Page 81 - 《广西植物》2026年第3期
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３ 期 袁红静等: 高山锥叶的成分分离鉴定及其胰脂肪酶抑制活性研究 ４ ５ ７
ＬＣ￣２０ＡＴ 高效液相色谱仪ꎻ岛津 ２６００ ｉ 型双光束 醇－水(０ →７０％) 梯 度 洗 脱ꎬ得 到 １０ 个 流 分 ( Ｆｒ.
紫外分光光度计( 日本岛津公司)ꎻ上海闪谱 ＳＰ￣ ３.１－Ｆｒ. ３.１０)ꎮ Ｆｒ. ３.１(５.３ ｇ) 依次经过 Ｓｅｐｈａｄｅｘ
ＭＡＸ３５００ＦＬ 多功能酶标仪ꎻ东京理化 ＥＹＥＬＡ Ｎ￣ ＬＨ￣２０、ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ ２０Ｐ、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ 柱层析ꎬ
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１３００ 型旋转蒸发仪ꎻＡＳＣＯ Ｐ￣２０００ 型旋光仪( 日本 以甲醇－水梯度(０→１００％) 洗脱ꎬ先后分离出化合
分光株式会社)ꎻ毕恩思 ＤＺＰ￣６０２０Ｌ 真空干燥箱 物 １(１０ ｍｇ)、３(４８ ｍｇ)、４(４８ ｍｇ)、８(１２ ｍｇ) 和
[毕恩 思 ( 上 海) 科 学 仪 器 有 限 公 司]ꎻ Ｓｅｐｈａｄｅｘ １０(２９ ｍｇ)ꎻＦｒ. ３.６(３.１ ｇ) 通过 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０、
ＬＨ￣２０ ( ２５ ~ １００ μｍꎻ 瑞 士 ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ￣ ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ ２０Ｐ 和 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ 色谱柱交
Ｓｃｉｅｎｃｅ ＡＢ 公司)ꎻＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ(日本 ＴＯＳＯＨ 叉分离ꎬ洗脱条件同上ꎬ得到化合物 １１(１８０ ｍｇ)、
公 司 )ꎻ ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ ２０Ｐ ( ７５ ~ １５０ μｍꎬ 日 本 １５( ８ ｍｇ) 以 及 ９ ( ３ ｍｇ)ꎻ Ｆｒ. ３. ７ ( ２. ８ ｇ) 通 过
Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ 公 司)ꎻ Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ ( 日 本 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ＳＳ 和 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｂｕｔｙｌ￣
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Ｆｕｊｉ Ｓｉｌｙｓｉａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ 公 司 )ꎻ Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ＳＳ ６５０Ｃ 柱纯化ꎬ甲醇－水梯度洗脱后ꎬ纯化得到化合
(Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌꎬ７５ ~ １５０ μｍ ꎬ日本 Ｔｏｋｙｏ 公 物 １４ ( ２４ ｍｇ)、 １８ ( ２９ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ. ５ ( １０５. ０ ｇ) 经
司)ꎻ Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｂｕｔｙｌ￣６５０Ｃ ( ５０ ~ １５０ μｍꎬ 日 本 Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ＳＳ 色谱柱(８.０ ｃｍ × ３０.０ ｃｍ)分离ꎬ以
ＴＯＳＯＨ 公司)ꎻＧＦ２５４ 薄层色谱硅胶(０.２ ｍｍꎬ德 甲醇－水(０→７０％) 梯度洗脱ꎬ收集到 １５ 个流分
国 Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ 公 司 )ꎻ 胰 脂 肪 酶 ( 批 号: (Ｆｒ. ５.１ －Ｆｒ. ５.１５)ꎮ Ｆｒ. ５.１( ２.２１５ ｇ) 依次通过
Ｃ１６０２５６４４ꎬ上海麦克林生化科技股份有限公司)ꎻ Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ＳＳ 和 Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ
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４￣甲基伞形酮油酸酯( ４￣ＭＵＯꎬ批号:Ｃ１７５５７４３３ꎬ 柱ꎬ以甲醇－水(０→１００％) 梯度洗脱后ꎬ纯化得到
