Page 139 - 《广西植物》2023年第2期
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2 期                李辉等: 基于转录组测序的枫香 EST ̄SSR 引物开发及有效性评价                                       3 3 3

                                               表 6  18 个位点的遗传多样性
                                            Table 6  Genetic diversity of the 18 loci
                                                                      Nei’s 基因
                           等位基因数       有效等位基因数      Shannon 多样性指数                  观测杂合度          期望杂合度
                位点         Number of      Number of     Shannon’s    多样性指数           Observed      Expected
                                                                      Nei’s gene
                Locus        alleles    effective alleles  diversity index         heterozygosity  heterozygosity
                                                                     diversity index
                             (Na)          (Ne)           (I)                         (Ho)          (He)
                                                                        (H)
                LF53          2           1.997 6        0.692 6       0.499 4       0.862 1       0.491 8
                LF76          3           2.166 4        0.914 1       0.538 4       0.880 0       0.450 6
                LF89          4           2.609 6        1.112 7       0.616 8       0.800 0       0.370 6
                LF108         2           1.773 8        0.627 9       0.436 2       0.714 3       0.555 8
                LF111         3           2.179 4        0.894 3       0.541 2       0.555 6       0.448 6
                LF112         3           2.453 7        0.967 4       0.592 5       0.730 8       0.395 9
                LF128         2           1.989 8        0.690 6       0.497 4       0.928 6       0.493 5
                LF129         2           1.112 8        0.208 9       0.101 4       0.964 3       0.896 8
                LF171         3           2.179 4        0.878 9       0.541 2       0.592 6       0.448 6
                LF177         2           1.996 8        0.692 3       0.499 2       0.680 0       0.490 6
                LF188         2           1.990 5        0.690 8       0.497 6       0.275 9       0.493 6
                LF190         2           1.997 5        0.692 5       0.499 4       0.392 9       0.491 6
                LF206         2           1.997 3        0.692 5       0.499 3       0.925 9       0.491 3
                LF224         2           1.337 6        0.419 5       0.252 4       0.777 8       0.742 8
                LF229         2           1.997 3        0.692 5       0.499 3       0.407 4       0.491 3
                LF242         2           1.975 6        0.687 0       0.493 8       1.000 0       0.496 9
                LF245         2           1.997 3        0.692 5       0.499 3       0.777 8       0.491 3
                LF247         2           1.480 2        0.505 5       0.324 4       0.740 7       0.669 5
              平均值 Mean      2.333 3       1.957 4        0.708 5       0.468 3       0.722 6       0.522 8


            是枫香 EST ̄SSR 的重要分布特征ꎬ其重复基元分                         次数的增多而增加(刘佳奇等ꎬ2020)ꎬ而枫香主要
            布类型与大花四照花(Cornus florida) ( 刘佳奇等ꎬ                  基元重复次数为 5 ~ 12 次ꎬ并且主要基元以短重复
            2020 ) 和 黄 枝 油 杉 ( Keteleeria davidiana var.       类型为主ꎬ该 SSR 位点特征限制了枫香 SSR 的潜
            calcarea)相似(石远婷等ꎬ2021)ꎮ 从整体来看ꎬ枫                    在多态性ꎮ 内在原因主要是转录组 SSR 位点来自
            香转录组中 SSR 位点的数量和种类较为丰富ꎬ为                           序列相对保守的基因编码区ꎬ其多态性位点一般
            枫香 SSR 引物开发及后续研究提供了重要基础ꎮ                           位于功能序列的微卫星重复片段上ꎬ从而导致转
            3.2 枫香 EST ̄SSR 位点开发效率                              录组 SSR 多态性较低(杨世鹏等ꎬ 2018)ꎮ
                 本研究所设计的 262 对枫香 EST ̄SSR 引物有                   3.3 枫香 EST ̄SSR 引物多态性及群体遗传分析有
            效扩 增 率 为 53. 1%ꎬ 祁 雅 等 ( 2004) 和 魏 利 斌 等           效性评价
            (2008)研究指出的ꎬ所设计 EST ̄SSR 引物的有效                          衡量 SSR 引物可用性及多态性丰富度可以采
            扩增率应在 60% ~ 90%之间ꎮ 本研究有效扩增率                        用多态信息含量( PIC)、观测等位基因数( Na) 及
            较低的原因可能有以下三方面:第一ꎬ三至六碱基                             有效等位基因数(Ne)等参数ꎮ 在多态信息含量指
            重复类型的 SSR 位点占比较低(总计 19.46%)ꎬ使                      数方面ꎬ孙荣喜(2017)开发的 14 对枫香 SSR 引物
            得可供筛选的 SSR 位点总量偏少ꎻ第二ꎬ部分引物                          中包括 6 个高度多态性位点、4 个中度多态性位
            设计不合理ꎬ实验中所用引物均根据二代测序结                              点、4 个低度多态性位点ꎮ 与前两者的研究相比ꎬ
            果所得ꎬ二代测序在拼接过程中可能会存在一些                              本研究开发的 18 对枫香 SSR 引物中ꎬ10 对为高度
            错误ꎬ因而导致有效扩增率相对较低ꎻ第三ꎬ开发                             多态性位点ꎬ8 对为中度多态性位点ꎬ多态信息含
            的枫香 SSR 引物多态性比率较低(15.64%)ꎮ 主                       量较高ꎮ 在等位基因数方面ꎬ孙荣喜(2017) 在全
            要是由于 SSR 的潜在多态性会随着 SSR 基元重复                        国范围内开展的中国枫香树遗传多样性及谱系地
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