Page 44 - 《广西植物》2022年第12期
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２ ０ ３ ４ 广 西 植 物 ４２ 卷
( Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ) 中 转 入 甘 薯 ( Ｉｐｏｍｏｅａ (‘ＴＹＺ￣１ 号’是绿化用的油橄榄种子通过杂合培
ｂａｔａｔａｓ)的 ＩｂＲＡＰ２￣１２ 基因提高其植株的耐盐性和 育出的实生苗中选育的优良无性系ꎬ其耐瘠薄、抗
抗旱性(Ｌｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎬ过表达 ＯｓＥＲＦ７１ 提高水 旱耐涝性强ꎮ ‘佛奥’是我国通过国家审定的油橄
稻(Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ) 的耐旱性( Ａｈｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)ꎮ 近 榄良种ꎬ中国油橄榄适生区大都有种植ꎬ但抗逆性
年随着植物基因组数据相继公布发现ꎬ不同植物 不强)ꎮ 试验前期选取 ２ 个品种油橄榄各 ３０ 株幼
中 ＡＰ２ / ＥＲＦ 转录 因 子 的 数 量 不 同ꎬ如 中 国 樱 花 苗分干旱、水淹及对照组ꎮ ２０１９ 年 ９ 月 ３ 日开始
(Ｃｅｒａｓｕｓ ｓｅｒｒｕｌａｔａ)中鉴定出了 ６８ 个 ＡＰ２ / ＥＲＦ 转 对 ２ 个品种扦插苗进行干旱、水淹及正常培养处
录因子家族成员(Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎬ鸭茅( Ｄａｃｔｙｌｉｓ 理ꎬ２０１９ 年 ９ 月 ８ 日采集不同处理(干旱、水淹、对
ｇｌｏｍｅｒａｔａ)和白桦(Ｂｅｔｕｌａ ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ)中分别有 １９３ 照)下油橄榄(‘ ＴＹＺ￣１ 号’ ‘ 佛奥’) 扦插苗的叶片
个和 ４５ 个 ＡＰ２ / ＥＲＦ 转 录 因 子 家 族 成 员 ( Ｘｕ ｅｔ 和根各 ３ 个混合样ꎮ 所采集的样品当即处理后用
ａｌ.ꎬ ２０２０ꎻ 张文慧等ꎬ２０２０)ꎮ 然而ꎬ目前对油橄榄 液 氮 速 冻ꎬ － ８０℃ 下 保 存ꎬ 按 照 ＲＮＡ 试 剂 盒
(Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ)基因组中的 ＡＰ２ / ＥＲＦ 转录因子的 ( Ｑｉａｇｅｎ) 说 明 提 取 ＲＮＡꎬ 以 ＲＮＡ 为 模 板 合 成
研究未见报道ꎮ ｃＤＮＡ 且构建文库ꎮ 委托上海派森诺生物科技有
油橄榄为木犀科( Ｅｕｒｏｐａｅａ) 木犀榄属( Ｏｌｅａ) 限 公 司 利 用 二 代 测 序 技 术 ( Ｎｅｘｔ￣Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
油料作物ꎬ原产于地中海沿岸ꎬ适应夏季长、热、干 ＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇꎬＮＧＳ)基于 Ｉｌｌｕｍｉｎａ 测序平台对样品文
燥ꎬ冬季 温 和 多 雨 的 半 干 旱 气 候 ( Ａｍｉｒａ ｅｔ ａｌ.ꎬ 库进行双末端(Ｐａｉｒｅｄ￣ｅｎｄꎬ２∗１５０ ｂｐꎬＰＥ)测序ꎮ
２０２０)ꎬ是世界著名的亚热带果树和重要经济林木 １.２ ＯｅＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白序列的获取