上海麦克林生化科技股份有限公司)ꎻ奥利司他 化合物 ５(７４ ｍｇ)ꎻＦｒ. ５.３(１０.８ ｇ)经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣
(批号:Ｃ１７２９５７８２ꎬ山东科源生化有限公司)ꎻ磷 ２０、ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ ２０Ｐ 和 Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ 色谱柱交
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酸盐缓冲液[ ＰＢＳꎬ批号:ＺＣＤ１３７ꎬ 广检( 广州) 检 叉分离ꎬ相同洗脱条件下得到化合物 ６(５７ ｍｇ)、７
测科技有限公司]ꎮ (１３０ ｍｇ)和 １３(５ ｍｇ)ꎻＦｒ. ５.６(１６.０ ｇ)采用 Ｄｉａｉｏｎ
高山锥叶于 ２０２３ 年 １２ 月采集于云南省文山 ＨＰ２０ＳＳ、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０、 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｂｕｔｙｌ￣６５０Ｃ 以
市喜古乡古那冲ꎬ由昆明采智生物技术有限公司 及 Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ 柱进行多步纯化ꎬ最终得到化合
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工程师确定为壳斗科锥属植物高山锥的叶ꎬ凭证 物 ２(６ ｍｇ)、１６(６７ ｍｇ)和 １９(１９ ｍｇ)ꎮ
标本(２０２３１２１７)存放于广西植物功能物质与资源 ２.２ 胰脂肪酶抑制活性测试
持续利用重点实验室ꎮ 根据王亚凤等(２０２０) 的方法ꎬ采用 ４￣甲基伞
形酮油 酸 酯 ( ４￣ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ ｏｌｅａｔｅꎬ ４￣ＭＵＯ)
２ 方法 作为特异性底物ꎬ以奥利司他为阳性对照ꎬ评估化
合物对胰腺脂肪酶的抑制活性ꎮ 精密称取待测样
２.１ 提取与分离 品和奥利司他ꎬ溶解于二甲基亚砜( ＤＭＳＯꎬ１ ｍＬ)
将 ８.８ ｋｇ 高山锥叶ꎬ用 １００ Ｌ ８０％甲醇水溶液 中配制成母液ꎬ临用前用磷酸盐缓冲液( ＰＢＳꎬ ｐＨ
在室温下浸泡提取 ２ 次ꎬ每次持续 ７ ｄꎬ合并滤液ꎬ ７.０ ~ ７.２) 梯度稀释至不同浓度ꎬ确保 ＤＭＳＯ 最终
随后通过减压浓缩获得 ２ Ｌ 水相浓缩液ꎮ 水溶液 浓度≤１％ꎮ 在 ９６ 孔微量滴定板中ꎬ将 ２５ μＬ 样品
用 １.５ Ｌ 石油醚连续萃取 ６ 次以去除脂溶性成分ꎬ 溶液(不同浓度梯度) 溶于 ＰＢＳ 的胰脂肪酶溶液
剩余水层经减压浓缩除去残留石油醚后ꎮ 采用 (１０ ｍｇｍＬ )中混合孵化 ５ ｍｉｎ 后加入 ５０ μＬ 溶
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Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱色谱(１０.０ ｃｍ × ３９.０ ｃｍ) 进行 于 ＰＢＳ 的 ４￣ＭＵＯ 溶液(０.１ ｍｍｏｌＬ ) 并进行混
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初步分离ꎬ洗脱剂为甲醇－水梯度(０→１００％) 和 ２ 合ꎬ３７ ℃ 条件下反应 ２０ ｍｉｎ 后加入 １００ μＬ ０. １
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Ｌ ５０％丙酮水溶液ꎬ最终收集到 ８ 个组分( Ｆｒ. １ － ｍｏｌＬ 柠檬酸钠以终止反应ꎬ每个待测样品浓度
Ｆｒ. ８)ꎮ Ｆｒ. ２(２５.６ ｇ) 依次通过 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０、 设置 ３ 个复孔ꎮ 在酶标仪上ꎬ测量该 ９６ 孔微量滴
Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ＳＳ 和 Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ Ｃ 色谱柱分离ꎬ洗 定板中样品在 ３２０ ｎｍ 和 ４５０ ｎｍ 的激发波长下的
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脱条件均为甲醇－水(０→１００％)ꎬ先后得到化合物 吸光度(Ａ)值ꎮ 重复上述实验 ３ 次ꎬ测得的数据按
１２(２.５ ｇ)和化合物 １７(９８ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ. ３(４１.９ ｇ) 经 照下 述 公 式 计 算 胰 脂 肪 酶 抑 制 率ꎬ 用 ＧｒａｐｈＰａｄ
Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ＳＳ(８ ｃｍ × ３０.０ ｃｍ) 色谱柱分离ꎬ甲 Ｐｒｉｓｍ 软件计算半数抑制浓度( ＩＣ )ꎮ 抑 制 率 ＝
５０
