛选浓度为 ５ ~ 介导的铁皮石斛遗传转化体系研究 [Ｊ]. 河南农业大学
１０ μｍｏｌＬ ꎬＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ‘Ｃｈａｏ Ｐｒａｙａ Ｓｍｉｌｅ’ 的筛 学报ꎬ ４９(２): ２０８－２１２.]
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选浓度则为 ０.５ ~ ２ μｍｏｌＬ ꎮ Ｋｎａｐｐ 等(２０００)研 ＤＡ ＳＩＬＶＡ ＪＡꎬ ＤＯＢＲÁＮＳＺＫＩ Ｊꎬ ＣＡＲＤＯＳＯ ＪＣꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ
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２０１６ａ. Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ
究发现 １ ｍｇＬ 双丙氨膦即可以完全抑制兰科植
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[Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓꎬ ３５(３): ４８３－５０４.
物 Ｂａｒａｓｓｉａ、Ｃａｔｔｌｅｙａ 和 Ｄｏｒｉｔａｅｎｏｐｓｉｓ 的生长ꎮ 本研
ＤＡ ＳＩＬＶＡ ＪＡꎬ ＪＩＮ ＸＨꎬ ＤＯＢＲÁＮＳＺＫＩ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６ｂ.
究则发现 ７ ~ ９ ｍｇＬ 双丙氨膦是秋石斛的有效
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Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ: Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ
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致死浓度ꎬ这显然与兰科植物中报道的 １ ｍｇＬ ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎꎬ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｒｅｅｄｉｎｇ [Ｊ]. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
不同ꎮ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ ９５: １９６－２１６.
