Page 117 - 《广西植物》2020年第7期

７ 期 黄代红等: 黑面神雌花气味传粉前后的变化及其生态意义 １ ０ １ ３

于与头细蛾传粉相关的叶下珠科植物花气味传粉 目ꎬ１００ / ５０ ｍｇꎬＳｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公司ꎬ美国) 吸 附 管
前后变化的研究还缺乏报道ꎮ (长 ７５ ｍｍꎬ外径 ６ ｍｍ)中进行挥发物的收集ꎮ 利
为此ꎬ本研究以与头细蛾传粉相关的叶下珠 用玻璃转子流量器( ＺＢ￣４ꎬ天津流量仪表有限公
科黑面神属植物黑面神( Ｂｒｅｙｎｉａ ｆｒｕｔｉｃｏｓａ) 为对象ꎬ 司)分别对进气端和出气端的空气流量进行控制ꎬ
利用动态顶空吸附法收集该物种雌花传粉前后的 流速均为 ４００ ｍＬｍｉｎ ꎮ 通过无味的特氟隆管
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气味挥发物ꎬ运用气相色谱 － 质谱联用技术( ｇａｓ (ＰＴＥＥꎬＶＩＣＩ Ｊｏｕｒ 公司ꎬ瑞士) 将采集装置中的各
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙꎬ ＧＣ￣ 部分连接起来ꎮ 为了与传粉头细蛾活动时间保持
ＭＳ)分析不同传粉时期花气味的化学组成ꎬ以期探 一致ꎬ花气味收集选择在 １８: ３０—２３: ３０ 进行ꎬ持

讨以下科学问题:(１)该物种雌花传粉前后挥发物 续 ５ ｈꎮ 在采集过程中ꎬ将空气作为对照ꎬ与花气
的化学组成是否发生明显改变ꎻ(２) 该物种雌花传 味收集同步进行ꎮ 采集完毕后ꎬ用锡箔纸包裹吸
粉前后释放量是否具有显著变化ꎻ(３) 该物种雌花 附管装入密封袋内ꎬ放置超低温冰盒带回实验室ꎮ
气味传粉前后发生质与量的变化有何生态意义ꎮ 在化学 分 析 前ꎬ首 先 取 出 吸 附 管ꎬ用 正 己 烷
对这些问题的回答ꎬ可为进一步揭示叶下珠科植 (色谱纯ꎬＦｉｓｈｅｒ 公司ꎬ美国) 洗脱挥发物ꎬ重复 ３
物与传粉头细蛾专性传粉互利共生体系稳定性维 次ꎬ然 后 将 洗 脱 液 收 集 在 ２ ｍＬ 棕 色 进 样 瓶 内

持的化学生态机制提供理论基础ꎮ (Ｓｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公司ꎬ美国)ꎬ约 ０.５ ｍＬꎬ再加入 ５００
ｎｇ 正二十烷(色谱纯ꎬＳｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公司ꎬ美国) 作
１ 材料与方法 为内标化合物对挥发物的含量进行定量ꎬ用氮气

浓缩至 １００ μＬꎬ最后将样品置于冰箱内( －１８ ℃ )
１.１ 材料 保存待分析ꎮ
选择位于海南鹦哥岭自然保护区鹦哥嘴分站 １.２.２ 花气味的化学分析 采用气－质联用仪( ＧＣ￣
内ꎬ主要生长于山坡、平地旷野灌丛或林缘地带的 ＭＳꎻ ＧＣꎬ ＨＰ￣６８９０ꎻ ＭＳꎬ ＨＰ￣５７９５ꎻ Ａｇｉｌｅｎｔ
黑 面 神 ( Ｂｒｅｙｎｉａ ｆｒｕｔｉｃｏｓａ) 为 材 料ꎮ 地 理 位 置 为 ＴｅｃｈｎｏｌｉｇｉｅｓꎬＵＳＡ)进行气味挥发物的分析及鉴定ꎮ
１０９°３４′０４″Ｅ、１９°０２′２１″Ｎꎬ海拔 ４５０ ｍꎮ 该研究地 (１)ＧＣ 条件:色谱柱采用 ＨＰ￣５ＭＳ 石英毛细管柱

点植被类型以热带低地雨林和热带季雨林为主ꎬ (３０ ｍ× ０.２５ ｍｍ× ０.２５ μｍ)ꎻ进样量 ２ μＬꎬ 采用
土壤类型为燥红壤和砖红壤(Ｗｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ２００８ꎻ郝清 ４ ∶ １分流模式ꎻ柱箱程序升温:４０ ℃ 保持 ５ ｍｉｎꎬ

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玉等ꎬ２０１３)ꎮ 以 ３ ℃ ｍｉｎ 升温至 １５０ ℃ ꎬ以 １０ ℃ ｍｉｎ 升至
１.２ 方法 ２００ ℃ ꎬ保持 ５ ｍｉｎꎻ进样口温度 ２５０ ℃ ꎻ载气为高
１.２.１ 花气味的收集 采用动态顶空吸附法分别 纯 Ｈｅꎬ流速 １.０ ｍＬｍｉｎ ꎮ (２) ＭＳ 条件:离子轰
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收集黑面神雌花传粉前后的花气味挥发物( 黄代 击源设为扫描功能ꎬ扫描范围 ３５ ~ ５００ ａｍｕꎬ电离
红等ꎬ２０１５)ꎬ具体工作流程如下:将采集的花放入 方式 ＥＩꎻ电子能量 ７０ ｅＶꎻ接口温度 ２８０ ℃ ꎻ离子源

无味 透 明 的 聚 氟 乙 烯 采 集 袋 中 ( ２ Ｌꎬ Ｔｅｆｌｏｎ 温度 ２３０ ℃ ꎻ极杆温度 １５０ ℃ ꎮ (３)气味化合物的
ＦＥＰꎬ大连德霖气体包装有限公司)ꎬ用封条密封采 鉴定:利用仪器自带的标准谱库( ＮＩＳＴ０８) 检索目
集袋的开口端ꎮ 为了减少空气中的水分对吸附剂 标化合物ꎬ确定其可能性ꎬ进一步利用保留指数ꎬ
吸附效果的影响及除掉空气中的灰尘颗粒ꎬ首先 并根据相关文献加以确定ꎮ 运用面积归一化法计

利用通气泵(ＦＡＹ４００２ꎬ成都气海机电制造有限公 算出气味各挥发物组分的相对百分含量ꎮ
司)将空气导入活性碳管( 长 ７５ ｍｍꎬ外径 ６ ｍｍꎬ １.３ 数据处理
Ｓｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公司ꎬ美国) 对其进行干燥和净化ꎬ 采用 Ｇｒａｐｈａｄ Ｐｒｉｓｍ ５.０ 软件ꎬ利用单因素方差
然后经由采集袋进气口通入袋内ꎬ促使花朵释放 分析中的 Ｔｕｋｅｙ’ ｓ 方法分别对黑面神雌花传粉前
气味ꎬ再通过抽气泵( 同通气泵型号) 将花气味经 后花气味中不同类型挥发物的相对含量、传粉前
由采集袋出气口抽出ꎬ最后导入 Ｔｅｎａｘ ＴＡ(６０ / ８０ 后 ９ 种主要挥发物的相对含量以及传粉前后挥发