(牛二利等ꎬ２０２１)ꎮ 它全身是宝ꎬ橄榄叶和橄榄油 油橄榄的全基因组数据从 ＮＣＢＩ 上下载ꎬ搜索
中富含多种有益活性物质ꎬ易于人体吸收( 程子彰 获得油橄榄 ＡＰ２ / ＥＲＦ 转录因子的 ｃＤＮＡ 序列及蛋
等ꎬ２０１４)ꎬ橄榄油在西方被誉为“液体黄金”ꎬ是世 白序列ꎬ利用 ＮＣＢＩ 进行 ＢＬＡＳＴ 同源序列比对及
界上唯一直接采用鲜果冷榨工艺 以自然形态榨取 蛋白结构域分析ꎬ除去无 ＡＰ２ / ＥＲＦ 结构域的蛋白
的木本植物油( 邓从静等ꎬ２０１１)ꎮ 随着社会经济 序列ꎮ
发展ꎬ橄榄油消费需求急剧增长ꎬ橄榄油市场长期 １.３ ＯｅＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白理化性质分析
供不应求、价格居高不下( 赵梦炯等ꎬ２０２１)ꎮ 云南 利用 ＥｘＰＡＳｙ ＰｒｏｔＰａｒａｍ ｔｏｏｌ 在 线 软 件 分 析
油橄榄栽培由于引种地和原产地生态条件差异还 ＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白理化性质ꎬ通过 ｓｉｇｎａｌＰ￣５.０ 和 Ｅｕｋ￣
面临很多问题ꎬ夏季湿润多雨ꎬ冬季干旱的气候与 ｍＰＬｏｃ ２.０ ｓｅｒｖｅｒ 预测蛋白的信号肽和亚细胞定位ꎬ
原产地气候正好相反ꎬ因此选育夏季耐涝、冬季抗 利用 Ｐｒａｂｉ 在 线 软 件 ( ＮＰＳ ＠ : ＳＯＰＭＡ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ
旱的油橄榄砧木品种是解决云南油橄榄栽培问题 ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ)预测蛋白的二级结构ꎮ
的关键ꎮ 本研究基于课题组前期田间试验结果 １.４ ＯｅＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白进化树构建及保守元件和基
‘田园 １ 号’ ( ＴＹＺ￣１ 号) 在水胁迫下抗逆性强于 因结构分析
‘佛奥’ꎬ为探究 ２ 个品种抗逆性差异的原因ꎬ本文 利用 ＭＥＧＡ Ｘ 和 Ｆｉｇｔｒｅｅ 将来自油橄榄和拟南
对油橄榄 ＡＰ２ / ＥＲＦ 基因进行挖掘鉴定ꎬ并分析其 芥 ＡＰ２ / ＥＲＦ 蛋白序列构建进化树及修饰ꎬ执行参
蛋白理化性质、系统发育及水胁迫下的基因表达 数为 Ｎｏｎｅꎮ 油橄榄 ＡＰ２ / ＥＲＦ 家族蛋白分类参考
模式ꎬ以期为进一步研究油橄榄 ＡＰ２ / ＥＲＦ 家族基 拟南芥 ＡＰ２ / ＥＲＦ 家族蛋白的分类方法ꎬ拟南芥蛋
因的抗逆性表达及功能基因的挖掘奠定基础ꎬ也 白序 列 从 拟 南 芥 基 因 数 据 库 下 载 (ｈｔｔｐｓ:/ / ｗｗｗ.
为油橄榄选育抗旱、耐涝砧木品种提供了方法和 ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ. ｏｒｇ/ ｄｏｗｎｌｏａｄ/ ｉｎｄｅｘ￣ａｕｔｏ. ｊｓｐ? ｄｉｒ ＝％
理论依据ꎮ ２Ｆｄｏｗｎｌｏａｄ＿ ｆｉｌｅｓ％ ２ＦＰｒｏｔｅｉｎｓ)ꎬ利用 ＭＥＭＥ (ｈｔｔｐ:/ /
ｍｅｍｅ.ｎｂｃｒ.ｎｅｔ/ ｍｅｍｅ/ ｔｏｏｌｓ/ ｍｅｍｅ) 对 １１０ 个 ＯｅＡＰ２/
１ 材料与方法 ＥＲＦ 蛋白保守结构域进行预测ꎮ 具体参数设置:
基序位点分布情况ꎬ选择重复次数不限制ꎻ保守性
１.１ 材料获取及转录组测序 基序的数目限制选择 ６ꎬ其他参数均采用默认值ꎮ
材料为油橄榄‘ＴＹＺ￣１ 号’ 和‘ 佛奥’ 一年生扦 １.５ ＯｅＡＰ２ / ＥＲＦ 水分胁迫基因表达谱分析
插苗ꎬ由 云 南 省 林 业 和 草 原 科 学 院 树 木 园 提 供 通过有参转录组测序获得油橄榄 ＡＰ２ / ＥＲＦ
